Кіріспе
Нуклеин қышқылы дегеніміз не?
Шарттардың ең қарапайым түрлерінде, нуклеин қышқылын алу - RNNA және / немесе DNA-ны үлгіден алып тастау және қажет емес барлық артық мөлшерде. Шығару процесі нуклеин қышқылдарын үлгіні шығарады және оларды кез-келген төменгі ағымдық қосымшаларға әсер ететін еріткіштер мен ластаушы заттардан босатады.
Нукле қышқылын алу туралы өтініштер
Тазартылған нуклеин қышқылдары әртүрлі қосымшалардың плютерінде қолданылады, бірнеше түрлі салаларда. Денсаулық сақтау, мүмкін, ол көп қолданылған аудан, сондықтан тазартылған РНҚ және ДНҚ-мен әртүрлі тестілеудің әр түрлі мақсаттары үшін қажет.
Денсаулық сақтау саласында нуклеин қышқылы экстракциясының қосымшалары:
- «NGS)
- SNP генотиптері
- массивке негізделген генотиптер
- Ферментті шектеу
- модификация ферменттерін қолдану арқылы талдайды (мысалы, кірпіш және клондау)
Сондай-ақ, денсаулық сақтаудан тыс басқа өрістер бар, онда нуклик қышқылы пайдаланылады, бірақ әкелік тестілеу, сот және геномикамен шектелмейді.
Нуклеин қышқылының қысқаша тарихы
ДНҚ экстракциясы1869 жылы Фридрих Мичер есімді Швейцария дәрігері бұрыннан белгілі изоляциямен жүргенде, ұзақ уақытқа созылады. Мичер жасушалардың химиялық құрамын анықтау арқылы өмірдің негізгі қағидаларын шешуге үміттенген. Лимфоциттермен сәтсіздікке ұшырағаннан кейін, ол тасталған таңғыштарда табылған лейкоциттерден ДНҚ-ның шикі тұнбасын ала алды. Ол мұны ұяшыққа, содан кейін ұяшыққа қосып, содан кейін ұяшықтарға Цитоплазманы қалдыру арқылы жасады, содан кейін ДНҚ-ны басқа ақуыздардан бөлу үшін протоколды жасады.
Miescher-дің құрылғаннан кейінгі зерттеулерінен кейін көптеген басқа ғалымдар алдын-ала дамып, ДНҚ-ны оқшаулау және тазарту техникасын дамытуға кетті. Эдвин Джозеф Кон, ақуыздық ғалым WW2 кезінде ақуызды тазартудың көптеген әдістерін жасады. Ол қан тамырларындағы осмотикалық қысымды ұстап тұруда маңызды қан плазмасының сарысуы бар сарысуды оқшаулау үшін жауап берді. Бұл сарбаздарды тірі ұстау үшін өте маңызды болды.
1953 жылы Фрэнсис Крик, Розалинд Франклинмен және Джеймс Уотсонмен бірге ДНҚ құрылымын анықтады, бұл нуклеин қышқылы нуклеотидтерінің екі жіптерінің екі жіптерінен жасалғанын көрсетеді. Бұл серпінді табу Месельсон мен Стахлға жол ашты, олар ДНҚ-ны Е. Коли бактерияларынан оқшаулай алды, өйткені олар ДНҚ-ны 1958 экспериментте көрсетті.
Нуклеин қышқылын алу әдістері
ДНҚ экстракциясының 4 кезеңі қандай?
Барлық өндіру әдістері бірдей негізгі қадамдармен қайнатыңыз.
Жасушаның бұзылуы. Бұл кезең жасуша лизисі деп те аталады, жасуша қабырғасын және / немесе жасуша мембранасын бұзуды қамтиды, олар қызықтыратын нуклеин қышқылдары бар жасушалық сұйықтықтарды шығарады.
Қажетсіз қоқыстарды жою. Бұған мембрана липидтері, ақуыздар және басқа қалаусыз нуклеин қышқылдары кіреді, олар төмен ағынды қолданбаларға кедергі келтіруі мүмкін.
Оқшаулау. Екі негізгі категориядан тұратын тазартылған Lysate-дан нуклеин қышқылдарын оқшаулаудың әртүрлі тәсілдері бар, олар екі негізгі санаттағы, ерітінді немесе қатты күй (келесі бөлімді қараңыз).
Шоғырлану. Нуклеин қышқылдары барлық басқа ластаушы заттар мен еріткіштерден оқшауланғаннан кейін, олар жоғары концентрацияланған элизде ұсынылған.
Экстракцияның екі түрі
Нуклеин қышқылының екі түрі бар - ерітінді негізінде және қатты мемлекеттік әдістер. Шешімге негізделген әдіс химиялық экстракция әдісі ретінде де белгілі, өйткені ол жасушаны сындыру және ядролық материалға қол жеткізіңіз. Бұл фенол және хлороформ сияқты органикалық қосылыстарды немесе аз зиянды, сондықтан ақуызаза к немесе кремний гелі сияқты пайдалы да зиянды емес.
Жасушаны ыдырату үшін әртүрлі химиялық өндіру әдістерінің мысалдары мыналарды қамтиды:
- мембрананың осмотикалық жыртылуы
- жасуша қабырғасының ферментативті ас қорыту
- мембрананы шешулену
- жуғыш заттармен
- Алкали емдеумен
Механикалық әдістер деп те аталатын қатты мемлекеттік әдістер, сонымен қатар ДНҚ қатты субстратпен әрекеттесуді қамтиды. ДНҚ байланыстыратын моншақ немесе молекуланы таңдау арқылы анализге болмайды, бірақ екеуін ажыратуға болады. Кремний мен магниттік моншақтарды қолдануды қоса, қатты фазалы экстракциялық әдістердің мысалдары.
Магнитті моншақты алу түсіндірілді
Магнитті моншақты алу әдісі
Магнитті моншақтарды қолдану мүмкіндігі алдымен Тревор Хоукинс берген АҚШ патентінде, Ақхед институтының ғылыми-зерттеу институтында танылды. Бұл патент генетикалық материалдарды магниттік моншақ болуы мүмкін қатты қолдаушы тасымалдаушымен байланыстыру арқылы мүмкін екенін мойындады. Принцип, сіз генетикалық материал байланыстыратын жоғары функционалды магниттік моншақты қолданасыз, оны генетикалық материал байланыстырады, оны содан кейін супернататтан бөлуге болады, оны супернатранттан бөліп, үлгіні ұстайтын кеменің сыртына қолданады.
Неліктен магниттік моншақты алуды қолдану керек?
Магнитті бисердің экстракциясы технологиясы тез және тиімді өндіру процедуралары үшін оның әлеуетіне байланысты басым болып келеді. Соңғы кездері қолайлы буферлік жүйелермен жоғары функционалды магниттік моншаларды игерумен айналысқан, олар нуклеин қышқылы экстракциясын және жұмыс процесін автоматтандыруға мүмкіндік берді, бұл ресурстармен және үнемді жұмыс ағынын береді. Сондай-ақ, магнитті моншақты алу әдістері ДНҚ-ның ұзағырақ бөлінетін ығысу күштерін тудыруы мүмкін центрифугалау қадамдарын қамтымайды. Бұл ДНҚ-ның ұзағырақ жіптері өзгеріссіз қалады, бұл геномикалар тестілеуінде маңызды.
POST TIME: қараша-25-2022