Cryovialumume digunakake kanggo panyimpenan kriogenik garis sel lan bahan biologi kritis liyane, ing dewar sing diisi nitrogen cair.

Ana sawetara tahapan kanggo njaga sukses sel ing nitrogen cair. Nalika prinsip dhasar yaiku pembekuan alon, teknik sing tepat sing digunakake gumantung saka jinis sel lan cryoprotectant sing digunakake. Ana sawetara pertimbangan safety lan praktik paling apik sing kudu digatekake nalika nyimpen sel ing suhu sing sithik.

Kiriman iki nduweni tujuan kanggo menehi ringkesan babagan carane cryovial disimpen ing nitrogen cair.

Apa sing Cryovials

Cryovial minangka bokor cilik sing ditutup lan dirancang kanggo nyimpen conto cairan ing suhu sing sithik. Padha mesthekake yen sel sing diawetake ing cryoprotectant ora kena kontak langsung karo nitrogen cair, nyuda resiko fraktur seluler nalika isih entuk manfaat saka efek pendinginan ekstrim saka nitrogen cair.

Vial biasane kasedhiya ing macem-macem volume lan desain - bisa dipasang ing njero utawa njaba kanthi dhasar sing rata utawa bunder. Format steril lan non-steril uga kasedhiya.

Sapa sing GunakakeCyrovialskanggo Simpen Sel ing Nitrogen Cairan

Sawetara laboratorium NHS lan swasta, uga institusi riset khusus ing perbankan getih tali, biologi sel epitelium, imunologi lan biologi sel stem nggunakake cryovial kanggo cryopreserve sel.

Sel sing diawetake kanthi cara iki kalebu Sel B lan T, Sel CHO, Hematopoietic Stem and Progenitor Cells, Hybridomas, Intestinal Cells, Makrophages, Mesenchymal Stem and Progenitor Cells, Monocytes, Myeloma, NK Cells and Pluripotent Stem Cells.

Ringkesan Cara Nyimpen Cryovial ing Nitrogen Cairan

Cryopreservation minangka proses sing ngreksa sel lan konstruk biologis liyane kanthi ngadhemake nganti suhu sing sithik banget. Sèl bisa disimpen ing nitrogen cair nganti pirang-pirang taun tanpa kelangan daya urip sel. Iki minangka garis saka tata cara sing digunakake.

Preparation sel

Cara sing tepat kanggo nyiapake conto bakal beda-beda gumantung saka jinis sel, nanging umume, sel dikumpulake lan disentrifugasi kanggo ngembangake pelet sing sugih sel. Pelet iki banjur digantung maneh ing supernatan sing dicampur karo cryoprotectant utawa medium cryopreservation.

Cryopreservation Medium

Medium iki digunakake kanggo ngreksa sel ing lingkungan suhu rendah sing bakal ditindakake kanthi nyegah pembentukan kristal intra lan ekstrasel lan mula mati sel. Tugase yaiku nyedhiyakake lingkungan sing aman lan protèktif kanggo sel lan jaringan sajrone proses pembekuan, panyimpenan, lan pencairan.

Sawijining medium kayata plasma beku seger (FFP), larutan plasmalyte heparinised utawa bebas serum, solusi bebas komponen kewan dicampur karo cryoprotectants kayata dimethyl sulphoxide (DMSO) utawa gliserol.

Pelet sampel sing dicairake maneh diasingake dadi cryovial polypropylene kayataPerusahaan Biomedis Suzhou Ace Cryogenic Storage Vials.

Penting ora kanggo ngisi cryovials amarga iki bakal nambah risiko retak lan bisa ngeculake isi (1).

Tingkat beku sing dikontrol

Umumé, tingkat pembekuan sing dikontrol alon digunakake kanggo kriopreservasi sel sing sukses.

Sawise conto dilebokake ing bokor cryogenic, diselehake ing es udan utawa ing kulkas 4 ℃ lan prosedur pembekuan diwiwiti sajrone 5 menit. Minangka pandhuan umum, sel digawe adhem kanthi kecepatan -1 nganti -3 saben menit (2). Iki digayuh kanthi nggunakake cooler sing bisa diprogram utawa kanthi nyelehake bokor ing kothak terisolasi sing diselehake ing mesin pembeku tingkat kontrol -70 ° C nganti -90 ° C.

