როგორ გავაპიპეტოთ მცირე მოცულობები ხელის სახელმძღვანელო პიპეტებით

რამდენადაც მეტი აქცენტი კეთდება რეაგენტებისა და ხარჯების შემცირებაზე, უფრო მცირე მოცულობები დიდი მოთხოვნაა, მაგალითად, PCR Mastermix-ის ან ფერმენტული რეაქციების მოსამზადებლად. მაგრამ მცირე მოცულობის პიპეტირება 0.2-დან 5 μL-მდე აყენებს ახალ გამოწვევებს პიპეტინგის სიზუსტისა და სიზუსტისთვის. შემდეგი პუნქტები აუცილებელია:

1. პიპეტისა და წვერის ზომა: ყოველთვის აირჩიეთ პიპეტი ყველაზე დაბალი ნომინალური მოცულობით და ყველაზე პატარა წვერით, რათა ჰაერის ბალიში მაქსიმალურად პატარა იყოს. 1 μL პიპეტირებისას, მაგალითად, აირჩიეთ 0,25 – 2,5 μL პიპეტი და შესაბამისი წვერი, ვიდრე 1 – 10 μL პიპეტი.
2. კალიბრაცია და მოვლა: აუცილებელია, რომ თქვენი პიპეტები სათანადოდ იყოს დაკალიბრებული და მოვლილი. პიპეტზე მცირე კორექტირება და გატეხილი ნაწილები იწვევს სისტემური და შემთხვევითი შეცდომის მნიშვნელობების მასიურ ზრდას. კალიბრაცია ISO 8655-ის მიხედვით უნდა განხორციელდეს წელიწადში ერთხელ.
3. დადებითი გადაადგილების პიპეტები: შეამოწმეთ, გაქვთ თუ არა თქვენს ლაბორატორიაში დადებითი გადაადგილების პიპეტი დაბალი მოცულობის დიაპაზონით. ზოგადად, ამ ტიპის პიპეტების გამოყენება იწვევს პიპეტის უკეთეს შედეგს სიზუსტისა და სიზუსტის თვალსაზრისით, ვიდრე კლასიკური საჰაერო ბალიშის პიპეტების შემთხვევაში.
4. შეეცადეთ გამოიყენოთ უფრო დიდი მოცულობები: შეგიძლიათ განზავოთ თქვენი ნიმუში, რათა საბოლოო რეაქციაში უფრო დიდი მოცულობების პიპეტირება მოხდეს იმავე რაოდენობით. ამან შეიძლება შეამციროს პიპეტინგის შეცდომები ძალიან მცირე ნიმუშის მოცულობით.

გარდა კარგი ხელსაწყოსა, მკვლევარს უნდა ჰქონდეს ძალიან კარგი პიპეტინგის ტექნიკა. განსაკუთრებული ყურადღება მიაქციეთ შემდეგ ნაბიჯებს:

1. წვერის დამაგრება: არ დაამაგროთ პიპეტი წვერზე, რადგან ამან შეიძლება დააზიანოს წვრილი წვერის ბოლო, გამოიწვიოს თხევადი სხივის გადამისამართება ან დაზიანდეს ხვრელი. განახორციელეთ მსუბუქი წნევა მხოლოდ წვერის დამაგრებისას და გამოიყენეთ პიპეტი ზამბარით დატვირთული წვერის კონუსით.
2. პიპეტის დაჭერა: არ დაიჭიროთ პიპეტი ხელში ცენტრიფუგის, ციკლერის და ა.შ.
3. წინასწარ დატენიანება: წვერის და პიპეტის შიგნით ჰაერის დატენიანება ამზადებს წვერს ნიმუშისთვის და თავიდან აიცილებს აორთქლებას გადაცემის მოცულობის ასპირაციისას.
4. ვერტიკალური ასპირაცია: ეს ძალიან მნიშვნელოვანია მცირე მოცულობების დამუშავებისას, რათა თავიდან იქნას აცილებული კაპილარული ეფექტი, რომელიც წარმოიქმნება პიპეტის დახრილობის დროს.
5. ჩაძირვის სიღრმე: ჩაყარეთ წვერი რაც შეიძლება ნაკლებად, რათა თავიდან აიცილოთ სითხის შეღწევა წვერში კაპილარული ეფექტის გამო. ცერის წესი: რაც უფრო მცირეა წვერი და მოცულობა, მით უფრო დაბალია ჩაძირვის სიღრმე. ჩვენ გირჩევთ მაქსიმუმ 2 მმ-ს მცირე მოცულობის პიპეტირებისას.
6. გაცემა 45° კუთხით: სითხის ოპტიმალური გადინება გარანტირებულია, როდესაც პიპეტი ინახება 45° კუთხით.
7. შეხება ჭურჭლის კედელთან ან თხევად ზედაპირთან: მცირე მოცულობების სწორად განაწილება შესაძლებელია მხოლოდ მაშინ, როდესაც წვერი ჭურჭლის კედელთან არის მოკიდებული ან სითხეში ჩაეფლო. ბოლო წვეთიც კი შეიძლება ზუსტად გაიტანოს.
8. ამოფრქვევა: აფეთქება სავალდებულოა დაბალი მოცულობის გაცემის შემდეგ, რათა მოხდეს ბოლოში არსებული სითხის ბოლო წვეთიც კი. აფეთქება ასევე უნდა განხორციელდეს გემის კედელზე. ფრთხილად იყავით, რომ ნიმუშში ჰაერის ბუშტები არ შემოიტანოთ თხევადი ზედაპირზე აფეთქებისას.