Sanajan ing teori, siji molekul template bakal cukup, jumlah DNA sing luwih gedhe biasane digunakake kanggo PCR klasik, umpamane, nganti 1 taun saka DNA sing plasmid. Jumlah optimal gumantung saka jumlah salinan urutan target, uga kerumitan.
Yen template cilik banget digunakake, kenaikan sing cocog karo jumlah siklus amplifikasi sing dibutuhake kanggo entuk produk sing cukup. A polimerase Tai sing digunakake kanggo eksperimen PCR sing paling ora nampilake fungsi koreksi (kegiatan helonuklease 3'-5); Mangkono, kesalahan dumadi sajrone amplifikasi ora bisa didandani. Jumlah siklus sing luwih dhuwur, luwih akeh amplifikasi produk cacat. Yen, ing tangan liyane, Jumlah template dhuwur banget, kemungkinan pemurutan primer menyang liyane (ora satus saben atus persender tambahan, uga pambentukan dimer primer, bakal nambah, sing bakal nyebabake ampliification By-produk. Ing pirang-pirang kasus, DNA diisolasi saka budaya sel utawa saka mikroorganisme lan banjur digunakake minangka template PCR. Dipuntedahake pemurnian, perlu kanggo nemtokake konsentrasi DNA supaya bisa netepake volume sing dibutuhake kanggo persiyapan PCR. Nalika elektrophoresis gel sing bisa digunakake kanggo nyedhiyakake perkiraan, cara iki adoh saka akurat. Spectrophotometometomo UV-Vis wis ditetepake minangka standar emas kanggo jumlah asam nukleat; Cara langsung lan mulane iki kanthi cepet lan cepet ngukur penyerapan sampel kasebut ing 260 nm, lan konsentrasi diwilang kanthi bantuan faktor konversi.
Yen konsentrasi DNA sithik banget, nanging (<1 μg / ml yen kontaminasi bahan-bahan sing uga nyerep ing kisaran 260, uyah iki bakal tekan watesan. Ing kasus konsentrasi banget, wacan bakal ora akurat banget kanggo nggunakake, lan kontaminasi bakal nyebabake (kadhangkala gedhe banget) overestimasi nyata. Ing kasus iki, jumlah nggunakake Fluoresensi bisa nampilake alternatif. Teknik iki adhedhasar panggunaan pewarna fluorescent sing ikatan khusus kanggo DSDNA mung komplek sing kalebu cahya, lan mengko nambah cahya gelombang sing luwih dhuwur. Ing kene, intensitas sinyal fluorescent minangka proporsi kanggo jumlah DNA, lan kanggo nemtokake konsentrasi kasebut dievaluasi hubungane karo kurva standar. Kauntungan saka metode iki liyane babagan spesifik jaminan, sing ora kalebu pengaruh eksternal, uga ing kemampuan asil kanggo ndeteksi konsentrasi DNA sing sithik. Kesesuaian salah siji metode gumantung saka konsentrasi sampel lan kesucian; Ing pirang-pirang kasus, bisa uga kudu menehi saran kanggo ngetrapake loro cara sing padha karo podo.
Wektu Pos: Nov-30-2022