Transfer menyang Nitrogen Cairan

Botol kriogenik sing beku banjur ditransfer menyang tangki nitrogen cair kanggo wektu sing ora ditemtokake yen suhu kurang saka -135 ℃ dijaga.

Suhu ultra-rendah iki bisa diduweni kanthi nyemplungake ing nitrogen fase cair utawa uap.

Fase Cairan utawa Uap?

Panyimpenan ing nitrogen fase cair dikenal kanggo njaga suhu sing adhem kanthi konsistensi mutlak, nanging asring ora dianjurake amarga alasan ing ngisor iki:

• Kebutuhan volume gedhe (ambane) nitrogen cair sing bisa mbebayani. Burns utawa asphyxiation amarga iki resiko nyata.
• Kasus kontaminasi silang sing didokumentasikake dening agen infèksius kayata aspergillus, hep B lan panyebaran virus liwat medium nitrogen cair (2,3)
• Potensi nitrogen cair bocor menyang bokor nalika dicelupake. Nalika dicopot saka panyimpenan lan dipanasake nganti suhu kamar, nitrogen kanthi cepet ngembang. Akibate, vial bisa pecah nalika dicopot saka panyimpenan nitrogen cair, nyebabake bebaya saka puing-puing sing mabur lan paparan isine (1, 4).

Kanggo alasan kasebut, panyimpenan suhu ultra-rendah biasane ana ing nitrogen fase uap. Nalika conto kudu disimpen ing fase cair, tabung cryoflex khusus kudu digunakake.

Kelemahane fase uap yaiku gradien suhu vertikal bisa nyebabake fluktuasi suhu antarane -135 ℃ lan -190 ℃. Iki mbutuhake ati-ati lan sregep ngawasi tingkat nitrogen Cairan lan variasi suhu (5).

Akeh manufaktur nyaranake yen cryovial cocok kanggo panyimpenan nganti -135 ℃ utawa mung kanggo fase uap.

Ngilangi Sel Cryopreserved Panjenengan

Prosedur thawing nyebabake stres kanggo budaya beku, lan penanganan lan teknik sing tepat dibutuhake kanggo njamin kelangsungan, pemulihan, lan fungsi sel sing optimal. Protokol thawing sing tepat bakal gumantung ing jinis sel tartamtu. Nanging, thawing cepet dianggep standar kanggo:

• Ngurangi impact ing Recovery seluler
• Mbantu nyuda wektu cahya kanggo solute sing ana ing media pembekuan
• Nyilikake karusakan kanthi rekristalisasi es

Adus banyu, adus manik, utawa instrumen otomatis khusus sing umum digunakake kanggo thaw conto.

Paling asring 1 garis sel dilebur ing wektu 1-2 menit, kanthi alon-alon swirling ing adus banyu 37 ℃ nganti mung ana es cilik sing isih ana ing vial sadurunge dicuci ing medium pertumbuhan sing wis dipanasake.

Kanggo sawetara sel kayata embrio mamalia, pamanasan sing alon penting kanggo urip.

Sèl saiki wis siyap kanggo kultur sel, isolasi sel, utawa ing kasus sel stem haematopoietik - studi viabilitas kanggo njamin integritas sel stem donor sadurunge terapi myeloablative.

Praktek normal kanggo njupuk aliquot cilik saka sampel sing wis dicuci sing digunakake kanggo ngetung sel kanggo nemtokake konsentrasi sel kanggo plating ing budaya. Sampeyan banjur bisa netepake asil prosedur isolasi sel lan nemtokake daya tahan sel.

Praktek Paling Apik kanggo Panyimpenan Cryovial

Kriopreservasi sing sukses saka conto sing disimpen ing cryovial gumantung saka akeh unsur ing protokol kalebu panyimpenan lan panyimpenan sing tepat.

