ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) は、生命科学研究室で使用される広く知られた方法の 1 つです。
PCR プレートは、サンプルまたは収集された結果の優れた処理と分析のために、第一級のプラスチックから製造されています。
薄く均質な壁を備えており、正確な熱伝達を実現します。
リアルタイムアプリケーションの準備として、DNA または RNA の微小な部分が隔離され、PCR プレートに保存されます。
PCR プレートはヒートシール効率が高く、熱の流れも制限します。
ただし、PCR プレートは効果的で信頼性が高くても、サンプルの処理中にエラーや不正確さが容易に無視できます。
したがって、良質で高品質のものを手に入れることに興味がある場合は、PCRプレート。信頼できる PCR プレートのメーカーに問い合わせることが理想的です。これにより、最良の取引が確実に得られます。
試薬やサンプルの汚染を避け、結果に不正確さが入り込むのを防ぐために従うべき注意事項をいくつか示します。
周囲の除菌
不純物の存在により、不正確な陽性または陰性が発生し、結果が疑わしくなります。
不純物や汚染物質は、無関係な DNA や化学添加物など、さまざまな形で発生し、最終的には反応の効率と有効性を低下させます。
PCR プレートの汚染率を大幅に減らす方法は数多くあります。
滅菌済みのフィルターチップを使用することも、ピペットを通ってサンプルに不純物が侵入するのを防ぐ効果的な方法です。
ピペットとラックで構成される完全にクリーンな機器セットを PCR 専用に使用します。これにより、実験室周囲への不純物や汚染物質の移動が無視できる程度になることが保証されます。
ピペット、ラック、ベンチに漂白剤、エタノールを使用して汚染物質を拭き取ります。
粒子汚染をさらに最小限に抑えるために、すべての PCR 反応用に予約スペースを割り当てます。
すべてのステップで清潔な手袋を使用し、頻繁に交換してください。
PCRプレート
テンプレートの濃度と純度を検査します。
PCR でサンプルを分析する際に使用されるベンチと機器は清浄度を維持する必要があります。分析と処理の前にサンプルの純度を検証することが不可欠です。
一般に、分析装置は DNA サンプルの濃度と純度レベルを考慮します。
260nm/280nmの吸光度比が1.8以上になるように努めてください。一方、その後の 230nm と 320nm の間の波長は不純物の識別に使用されます。
たとえば、カオトロピック塩やその他の有機化合物は 230nm の吸光度で検出されます。また、DNA サンプルの濁度も 320nm の吸光度で検出および検証されます。
PCR プレートに製品を過剰に充填しないようにする
複数の製品を同時に実行することが望ましいのですが、PCR プレートの相互汚染が発生します。
PCR プレートにさまざまな製品を過剰にロードすると、無駄が生じ、サンプルの確認が非常に困難になります。
アリコート PCR 試薬の記録を保管する
継続的な凍結/解凍サイクルやアリコートの頻繁な使用は、再結晶化により PCR 試薬、酵素、DNTP に損傷を与える可能性があります。
分析するサンプルを準備する際には、使用されるアリコートの割合を常に監視するように努めてください。
好ましい LIMS は、凍結または解凍される試薬およびサンプルの在庫と量を制御するのに適しています。
最適なアニーリング温度を選択してください。
間違ったアニーリング温度を選択して使用することも、PCR 結果にエラーが含まれるもう 1 つの方法です。
場合によっては、反応が計画通りに進まないこともあります。反応を成功させるためには、アニーリング温度を下げることが望ましい。
ただし、温度を下げると、偽陽性やプライマーダイマーが出現する可能性が高くなります。
正しいアニーリング温度を選択するための良い指標となるため、PCR プレートを使用する場合は融解曲線の分析を確認することが重要です。
プライマー設計ソフトウェアは設計を支援し、適切なアニーリング温度を提供して PCR プレートのエラーを直接減少させます。
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投稿時間: 2021 年 10 月 30 日