קריוביאליםמשמשים לרוב לאחסון קריוגני של קווי תאים וחומרים ביולוגיים קריטיים אחרים, במלאי חנקן נוזלים.

ישנם מספר שלבים המעורבים בשימור מוצלח של תאים בחנקן נוזלי. אמנם העיקרון הבסיסי הוא הקפאה איטית, אך הטכניקה המדויקת המופעלת תלויה בסוג התא ובקריאו -מגן המשמש. ישנם מספר שיקולי בטיחות ושיטות עבודה מומלצות לקחת בחשבון בעת ​​אחסון תאים בטמפרטורות כה נמוכות.

פוסט זה נועד לתת סקירה של אופן מאוחסן Cryovials בחנקן נוזלי.

מהם קריוביאלים

Cryovials הם בקבוקונים קטנים ומכוסים המיועדים לאחסון דגימות נוזלים בטמפרטורות נמוכות במיוחד. הם מבטיחים כי תאים שנשמרו ב- Cryoprotectant אינם באים במגע ישיר עם החנקן הנוזלי, וממזער את הסיכון לשברים סלולריים, תוך כדי נהנים מהשפעת הקירור הקיצונית של חנקן נוזלי.

הבקבוקונים זמינים בדרך כלל במגוון נפחים ועיצובים - הם יכולים להיות מושלכים פנימיים או חיצוניים עם תחתיות שטוחות או מעוגלות. ניתן להשיג גם פורמטים סטריליים ולא סטריליים.

מי משתמשCyrovialsלאחסן תאים בחנקן נוזלי

מגוון של NHS ומעבדות פרטיות, כמו גם מוסדות מחקר המתמחים בבנקאות בדם טבורי, ביולוגיה של תאי אפיתל, אימונולוגיה וביולוגיה של תאי גזע משתמשים בקריוביאלים לתאים קריופרטיים.

תאים שנשמרו בדרך זו כוללים תאי B ו- T, תאי CHO, תאי גזע המטופואטיים ותאי אבות, היברידומות, תאי מעיים, מקרופאגים, גזע מזנכימלי ותאי אבות, מונוציטים, מיאלומה, תאי NK ותאי גזע פלוריפוטנטיים.

סקירה כללית כיצד לאחסן קריוביות בחנקן נוזלי

שימור קריאה הוא תהליך המשמר תאים ומבנים ביולוגיים אחרים על ידי קירורם לטמפרטורות נמוכות מאוד. ניתן לאחסן תאים בחנקן נוזלי במשך שנים ללא אובדן כדאיות התא. זהו מתווה של הנהלים שנעשו.

הכנת תאים

השיטה המדויקת להכנת דגימות תשתנה בהתאם לסוג התא, אך באופן כללי, התאים נאספים וצנטריפוגים לפיתוח גלולה עשירה בתאים. לאחר מכן הגלולה הזו מוחזקת מחדש בסופר -נפט מעורבב עם קריאה -פרוטקטנט או במדיום לשימור קריאה.

מדיום שימור קריאה

מדיום זה משמש כדי לשמר תאים בסביבות בטמפרטורה נמוכה, הם יועברו על ידי עיכוב היווצרותם של גבישים תוך-תאיים ומכאן מוות של תאים. תפקידם לספק סביבה בטוחה ומגינה לתאים ורקמות במהלך תהליכי הקפאה, אחסון והפשרה.

אמצעי כמו פלזמה קפואה טרייה (FFP), תמיסת פלסמאליט מופרזת או פתרונות נטולי רכיב של בעלי חיים, מעורבב עם חומרי קריאה כמו דימתיל סולפוקסיד (DMSO) או גליצרול.

גלולה הדגימה המותאמת מחדש נובעת לכיוון קריוביות פוליפרופילן כמוחברת Suzhou Ace Biomedical Company.

חשוב לא למלא יתר על המידה את הקריוביאלים מכיוון שהדבר יגביר את הסיכון לפיצוח ושחרור אפשרי של התוכן (1).

שיעור הקפאה מבוקר

באופן כללי, נעשה שימוש בהקפאה מבוקרת איטית לצורך שימור קריאה מוצלח של תאים.

לאחר שהדגימות מושקעות לבקבוקונים קריוגניים, הם מונחים על קרח רטוב או במקרר 4 ℃ והליך ההקפאה מתחיל תוך 5 דקות. כמדריך כללי, התאים מקוררים בקצב של -1 עד 3 לדקה (2). זה מושג באמצעות צידנית ניתנת לתכנות או על ידי הנחת בקבוקונים בתיבה מבודדת המונחת במקפיא של –70 מעלות צלזיוס עד –90 מעלות צלזיוס.

