クリオビアル液体窒素で満たされた露頭で、細胞株およびその他の重要な生物学的材料の極低温貯蔵に一般的に使用されます。

液体窒素の細胞の保存の成功にはいくつかの段階があります。基本原則はゆっくりと凍結することですが、使用される正確な手法は、使用される細胞型と凍結防止剤に依存します。このような低温で細胞を保存する際に考慮すべき安全上の考慮事項とベストプラクティスがいくつかあります。

この投稿の目的は、凍結窒素に凍結動物がどのように保存されるかの概要を示すことを目的としています。

極度とは何ですか

クリオビアルは、非常に低い温度で液体サンプルを保管するために設計された小さく、キャップされたバイアルです。彼らは、凍結保護剤に保存された細胞が液体窒素と直接接触しないことを保証し、液体窒素の極端な冷却効果の恩恵を受けながら、細胞骨折のリスクを最小限に抑えます。

バイアルは通常、さまざまなボリュームとデザインで利用できます。それらは、平らな底または丸い底で内部または外部的にねじ込むことができます。滅菌および非滅菌形式も利用できます。

誰が使用しますかCyrovials細胞を液体窒素に保存します

さまざまなNHSおよび民間研究所、および臍帯血銀行、上皮細胞生物学、免疫学、幹細胞生物学を専門とする研究機関が細胞を使用して細胞を使用します。

このように保存された細胞には、BおよびT細胞、CHO細胞、造血幹細胞および前駆細胞、ハイブリドーマ、腸細胞、マクロファージ、間葉系幹細胞、前駆細胞、単球、骨髄腫、NK細胞および多能性幹細胞が含まれます。

液体窒素に凍結液を保存する方法の概要

凍結保存は、細胞や他の生物学的構造を非常に低い温度に冷却することにより保存するプロセスです。細胞は、細胞生存率を失うことなく、液体窒素に何年も保存できます。これは、採用されている手順の概要です。

細胞調製

サンプルを調製する正確な方法は、細胞型によって異なりますが、一般に、細胞が収集され、細胞が豊富なペレットが発生するように遠心分離されます。このペレットは、凍結防止剤または凍結保存媒体と混合した上清に再懸濁されます。

凍結保存媒体

この媒体は、細胞内および細胞外結晶の形成、したがって細胞死の形成を阻害することにより、それらが受ける低温環境に細胞を保存するために使用されます。彼らの役割は、凍結、貯蔵、および解凍プロセス中に細胞と組織に安全で保護環境を提供することです。

新鮮な凍結血漿（FFP）、ヘパリン化プラスマライト溶液、または血清を含まない動物成分を含まない溶液などの培地は、ジメチルスルホキシド（DMSO）やグリセロールなどの凍結防止剤と混合されます。

再溶解されたサンプルペレットは、蘇州エース生物医学会社の極低温貯蔵バイアル.

これにより、ひび割れのリスクと内容物の放出の可能性が増加するため、凍結液を克服しないことが重要です（1）。

制御凍結速度

一般に、細胞の凍結保存が成功するために、ゆっくりと制御された凍結速度が採用されています。

サンプルが極低温バイアルにアリコートされた後、それらは湿った氷または4℃の冷蔵庫に置かれ、5分以内に凍結手順が開始されます。一般的なガイドとして、細胞は毎分-1〜 -3の速度で冷却されます（2）。これは、プログラム可能なクーラーを使用して、または–70°Cから–90°Cの制御速度冷凍庫に配置された断熱ボックスにバイアルを配置することにより実現されます。

液体窒素に移します

凍結した極低温バイアルは、-135が維持されている温度が維持されている場合、無期限に液体窒素タンクに移します。

これらの超低温は、液体または蒸気相窒素に浸ることによって得られます。

液体または蒸気相？

液相窒素の貯蔵は、絶対的な一貫性で低温温度を維持することが知られていますが、以下の理由で推奨されないことがよくあります。

• 潜在的な危険である液体窒素の大量（深さ）の必要性。これによる火傷または窒息は本当のリスクです。
• 液体窒素培地を介してアスペルギルス、HEP B、ウイルス拡散などの感染性剤による相互汚染の文書化された症例（2,3）
• 液体窒素が浸漬中にバイアルに漏れる可能性。貯蔵から除去され、室温まで温めた場合、窒素は急速に膨張します。その結果、バイアルは液体窒素貯蔵から除去すると粉砕され、空飛ぶ破片と内容物への暴露の両方から危険をもたらします（1、4）。

これらの理由により、超低温度貯蔵は蒸気相窒素で最も一般的です。サンプルを液相に保存する必要がある場合、特殊な極度チューブを使用する必要があります。

蒸気相のマイナス面は、垂直温度勾配が発生し、-135℃から-190の間の温度変動が生じる可能性があることです。これには、液体窒素レベルと温度変動の慎重かつ勤勉な監視が必要です（5）。

多くのメーカーは、クライオリアルが-135℃までの貯蔵または蒸気相でのみ使用に適していることを推奨しています。

凍結保存された細胞を解凍します

解凍手順は凍結された培養にストレスがかかり、細胞の最適な実行可能性、回復、機能性を確保するために適切な取り扱いと手法が必要です。正確な解凍プロトコルは、特定の細胞タイプに依存します。ただし、迅速な解凍は以下の標準と見なされます。

