Kanggo reaksi amplifikasi sing sukses, komponen reaksi individu kudu ana ing konsentrasi sing bener ing saben persiapan. Kajaba iku, penting yen ora ana kontaminasi.
Utamane nalika akeh reaksi kudu diatur, wis ditetepake kanggo nyiyapake campuran master sing diarani tinimbang pipetting saben reagen kanthi kapisah menyang saben prau. Campuran sing wis dikonfigurasi kasedhiya kanthi komersial, sing mung ditambahake komponen khusus sampel (primer) lan banyu. Utawa, campuran master bisa disiapake dhewe. Ing loro varian, campuran kasebut disebarake menyang saben wadhah PCR tanpa cithakan lan sampel DNA individu ditambahake kanthi kapisah ing pungkasan.
Nggunakake campuran master wis sawetara kaluwihan: Kaping pisanan, jumlah langkah pipetting siji suda. Kanthi cara iki, risiko kesalahan pangguna nalika pipetting lan risiko kontaminasi diminimalisir lan, mesthi, wektu disimpen. Ing asas, akurasi pipetting uga luwih, amarga volume luwih gedhe dosis. Iki gampang dimangerteni nalika mriksa data teknis pipettes: Sing luwih cilik volume dosis, sing luwih dhuwur panyimpangan bisa . Kasunyatan manawa kabeh preparat teka saka prau sing padha duweni efek positif marang homogenitas (yen dicampur kanthi apik). Iki uga nambah reproducibility saka eksperimen.
Nalika nyiapake campuran master, paling sethithik 10% volume ekstra kudu ditambahake (umpamane, yen 10 preparasi dibutuhake, ngitung kanthi basis 11), supaya wadhah pungkasan diisi kanthi bener. Kanthi cara iki, (rada) ora akurat pipetting, lan efek mundhut sampel nalika dosis solusi sing ngemot deterjen bisa menehi ganti rugi. Deterjen ana ing solusi enzim kayata polimerase lan campuran master, nyebabake pembentukan busa lan residu ing permukaan njero normal.tips pipet.
Gumantung saka aplikasi lan jinis cairan sing bakal disedhiyakake, teknik pipetting sing bener (1) kudu dipilih lan peralatan sing cocog dipilih. Kanggo solusi sing ngemot deterjen, dianjurake sistem pamindahan langsung utawa sing disebut "penylametan kurang" tip pipette minangka alternatif kanggo pipettes bantalan udhara. Efek sakaACE PIPETTE tipadhedhasar lumahing utamané hidrofobik. Cairan sing ngemot deterjen ora ninggalake film ampas ing njero lan njaba, supaya ilang solusi bisa diminimalisir.
Saliyane dosis sing tepat kanggo kabeh komponen, penting yen ora ana kontaminasi saka persiapan kasebut. Iku ora cukup kanggo nggunakake consumables saka kemurnian dhuwur, amarga proses pipetting ing pipette bantalan udhara bisa gawé aerosol sing tetep ing pipette. DNA sing bisa ana ing aerosol bisa ditransfer saka siji sampel menyang sabanjure ing langkah pipetting ing ngisor iki lan kanthi mangkono nyebabake kontaminasi. Sistem pamindahan langsung sing kasebut ing ndhuwur uga bisa nyuda resiko iki. Kanggo pipette bantalan udhara, gunakake tips filter kanggo nglindhungi kerucut pipette kanthi nahan cipratan, aerosol, lan biomolekul.
Wektu kirim: Dec-06-2022