როგორ უნდა მოხდეს მცირე მოცულობები ხელით სახელმძღვანელო პიპეტებით

რაც უფრო მეტი ყურადღება გამახვილებულია რეაგენტებისა და ხარჯების შემცირებაზე, უფრო მცირე მოცულობები დიდი მოთხოვნაა, მაგალითად, PCR MasterMix ან ფერმენტის რეაქციების მომზადებისთვის. მაგრამ მცირე მოცულობის პიპეტაცია 0.2 - 5 μL– დან ადგენს ახალ გამოწვევებს პიპეტინგის სიზუსტისა და სიზუსტისთვის. შემდეგი წერტილები აუცილებელია:

1. პიპეტი და წვერი ზომა: ყოველთვის შეარჩიეთ პიპეტი ყველაზე დაბალი ნომინალური მოცულობით და ყველაზე მცირე წვერი, რომ შეინარჩუნოთ ჰაერის ბალიში რაც შეიძლება მცირე. 1 μL EG- ის პიპეტებისას შეარჩიეთ 0.25 - 2.5 μl პიპეტი და შესაბამისი წვერი, ვიდრე 1 - 10 μL პიპეტი.
2. კალიბრაცია და მოვლა: აუცილებელია, რომ თქვენი პიპეტები სწორად იყოს დაკალიბრებული და შენარჩუნებული. პიპეტზე მცირე ზომის კორექტირება და გატეხილი ნაწილები იწვევს სისტემატური და შემთხვევითი შეცდომების მნიშვნელობების მასობრივ ზრდას. ISO 8655 -ის მიხედვით დაკალიბრება უნდა ჩატარდეს წელიწადში ერთხელ.
3. პოზიტიური გადაადგილების პიპეტები: შეამოწმეთ, გაქვთ თუ არა პოზიტიური გადაადგილების პიპეტი, რომელსაც აქვს დაბალი მოცულობის დიაპაზონი თქვენს ლაბორატორიაში. ზოგადად, ამ ტიპის პიპეტის გამოყენება იწვევს უკეთეს პიპეტინგს, რაც გამოიწვევს სიზუსტის და სიზუსტის თვალსაზრისით, ვიდრე კლასიკური საჰაერო ბაღის პიპეტები.
4. შეეცადეთ გამოიყენოთ უფრო დიდი მოცულობები: თქვენ შეიძლება გაითვალისწინოთ თქვენი ნიმუშის განზავება პიპეტისთვის უფრო დიდი მოცულობებით, იგივე რაოდენობით, საბოლოო რეაქციაში. ამან შეიძლება შეამციროს პიპეტინგის შეცდომები ძალიან მცირე ნიმუშის მოცულობით.

კარგი ინსტრუმენტის გარდა, მკვლევარს უნდა ჰქონდეს პიპეტინგის ძალიან კარგი ტექნიკა. განსაკუთრებული ყურადღება მიაქციეთ შემდეგ ნაბიჯებს:

1. წვერი დანართი: არ დააკლოთ პიპეტი წვერზე, რადგან ამან შეიძლება ზიანი მიაყენოს წვრილ წვერი ბოლოში, გამოიწვიოს თხევადი სხივის გადამისამართება ან დაზიანების ზარალი. გამოიყენეთ მხოლოდ მსუბუქი წნევა წვერის მიმაგრებისას და გამოიყენეთ პიპეტი საგაზაფხულო დატვირთული წვერიანი კონუსით.
2. პიპეტის ჩატარება: არ დაიჭიროთ პიპეტი თქვენს ხელში, ხოლო ელოდოთ ცენტრიფუგის, ციკლერს და ა.შ.
3. წინასწარი ქცევა: ჰაერის ტენიანობა წვერი და პიპეტი ამზადებს წვერი ნიმუშისთვის და თავიდან აიცილებს აორთქლებას გადაცემის მოცულობის მისწრაფებისას.
4. ვერტიკალური ასპირაცია: ეს ძალიან მნიშვნელოვანია მცირე მოცულობის მართვისას, რათა თავიდან აიცილოთ კაპილარული ეფექტი, რომელიც ხდება, როდესაც პიპეტი კუთხეში ტარდება.
5. Immersion სიღრმე: ჩაიძირეთ წვერი რაც შეიძლება ნაკლები, რათა თავიდან აიცილოთ თხევადი წვერი, კაპილარული ეფექტის გამო. საყრდენის წესი: რაც უფრო მცირეა წვერი და მოცულობა, მით უფრო დაბალია ჩასაფრების სიღრმე. ჩვენ გირჩევთ მაქსიმუმ 2 მმ, როდესაც მცირე მოცულობის პიპეტირებთ.
6. განაწილება 45 ° კუთხით: თხევადი ოპტიმალური ნაკადი გარანტირებულია, როდესაც პიპეტი ტარდება 45 ° კუთხით.
7. კონტაქტი გემის კედელთან ან თხევადი ზედაპირთან: მცირე მოცულობები შეიძლება სწორად განაწილდეს მხოლოდ მაშინ, როდესაც წვერი ტარდება გემის კედლის საწინააღმდეგოდ, ან ჩაიძიროს თხევად. წვერიდან ბოლო წვეთიდანაც კი შეიძლება ზუსტად განაწილდეს.
8. აფეთქება: აფეთქება სავალდებულოა დაბალი მოცულობის განაწილების შემდეგ, რომ გაათანაბროთ წვერიანი თხევადი ბოლო წვეთი. დარტყმა ასევე უნდა განხორციელდეს გემის კედლის საწინააღმდეგოდ. ფრთხილად იყავით, რომ არ მოიტანოთ ჰაერის ბუშტები ნიმუშში, თხევადი ზედაპირზე დარტყმის შესრულებისას.