העבר לחנקן נוזלי

לאחר מכן נשמרת הבקבוקונים הקריוגניים הקפואים למיכל חנקן נוזלי לתקופות בלתי מוגבלות סיפקו טמפרטורה של פחות מ- -135 ℃.

ניתן להשיג טמפרטורות אולטרה-נמוכות אלה על ידי טבילה בחנקן הנוזל או האדים.

שלב נוזלי או אדים?

ידוע כי אחסון בחנקן שלב נוזלי שומר על הטמפרטורה הקרה בעקביות מוחלטת, אך לרוב אינו מומלץ מהסיבות הבאות:

• הצורך בכמויות גדולות (עומק) של חנקן נוזלי המהווה סכנה פוטנציאלית. כוויות או חילונות בגלל זה סיכון אמיתי.
• מקרים מתועדים של זיהום צולב על ידי חומרים זיהומיים כמו אספרגילוס, Hep B והתפשטות ויראלית דרך מדיום החנקן הנוזל (2,3)
• הפוטנציאל של חנקן נוזלי לדלוף לבקבוקונים במהלך טבילה. כאשר הוא מוציא מהאחסון ומחמם לטמפרטורת החדר, החנקן מתרחב במהירות. כתוצאה מכך, הבקבוקון עלול להתנפץ כאשר הוא מוסר מאחסון חנקן נוזלי, ויוצר סכנה הן מפסולת מעופפת והן מחשיפה לתוכן (1, 4).

מסיבות אלה, אחסון טמפרטורה נמוך במיוחד הוא לרוב בחנקן שלב אדי. כאשר יש לאחסן דגימות בשלב הנוזל, יש להשתמש בצינורות קריאופלקס מיוחדים.

החיסרון לשלב האדים הוא שדרגת טמפרטורה אנכית יכולה להתרחש וכתוצאה מכך תנודות טמפרטורה בין -135 ℃ ל- -190 ℃. זה מחייב ניטור מדוקדק וחרוץ אחר רמות החנקן הנוזלי וריאציות הטמפרטורה (5).

יצרנים רבים ממליצים כי Cryovials יתאימו לאחסון עד -135 ℃ או לשימוש בשלב האדים בלבד.

הפשרת תאי הקריו -שמורים שלך

נוהל ההפשרה מלחיץ לתרבות קפואה, ונדרש טיפול וטכניקה נאותה כדי להבטיח כדאיות, התאוששות ופונקציונליות מיטבית של התאים. פרוטוקולי ההפשרה המדויקים יהיו תלויים בסוגי תאים ספציפיים. עם זאת, הפשרה מהירה נחשבת לסטנדרטית ל:

• להפחית כל השפעה על ההתאוששות הסלולרית
• עוזר להפחית את זמן החשיפה למומסים הקיימים בתקשורת הקפוא
• למזער כל נזק על ידי הגשת קרח מחדש

מרחצאות מים, אמבטיות חרוזים או מכשירים אוטומטיים מיוחדים משמשים בדרך כלל להפשרת דגימות.

לרוב קו תאים אחד מופשר בכל פעם למשך 1-2 דקות, על ידי הסתובבות בעדינות באמבט מים של 37 ℃ עד שנשאר רק מעט קרח בבקבוקון לפני שהם נשטפים במדיום גידול מראש.

עבור תאים מסוימים כמו עוברים של יונקים, התחממות איטית חיונית להישרדותם.

התאים מוכנים כעת לתרבית תאים, בידוד תאים או במקרה של תאי גזע המטופואטיים - מחקרי כדאיות כדי להבטיח את שלמות תאי גזע התורמים לפני הטיפול המילואליטיבי.

זה תרגול רגיל לקחת חלקיקים קטנים של הדגימה המוקדמת המשמשת לביצוע ספירת תאים לקביעת ריכוזי התא לצורך ציפוי בתרבות. לאחר מכן תוכל להעריך את התוצאות של נהלי בידוד תאים ולקבוע את כדאיות התא.

שיטות עבודה מומלצות לאחסון Cryovials

שימור הקריאה המוצלח של דגימות המאוחסנות בקריוביות תלוי באלמנטים רבים בפרוטוקול כולל אחסון מתאים ושמירת רשומות.

