Standarisasi proses kalebu optimasi lan panyiapan lan harmonisasi sabanjure, ngidini kinerja optimal jangka panjang - ora gumantung saka pangguna. Standardisasi njamin asil sing berkualitas, uga reproduktifitas lan komparatif.
Tujuan PCR (klasik) yaiku ngasilake asil sing bisa dipercaya lan bisa direproduksi. Kanggo aplikasi tartamtu, ngasilaken sakaproduk PCRuga relevan. Kanggo reaksi kasebut, kudu ati-ati kanggo mesthekake yen conto ora dikompromi lan alur kerja PCR tetep stabil. Khususé, iki nerjemahake kanggo nyilikake introduksi kontaminasi sing bisa nyebabake asil positif utawa negatif palsu utawa malah nyandhet reaksi PCR. Salajengipun, kawontenan reaksi kedah identik sabisa-bisa kanggo saben sampel ing sajeroning lari lan uga bisa ditransfer menyang reaksi sabanjure (saka cara sing padha). Iki nuduhake komposisi reaksi uga jinis kontrol suhu ing cycler. Kesalahan pangguna, mesthi, kudu dihindari sabisane.
Ing ngisor iki, kita bakal nduduhake tantangan sing ditemoni sajrone nyiapake lan sajrone nglakokake PCR - lan pendekatan kanggo solusi sing ana gegayutan karo instrumen lan bahan konsumsi sing digunakake kanggo standarisasi alur kerja PCR.
Persiapan reaksi
Dispensing komponen reaksi menyang PCR-vessels, utawa piring, masing-masing, ngemot pirang-pirang tantangan sing kudu diatasi:
Kondisi reaksi
Dosis sing tepat lan tepat saka komponen individu penting banget nalika ngarahake kahanan reaksi sing paling padha. Saliyane teknik pipetting sing apik, milih alat sing bener penting banget. Campuran master PCR asring ngemot zat sing nambah viskositas utawa ngasilake busa. Sajrone proses pipetting, iki mimpin kanggo wetting substansial sakatips pipet, saéngga nyuda akurasi pipetting. Panganggone sistem dispensing langsung utawa tips pipette alternatif sing kurang rentan kanggo wetting bisa nambah akurasi lan tliti proses pipetting.
Kontaminasi
Sajrone proses dispensing, aerosol diasilake sing, yen diidini tekan ing njero pipette, bisa nyebabake kontaminasi sampel liyane sajrone langkah pipetting sabanjure. Iki bisa dicegah kanthi nggunakake tips filter utawa sistem pamindahan langsung.
Consumables kayatatips, prau lan piring sing digunakake ing alur kerja PCR kudu ora ngemot zat sing kompromi sampel utawa palsu asil. Iki kalebu DNA, DNases, RNases lan inhibitor PCR, uga komponen sing bisa larut saka materi sajrone reaksi - zat sing dikenal minangka leachable.
Kesalahan pangguna
Luwih akeh conto sing diproses, luwih dhuwur risiko kesalahan. Iku bisa gampang kelakon sing sampel pipetted menyang prau salah utawa sumur salah. Resiko iki bisa dikurangi kanthi cara menehi tandha sumur kanthi gampang. Liwat otomatisasi langkah-langkah dispensing, "faktor manungsa", yaiku, kesalahan lan variasi sing gegandhengan karo pangguna, diminimalisir, saéngga nambah reproducibility, utamane ing volume reaksi cilik. Iki mbutuhake piring kanthi stabilitas dimensi sing cukup kanggo digunakake ing stasiun kerja. Barcode sing ditempelake nyedhiyakake keterbacaan mesin tambahan, sing nyederhanakake pelacakan sampel ing kabeh proses.
Pemrograman saka thermocycler
Pemrograman instrumen bisa mbuktekaken dadi akeh wektu lan uga rawan kesalahan. Fitur cycler termal PCR sing beda-beda bisa digunakake kanggo nyederhanakake langkah proses iki lan, sing paling penting, supaya aman:
Operasi sing gampang lan tuntunan pangguna sing apik minangka dhasar pemrograman sing efisien. Mbangun dhasar iki, administrasi pangguna sing dilindhungi sandi bakal nyegah program dhewe supaya ora diowahi dening pangguna liyane. Yen sawetara cyclers (saka jinis padha) digunakake, iku ono gunane yen program bisa ditransfer langsung saka siji instrument liyane liwat USB utawa panyambungan. Piranti lunak komputer mbisakake administrasi pusat lan aman program, hak pangguna lan dokumen ing komputer.
PCR mlaku
Sajrone mlaku, DNA digedhekake ing wadhah reaksi, ing ngendi saben sampel kudu ngalami kondisi reaksi sing padha lan konsisten. Aspek ing ngisor iki cocog kanggo proses kasebut:
Kontrol suhu
Akurasi banget ing kontrol suhu lan homogeneitas blok cycler minangka basis kanggo kahanan suhu kabeh sampel. Kualitas dhuwur saka unsur pemanasan lan pendinginan (elemen peltier), uga cara disambungake menyang blok, minangka faktor penentu sing bakal nemtokake risiko bedo suhu sing dikenal minangka "efek pinggiran".
Penguapan
Konsentrasi komponen reaksi individu ora kena owah sajrone reaksi amarga penguapan. Yen ora, iku bisa sing banget sethitikproduk PCRbisa digawe, utawa ora ana. Mulane penting banget kanggo nyilikake penguapan kanthi njamin segel sing aman. Ing kasus iki, tutup digawe panas saka thermocycler lan segel prau makarya ing tangan. Pilihan sealing beda kasedhiya kanggoPlat PCR (link: artikel segel), ing ngendi segel paling apik digayuh liwat sealing panas. Penutupan liyane uga cocok, anggere tekanan kontak tutup cycler bisa diatur menyang segel sing dipilih.
Standarisasi proses ditindakake supaya bisa njaga asil sing akurat lan bisa direproduksi ing jangka panjang. Iki kalebu pangopènan biasa saka peralatan kanggo mesthekake yen iku tansah ing kondisi bisa digunakake. Kabeh bahan konsumsi kudu konsisten kualitas dhuwur ing kabeh persil diprodhuksi, lan kasedhiyan dipercaya kudu dijamin.
Wektu kirim: Nov-29-2022