Kanggo reaksi amplifikasi sing sukses, perlu yen komponen reaksi individu ana konsentrasi sing bener ing saben persiyapan. Kajaba iku, penting yen ora ana kontaminasi.
Utamane yen akeh reaksi kudu disetel, wis ditetepake kanggo nyiapake campuran master tinimbang pipetting saben reagen kanthi kapisah menyang saben kapal. Campuran sing wis dikonfigurasi wis ana komersial, sing mung siji komponen khusus kanggo conto (primer) lan banyu ditambahake. Utawa, campuran master bisa disiapake dhewe. Ing loro variasi, campuran disebar ing saben kapal PCR tanpa cithakan lan conto DNA individu ditambahake kapisah ing pungkasan.
Nggunakake campuran master duwe sawetara kaluwihan: dhisik, jumlah langkah pipeting tunggal dikurangi. Kanthi cara iki, loro risiko kesalahan pangguna sajrone pipetting lan risiko kontaminasi minimalisasi minimalisasi lan, mesthi wektu disimpen. Minangka prinsip, akurasi pipet uga luwih dhuwur, amarga volume luwih gedhe. Iki gampang dingerteni nalika mriksa data teknis pipette: volume dosis sing luwih cilik, luwih dhuwur panyimpangan bisa uga. Kasunyatan manawa kabeh persiapan asale saka kapal sing padha duwe efek positif ing homogeneity (yen dicampur). Iki uga nambah reproduksi saka eksperimen kasebut.
Nalika nyiapake campuran master, paling ora 10% volume tambahan kudu ditambahake (umpamane 10 persiapan dibutuhake, ngetung kanthi dhasar 11), saengga uga sing pungkasan sing diisi kanthi bener. Kanthi cara iki, (sithik) pipetting, lan efek saka sampel kerugian nalika dosis bahan sing ngemot bisa dibayar maneh. Penceran ana ing solusi enzim kayata polimerases lan nyawiji master, nyebabake pembentukan busuk lan residu ing permukaan sing normalTips Pipette.
Gumantung saka aplikasi lan jinis Cairan sing dispensasi, teknik pipa sing bener (1) kudu dipilih lan peralatan sing dipilih sing dipilih. Kanggo solusi sing ngemot pencuci, sistem pamindahan langsung utawa sing diarani "tipis pipette minangka alternatif kanggo pipette udara disaranake. Efek sakaTip Ace Pipetteadhedhasar lumahing hidrofobik khusus. Cairan sing ngemot pencaduan ora ninggalake film sisa ing njero ruangan lan njaba, supaya kelangan solusi bisa minimalake.
Kejabi dosis sing tepat komponen, uga penting manawa ora ana kontaminasi persiyapan kasebut. Ora cukup kanggo nggunakake consumables saka kemurnian sing dhuwur, amarga proses pipetis ing pipette bantalan udhara bisa ngasilake aerosol sing isih ana ing pipette. DNA sing bisa uga ana ing aerosol bisa ditransfer saka siji sampel menyang sabanjure ing langkah pipette ing ngisor iki lan kanthi mangkono nyebabake kontaminasi. Sistem pamindahan langsung sing kasebut ing ndhuwur bisa uga nyilikake risiko iki. Kanggo pipet pipet udara, bisa nggunakake tips panyaring kanggo nglindhungi tumpeng pipette kanthi nyetir splashes, aerosol, lan biomolekul.
Wektu Pos: Dec-06-2022