პროცესების სტანდარტიზაცია მოიცავს მათ ოპტიმიზაციას და შემდგომ ჩამოყალიბებას და ჰარმონიზაციას, რაც იძლევა გრძელვადიან ოპტიმალურ შესრულებას - მომხმარებლისგან დამოუკიდებლად. სტანდარტიზაცია უზრუნველყოფს მაღალი ხარისხის შედეგებს, ასევე მათ განმეორებადობას და შედარებას.
(კლასიკური) PCR-ის მიზანია საიმედო და გამეორებადი შედეგის გამომუშავება. გარკვეული აპლიკაციებისთვის, მოსავლიანობაPCR პროდუქტიასევე აქტუალურია. ამ რეაქციებისთვის საჭიროა ზრუნვა, რომ ნიმუშები არ იყოს კომპრომეტირებული და PCR სამუშაო ნაკადი დარჩეს სტაბილური. კერძოდ, ეს ნიშნავს დაბინძურების შეყვანის მინიმუმამდე შემცირებას, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს ცრუ დადებითი ან ცრუ უარყოფითი შედეგები ან თუნდაც დათრგუნოს PCR რეაქცია. გარდა ამისა, რეაქციის პირობები უნდა იყოს რაც შეიძლება იდენტური თითოეული ცალკეული ნიმუშისთვის პერსპექტივაში და ასევე უნდა გადავიდეს შემდგომ რეაქციებზე (იგივე მეთოდით). ეს ეხება რეაქციების შემადგენლობას, ასევე ციკლერში ტემპერატურის კონტროლის ტიპს. მომხმარებლის შეცდომები, რა თქმა უნდა, მაქსიმალურად უნდა იქნას აცილებული.
ქვემოთ წარმოგიდგენთ გამოწვევებს, რომლებიც წარმოიქმნება PCR-ის მომზადების დროს და მთელი პერიოდის განმავლობაში - და გადაწყვეტილებების მიდგომებს, რომლებიც არსებობს PCR სამუშაოების სტანდარტიზაციისთვის გამოყენებული ინსტრუმენტებისა და სახარჯო მასალების მიმართ.
რეაქციის მომზადება
რეაქციის კომპონენტების განაწილება PCR- ჭურჭელში ან ფირფიტებში, შესაბამისად, მოიცავს მრავალ გამოწვევას, რომელიც უნდა დაიძლიოს:
რეაქციის პირობები
ინდივიდუალური კომპონენტების ზუსტი და ზუსტი დოზირება შეუცვლელია, როდესაც მიზნად ისახავს ყველაზე იდენტური რეაქციის პირობებში. პიპეტინგის კარგი ტექნიკის გარდა, მნიშვნელოვანია სწორი ხელსაწყოს შერჩევა. PCR მასტერ-მიქსები ხშირად შეიცავს ნივთიერებებს, რომლებიც ზრდის სიბლანტეს ან წარმოქმნის ქაფს. პიპეტინგის პროცესის დროს, ეს იწვევს მისი არსებით დატენიანებასპიპეტის რჩევები, რითაც ამცირებს პიპეტინგის სიზუსტეს. პირდაპირი გაცემის სისტემების ან პიპეტების ალტერნატიული წვერების გამოყენებამ, რომლებიც ნაკლებად მიდრეკილია დასველებისკენ, შეუძლია გააუმჯობესოს პიპეტინგის პროცესის სიზუსტე და სიზუსტე.
დაბინძურებები
გაცემის პროცესის დროს წარმოიქმნება აეროზოლები, რომლებიც პიპეტის შიგნიდან შეღწევის ნებადართულია, შეიძლება პოტენციურად დაბინძურდეს სხვა ნიმუში პიპეტინგის შემდეგი ეტაპის დროს. ამის თავიდან აცილება შესაძლებელია ფილტრის რჩევების ან პირდაპირი გადაადგილების სისტემების გამოყენებით.
სახარჯო მასალები, როგორიცაარჩევებიჭურჭელი და ფირფიტები, რომლებიც გამოიყენება PCR სამუშაო პროცესში, არ უნდა შეიცავდეს ნივთიერებებს, რომლებიც აზიანებენ ნიმუშს ან აყალბებენ შედეგს. ეს მოიცავს დნმ-ს, დნაზებს, რნაზებს და PCR ინჰიბიტორებს, ასევე კომპონენტებს, რომლებიც შეიძლება პოტენციურად გამოირეცხოს მასალისგან რეაქციის დროს - ნივთიერებები, რომლებიც ცნობილია როგორც გამონაჟონი.