• מפוצלים תאים בין מיקומי האחסון- אם נפחים מאפשרים, מפוצלים תאים בין בקבוקונים ואחסנו אותם במקומות נפרדים כדי להפחית את הסיכון לאובדן מדגם כתוצאה מכישלונות ציוד.
• למנוע זיהום צולב-בחר בבקבוקונים קריוגניים סטריליים לשימוש חד-פעמי או לחיטוי אוטומטי לפני השימוש לאחר מכן
• השתמש בבקבוקונים בגודל מתאים לתאים שלך- בקבוקונים מגיעים במגוון נפחים בין 1 ל 5 מ"ל. הימנע ממילוי יתר של בקבוקונים כדי להפחית את הסיכון לפיצוח.
• בחר בקבוקונים קריוגניים פנימיים או חיצוניים- בקבוקונים עם הברגה פנימית מומלצים על ידי כמה אוניברסיטאות לאמצעי בטיחות - הם יכולים גם למנוע זיהום במהלך מילוי או כאשר הם מאוחסנים בחנקן הנוזל.
• למנוע דליפה-השתמש בחותמות דו-מוזרות שעוצבו בכובע הברגים או טבעות O כדי למנוע דליפה וזיהום.
• השתמש בברקודים דו מימדיים ובקבוקוני תווית- כדי להבטיח עקיבות, בקבוקונים עם אזורי כתיבה גדולים מאפשרים לתייג את כל הבקבוקון. ברקודים דו -ממדיים יכולים לעזור בניהול אחסון ושמירת רשומות. כובעים מקודדים צבעים מועילים לזיהוי קל יותר.
• תחזוקת אחסון מספקת- כדי להבטיח כי תאים לא יאבדו, כלי האחסון צריכים לפקח ללא הרף אחר רמות הטמפרטורה ורמות החנקן הנוזליות. יש להתקין אזעקות כדי להתריע בפני המשתמשים על שגיאות.

אמצעי בטיחות

חנקן נוזלי הפך למנהג נפוץ במחקר מודרני אך נושא את הסיכון לפגיעה קשה אם משתמשים בו בצורה לא נכונה.

יש ללבוש ציוד מגן אישי נכון (PPE) כדי למזער את הסיכון לכביש כפור, כוויות ואירועים שליליים אחרים בעת טיפול בחנקן נוזלי. לִלבּוֹשׁ

• כפפות קריוגניות
• מעיל מעבדה
• מגן פנים מלא עמיד בפני השפעה המכסה גם את הצוואר
• נעלי אצבע סגורות
• סינר פלסטיק אטום

יש למקם מקררי חנקן נוזליים באזורים מאווררים היטב כדי למזער את הסיכון לחיקוי-נמלט חנקן מאדה ומעביר חמצן אטמוספרי. בחנויות נפח גדולות צריכות להיות מערכות אזעקת חמצן נמוכות.

עבודה בזוגות בעת טיפול בחנקן נוזלי היא אידיאלית ויש לאסור על השימוש בו מחוץ לשעות העבודה הרגילות.

Cryovials כדי לתמוך בזרימת העבודה שלך

חברת Suzhou Ace Biomedical Company מציעה מבחר רחב של מוצרים העונים על צרכי שימור הקריאה שלך לסוגים שונים של תאים. התיק כולל מגוון של טובזות כמו מגוון של קריוביות סטריליות.

הקריוביות שלנו הן:

• מכסה בורג מעבדה 0.5 מ"ל 1.5 מ"ל 2.0 מ"ל בקבוקונים קריוגניים קריוגיים קריאניים חרוטיוב חרוטי עם אטם

  ● 0.5 מ"ל, 1.5 מ"ל, מפרט 2.0 מ"ל, עם חצאית או ללא חצאית
  ● עיצוב חרוטי או עצמיות, סטרילי או לא סטרילי זמינים שניהם
  ● צינורות כובע בורג עשויים מפוליפרופילן בדרגה רפואית
  ● ניתן להקפיא שוב ושוב את בקבוקוני הקריוטוב של PP ולהפשיר
  ● תכנון הכובע החיצוני יכול להפחית את הסתברות הזיהום במהלך הטיפול במדגם.
  ● כובע בורג צינורות קריוגניים חוטי בורג אוניברסליים לשימוש
  ● צינורות מתאימים לרוטורים הנפוצים ביותר
  ● צינורות טבעת O Cryogenic מתאימים לסטנדרט 1 אינץ 'ו -2 אינץ', 48 וול, 81 וול ， 96 וול ו 100 קופסאות מקפיא
  ● הניתן לחיטוי אוטומטי ל 121 מעלות צלזיוס והקפאה ל -86 מעלות צלזיוס

  חלק לא	חוֹמֶר	כֶּרֶך	כּוֹבַעצֶבַע	PCS/תִיק	תיקים/מקרה
  ACT05-BL-N	PP	0.5 מ"ל	שחור, צהוב, כחול, אדום, סגול, לבן	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5 מ"ל	שחור, צהוב, כחול, אדום, סגול, לבן	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5 מ"ל	שחור, צהוב, כחול, אדום, סגול, לבן	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0 מ"ל	שחור, צהוב, כחול, אדום, סגול, לבן	500	10