წარმატებული ამპლიფიკაციის რეაქციებისთვის აუცილებელია, რომ რეაქციის ინდივიდუალური კომპონენტები თითოეულ პრეპარატში იყოს სწორი კონცენტრაციით. გარდა ამისა, მნიშვნელოვანია, რომ არ მოხდეს დაბინძურება.
განსაკუთრებით მაშინ, როდესაც საჭიროა მრავალი რეაქციის დაყენება, დადგენილია ეგრეთ წოდებული მასტერ მიქსის მომზადება, თითოეული რეაგენტის ცალ-ცალკე პიპეტირების ნაცვლად თითოეულ ჭურჭელში. კომერციულად ხელმისაწვდომია წინასწარ კონფიგურირებული მიქსები, რომლებშიც ემატება მხოლოდ ნიმუშის სპეციფიკური კომპონენტები (პრაიმერი) და წყალი. ალტერნატიულად, მასტერ მიქსი შეგიძლიათ თავად მოამზადოთ. ორივე ვარიანტში ნარევი ნაწილდება თითოეულ PCR ჭურჭელში შაბლონის გარეშე და დნმ-ის ცალკეული ნიმუში ემატება ცალ-ცალკე ბოლოს.
მასტერ მიქსის გამოყენებას აქვს რამდენიმე უპირატესობა: პირველი, მცირდება ერთჯერადი პიპეტინგის საფეხურების რაოდენობა. ამ გზით, როგორც პიპეტინგის დროს მომხმარებლის შეცდომების, ისე დაბინძურების რისკი მინიმუმამდეა დაყვანილი და, რა თქმა უნდა, დაზოგავს დროს. პრინციპში, პიპეტინგის სიზუსტე ასევე უფრო მაღალია, რადგან უფრო დიდი მოცულობებია დოზირებული. ამის გაგება მარტივია პიპეტების ტექნიკური მონაცემების შემოწმებისას: რაც უფრო მცირეა დოზირებული მოცულობა, მით უფრო მაღალია გადახრები. ის ფაქტი, რომ ყველა პრეპარატი ერთი და იგივე ჭურჭლიდან მოდის, დადებითად მოქმედებს ერთგვაროვნებაზე (თუ კარგად არის შერეული). ეს ასევე აუმჯობესებს ექსპერიმენტების განმეორებადობას.
მასტერ მიქსის მომზადებისას უნდა დაემატოს მინიმუმ 10% დამატებითი მოცულობა (მაგ. თუ საჭიროა 10 პრეპარატი, გამოთვალეთ 11-ის საფუძველზე), რათა ბოლო ჭურჭელიც კი სწორად გაივსოს. ამ გზით, შესაძლებელია პიპეტინგის (მცირე) უზუსტობები და ნიმუშის დაკარგვის ეფექტი სარეცხი საშუალებების შემცველი ხსნარების დოზირებისას. სარეცხი საშუალებები შეიცავს ფერმენტულ ხსნარებს, როგორიცაა პოლიმერაზები და მასტერ ნარევები, რაც იწვევს ქაფის წარმოქმნას და ნარჩენებს ნორმალურ შიდა ზედაპირზე.პიპეტის რჩევები.
განაცხადიდან და გასაცემი სითხის ტიპებიდან გამომდინარე, უნდა შეირჩეს პიპეტინგის სწორი ტექნიკა (1) და შეირჩეს შესაბამისი აღჭურვილობა. სარეცხი საშუალებების შემცველი ხსნარებისთვის რეკომენდებულია პირდაპირი გადაადგილების სისტემა ან ეგრეთ წოდებული „დაბალი შეკავების“ პიპეტების წვერები, როგორც საჰაერო ბალიშის პიპეტების ალტერნატივა. ეფექტიACE PIPETTE წვერიდაფუძნებულია განსაკუთრებით ჰიდროფობიურ ზედაპირზე. სარეცხი საშუალებების შემცველი სითხეები არ ტოვებს ნარჩენ ფენას შიგნიდან და გარედან, ასე რომ ხსნარის დაკარგვა შეიძლება მინიმუმამდე იყოს.
გარდა ყველა კომპონენტის ზუსტი დოზირებისა, ასევე მნიშვნელოვანია, რომ არ მოხდეს პრეპარატების დაბინძურება. არ არის საკმარისი მაღალი სისუფთავის სახარჯო მასალების გამოყენება, რადგან პიპეტინგის პროცესი ჰაერის ბალიშის პიპეტში შეიძლება წარმოქმნას აეროზოლები, რომლებიც რჩება პიპეტში. დნმ, რომელიც შეიძლება შეიცავდეს აეროზოლს, შეიძლება გადავიდეს ერთი ნიმუშიდან მეორეზე პიპეტინგის შემდეგ ეტაპზე და ამით გამოიწვიოს დაბინძურება. ზემოთ ნახსენები პირდაპირი გადაადგილების სისტემებმა ასევე შეიძლება შეამცირონ ეს რისკი. საჰაერო ბალიშის პიპეტებისთვის აზრი აქვს ფილტრის წვერების გამოყენებას პიპეტის კონუსის დასაცავად ნაპერწკლების, აეროზოლების და ბიომოლეკულების შეკავებით.
გამოქვეყნების დრო: დეკ-06-2022