მომხმარებლის შეცდომა
რაც უფრო მეტი ნიმუშია დამუშავებული, მით უფრო მაღალია შეცდომის რისკი. შეიძლება ადვილად მოხდეს, რომ ნიმუში პიპეტით შევიდეს არასწორ ჭურჭელში ან არასწორ ჭაში. ეს რისკი შეიძლება მნიშვნელოვნად შემცირდეს ჭაბურღილების ადვილად შესამჩნევი მარკირებით. განაწილების ეტაპების ავტომატიზაციის მეშვეობით, „ადამიანის ფაქტორი“, ანუ შეცდომები და მომხმარებელთან დაკავშირებული ვარიაციები, მინიმუმამდეა დაყვანილი, რითაც იზრდება განმეორებადობა, განსაკუთრებით რეაქციის მცირე მოცულობის შემთხვევაში. ამისათვის საჭიროა საკმარისი განზომილებიანი სტაბილურობის ფირფიტები სამუშაო სადგურზე გამოსაყენებლად. მიმაგრებული შტრიხკოდები უზრუნველყოფს დამატებით მანქანით წაკითხვას, რაც ამარტივებს ნიმუშების მიკვლევას მთელი პროცესის განმავლობაში.
თერმოციკლერის პროგრამირება
ინსტრუმენტის დაპროგრამება შეიძლება იყოს როგორც შრომატევადი, ასევე შეცდომის მიდრეკილება. PCR თერმოციკლერის სხვადასხვა ფუნქციები ერთად მუშაობენ ამ პროცესის საფეხურის გასამარტივებლად და, რაც მთავარია, უსაფრთხოდ:
მარტივი ოპერაცია და კარგი მომხმარებლის ხელმძღვანელობა ეფექტური პროგრამირების საფუძველია. ამ საფუძველზე დაყრდნობით, პაროლით დაცული მომხმარებლის ადმინისტრაცია ხელს შეუშლის საკუთარი პროგრამების შეცვლას სხვა მომხმარებლების მიერ. თუ გამოიყენება რამდენიმე ციკლერი (იგივე ტიპის), სასარგებლოა პროგრამის გადატანა პირდაპირ ერთი ინსტრუმენტიდან მეორეზე USB ან კავშირის საშუალებით. კომპიუტერული პროგრამა იძლევა კომპიუტერზე პროგრამების, მომხმარებლის უფლებებისა და დოკუმენტების ცენტრალურ და უსაფრთხო ადმინისტრირებას.
PCR გაშვება
გაშვების დროს დნმ გაძლიერდება რეაქციის ჭურჭელში, სადაც თითოეული ნიმუში უნდა დაექვემდებაროს იდენტურ, თანმიმდევრულ რეაქციის პირობებს. პროცესისთვის აქტუალურია შემდეგი ასპექტები:
ტემპერატურის კონტროლი
ტემპერატურის კონტროლის შესანიშნავი სიზუსტე და ციკლერის ბლოკის ერთგვაროვნება არის ყველა ნიმუშის თანაბარი ტემპერატურის კონდიცირების საფუძველი. გათბობისა და გაგრილების ელემენტების მაღალი ხარისხი (პელტიეს ელემენტები), ისევე როგორც მათი მიერთების გზა ბლოკთან, არის გადამწყვეტი ფაქტორები, რომლებიც განსაზღვრავენ ტემპერატურის შეუსაბამობის რისკს, რომელიც ცნობილია როგორც "ზღვრის ეფექტი".
აორთქლება
რეაქციის ცალკეული კომპონენტების კონცენტრაცია არ უნდა შეიცვალოს რეაქციის განმავლობაში აორთქლების გამო. წინააღმდეგ შემთხვევაში, შესაძლებელია, რომ ძალიან ცოტაPCR პროდუქტიშეიძლება იყოს გენერირებული, ან საერთოდ არცერთი. ამიტომ გადამწყვეტი მნიშვნელობა აქვს აორთქლების მინიმუმამდე შემცირებას უსაფრთხო დალუქვის უზრუნველსაყოფად. ამ შემთხვევაში, თერმოციკლერის გახურებული სახურავი და ჭურჭლის ბეჭედი ხელიხელჩაკიდებულნი მუშაობენ. დალუქვის სხვადასხვა ვარიანტები ხელმისაწვდომიაPCR ფირფიტები (ბმული: დალუქვის სტატია), რომლის მიხედვითაც საუკეთესო დალუქვა მიიღწევა თბოდალუქვის საშუალებით. სხვა საკეტები ასევე შეიძლება იყოს შესაფერისი, თუ ციკლერის სახურავის საკონტაქტო წნევა შეიძლება დარეგულირდეს არჩეულ ლუქზე.
პროცესის სტანდარტიზაცია ხორციელდება გრძელვადიან პერსპექტივაში ზუსტი და გამეორებადი შედეგების უზრუნველსაყოფად. ეს მოიცავს აღჭურვილობის რეგულარულ მოვლას, რათა უზრუნველყოს ის ყოველთვის კარგ სამუშაო მდგომარეობაში. ყველა სახარჯო მასალა უნდა იყოს მუდმივად მაღალი ხარისხის ყველა წარმოებულ პარტიაში და გარანტირებული უნდა იყოს მათი საიმედო ხელმისაწვდომობა.
გამოქვეყნების დრო: ნოე-29-2022