• 細胞の回復への影響を減らします
• 凍結媒体に存在する溶質への露出時間を短縮するのに役立ちます
• 氷の再結晶による損傷を最小限に抑えます

水浴、ビーズバス、または特殊な自動化された機器は、サンプルを解凍するために一般的に使用されます。

最も頻繁に1つの細胞株は、1〜2分間、1〜2分間解凍され、37℃の水浴でゆっくりと渦巻くことにより、事前に包まれた成長媒体で洗浄する前に、バイアルにほんの少しの氷が残るまでゆがみます。

哺乳類の胚などの一部の細胞では、ゆっくりした温暖化が生存に不可欠です。

細胞は現在、細胞培養、細胞の分離、または造血幹細胞の場合に準備ができています。これは、骨髄性療法の前にドナー幹細胞の完全性を保証する生存率研究です。

培養中のめっきのための細胞濃度を決定するために細胞数を実行するために使用される、事前に粉砕されたサンプルの小さなアリコートを採取することは通常の習慣です。その後、細胞分離手順の結果を評価し、細胞生存率を決定できます。

クリオビアルの保管のためのベストプラクティス

凍結動物に保存されたサンプルの凍結保存の成功は、適切な保管と記録保持など、プロトコル内の多くの要素に依存します。

• ストレージの場所にセルを分割します- ボリュームが許可されている場合は、バイアル間にセルを分割し、それらを別々の場所に保管して、機器の故障によるサンプル損失のリスクを減らします。
• 相互汚染を防ぎます- その後使用する前に、使い捨ての滅菌極低温バイアルまたはオートクレーブを選ぶ
• セルに適切なサイズのバイアルを使用してください- バイアルには、1〜5mlsの範囲の範囲があります。亀裂のリスクを軽減するために、バイアルのオーバーフィージャーを避けてください。
• 内部または外部にねじれた極低温バイアルを選択します- 内部的にねじれたバイアルは、安全対策のために一部の大学から推奨されています。また、充填中または液体窒素に保管したときに汚染を防ぐこともできます。
• 漏れを防ぎます- 漏れや汚染を防ぐために、ネジcapまたはOリングに成形されたバイ挿入シールを使用します。
• 2Dバーコードとラベルバイアルを使用します- トレーサビリティを確保するために、大きなライティングエリアを持つバイアルは、各バイアルを適切にラベル付けすることができます。 2Dバーコードは、ストレージ管理と記録保持に役立ちます。色分けされたキャップは、識別を容易にするために役立ちます。
• 適切なストレージメンテナンス- 細胞が失われないようにするために、貯蔵容器は温度と液体窒素レベルを絶えず監視する必要があります。アラームは、ユーザーにエラーを警告するために取り付けられる必要があります。

安全上の注意

液体窒素は現代の研究で一般的な慣行となっていますが、誤って使用すると重傷のリスクがあります。

液体窒素を処理する際の凍傷、火傷、およびその他の不利な事故のリスクを最小限に抑えるために、適切な個人用保護具（PPE）を着用する必要があります。着る

• 極低温手袋
• 実験用コート
• 首を覆う耐衝撃性フルフェイスシールド
• 閉じたつま先の靴
• スプラッシュプラスチックのエプロン

液体窒素冷蔵庫は、窒素のリスクを最小限に抑えるために、換気の多い領域に配置する必要があります。窒素の脱出した窒素は蒸発し、大気酸素を変位させます。大量の店舗には、酸素アラームシステムが低い必要があります。

液体窒素を処理するときはペアで作業することが理想的であり、通常の労働時間以外での使用は禁止されるべきです。

あなたのワークフローをサポートするためのクリオビアル

Suzhou Ace Biomedical Companyは、さまざまな種類のセルの凍結保存のニーズを満たす幅広い製品を提供しています。ポートフォリオには、さまざまなチューブと無菌の凍結動脈の範囲が含まれています。

私たちの極度は次のとおりです。

• ラボスクリューキャップ0.5ml 1.5ml 2.0ml極寒の極低温バイアルコニカルボトムクライチューブ付きガスケット

  ●0.5ml、1.5ml、2.0ml仕様、スカート、またはスカートなし
  ●円錐形または自己スタンディングデザイン、滅菌または非滅菌はどちらも利用できます
  ●ネジキャップチューブは医療グレードのポリプロピレンで作られています
  ●PP cryotubeバイアルは繰り返し凍結して解凍できます
  ●外部キャップ設計は、サンプル処理中の汚染確率を減らすことができます。
  ●ネジキャップの極低温チューブ使用するためのユニバーサルスクリュースレッド
  ●チューブは最も一般的なローターに適合します
  ●極低温チューブOリングチューブは、標準1インチと2インチ、48well、81well、96well、100wellフリーザーボックスに適合します
  ●オートクレーブ121°Cで、-86°Cにフリーズ可能

  パート番号	材料	音量	キャップ色	PCS/バッグ	バッグ/ケース
  act05-bl-n	PP	0.5ml	黒、黄色、青、赤、紫、白	500	10
  act15-bl-n	PP	1.5ml	黒、黄色、青、赤、紫、白	500	10
  act15-bl-nw	PP	1.5ml	黒、黄色、青、赤、紫、白	500	10
  act20-bl-n	PP	2.0ml	黒、黄色、青、赤、紫、白	500	10