• Pisah sel antarane lokasi panyimpenan- Yen volume ngidini, pamisah sel ing antarane bokor lan simpen ing lokasi sing kapisah kanggo nyuda resiko mundhut sampel amarga gagal peralatan.
• Nyegah kontaminasi silang– Pilih bokor kriogenik steril siji-guna utawa autoklaf sadurunge digunakake sakteruse
• Gunakake bokor ukuran sing cocog kanggo sel sampeyan- vials kasedhiya ing sawetara volume antarane 1 lan 5mls. Aja ngisi bokor sing berlebihan kanggo nyuda resiko retak.
• Pilih bokor kriogenik internal utawa eksternal- Vial internal disaranake dening sawetara universitas kanggo langkah-langkah safety - uga bisa nyegah kontaminasi nalika ngisi utawa disimpen ing nitrogen cair.
• Nyegah Kebocoran- Gunakake segel bi-nyuntikaken nyetak menyang screw-cap utawa O-rings kanggo nyegah bocor lan kontaminasi.
• Gunakake barcode 2D lan botol label- kanggo mesthekake traceability, bokor kanthi area nulis sing gedhe ngidini saben botol diwenehi label sing cukup. Barcode 2D bisa mbantu manajemen panyimpenan lan nyimpen rekaman. Tutup kode warna migunani kanggo identifikasi sing luwih gampang.
• Pangopènan panyimpenan cekap- Kanggo mesthekake yen sel ora ilang, prau panyimpenan kudu terus-terusan ngawasi suhu lan tingkat nitrogen cair. Weker kudu dipasang kanggo menehi tandha manawa pangguna kesalahan.

Pancegahan Safety

Nitrogen cair wis dadi praktik umum ing riset modern nanging nggawa risiko ciloko serius yen digunakake kanthi ora bener.

Peralatan pelindung pribadi (PPE) sing tepat kudu dianggo kanggo nyuda resiko frostbite, kobong lan kedadeyan ala liyane nalika nangani nitrogen cair. Nganggo

• Sarung tangan cryogenic
• Jas laboratorium
• Tameng rai lengkap tahan benturan sing uga nutupi gulu
• Sepatu sing ditutup
• Apron plastik anti cipratan

Kulkas nitrogen cair kudu diselehake ing wilayah sing duwe ventilasi sing apik kanggo nyuda resiko sesak napas - nitrogen sing lolos nguap lan ngganti oksigen ing atmosfer. Toko volume gedhe kudu duwe sistem weker oksigen sing sithik.

Makarya kanthi pasangan nalika nangani nitrogen cair iku becik lan panggunaan ing njaba jam kerja normal kudu dilarang.

Cryovials kanggo Ndhukung Workflow Panjenengan

Perusahaan Suzhou Ace Biomedical nawakake macem-macem pilihan produk sing nyukupi kabutuhan cryopreservation kanggo macem-macem jinis sel. Portofolio kalebu sawetara tubesas uga sawetara cryovials steril.

cryovials kita yaiku:

• Tutup Sekrup Lab 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Vial Conical Bottom Cryotube karo Gasket

  ● spesifikasi 0.5ml,1.5ml,2.0ml, nganggo rok utawa tanpa rok
  ● Conical utawa poto ngadeg desain, steril utawa non-steril loro kasedhiya
  ● tabung tutup Screw digawe saka polypropylene kelas medis
  ● PP Cryotube Vials bisa bola-bali beku lan thawed
  ●Desain tutup njaba bisa nyuda kemungkinan kontaminasi sajrone perawatan sampel.
  ● Tutup Screw tabung cryogenic Utas meneng universal kanggo nggunakake
  ● Tabung pas rotors paling umum
  ● Tabung o-ring tabung cryogenic pas karo kothak beku standar 1-inch lan 2-inch, 48well, 81well, 96well lan 100well
  ● Autoclavable kanggo 121 ° C lan freezable kanggo -86 ° C

  BAGIAN NO	MATERI	VOLUME	KABWARNA	PCS/TAS	TAS / CASE
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Ireng, Kuning, Biru, Abang, Ungu, Putih	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Ireng, Kuning, Biru, Abang, Ungu, Putih	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Ireng, Kuning, Biru, Abang, Ungu, Putih	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Ireng, Kuning, Biru, Abang, Ungu, Putih	500	10