סטנדרטיזציה של תהליכים כוללת את האופטימיזציה שלהם ואת הקמתם והרמוניזציה לאחר מכן, ומאפשרת ביצועים אופטימליים לטווח הארוך-ללא תלות במשתמש. סטנדרטיזציה מבטיחה תוצאות באיכות גבוהה, כמו גם את ההתרבות וההשוואה שלהן.
המטרה של PCR (קלאסי) היא יצירת תוצאה אמינה וניתנת לשחזור. ליישומים מסוימים, התשואה שלמוצר PCRהוא גם רלוונטי. לתגובות אלה, יש להקפיד על מנת להבטיח כי דגימות לא נפגעו וכי זרימת העבודה של ה- PCR נותרה יציבה. באופן ספציפי, זה מתרגם למזעור הכנסת זיהומים העלולים להוביל לתוצאות שליליות חיוביות או כוזבות או אפילו לעכב את תגובת ה- PCR. יתר על כן, תנאי התגובה צריכים להיות זהים ככל האפשר עבור כל מדגם בודד בתוך ריצה וניתן להעביר אותו לתגובות הבאות (מאותה שיטה). זה מתייחס להרכב התגובות כמו גם לסוג בקרת הטמפרטורה במחזור. יש להימנע שגיאות משתמש ככל האפשר.
להלן, נדגים את האתגרים שנתקלים במהלך ההכנה ולאורך כל ניהול PCR - ואת הגישות לפתרונות הקיימים ביחס למכשירים ולמתכלים המשמשים לסטנדרטיזציה של זרימות העבודה של PCR.
הכנת תגובה
חלוקת רכיבי התגובה לכיוון PCR, או צלחות, בהתאמה, כוללת אתגרים מרובים שיש להתגבר עליהם:
תנאי תגובה
המינון המדויק והמדויק של המרכיבים האישיים הוא הכרחי כאשר מכוון לתנאי התגובה הזהים ביותר האפשריים. בנוסף לטכניקת פיפטה טובה, בחירת הכלי הנכון היא קריטית. תערובות אב של PCR מכילות לעתים קרובות חומרים המגדילים את הצמיגות או מייצרים קצף. במהלך תהליך הפיזור, אלה מובילים להרטבה משמעותית שלטיפים לפיפטהובכך מצמצם את דיוק הפיזור. השימוש במערכות מחלקה ישירה או קצות פיפטה אלטרנטיביים שפחות מועדים להרטבה יכולים לשפר את הדיוק והדיוק של תהליך הפיזור.
מזהמים
במהלך תהליך הפיזור, נוצרים תרסיסים, אשר אם מותר להם להגיע לחלק הפנימי של הפיפטה, עלולים לזהם מדגם נוסף במהלך שלב הפיזור הבא. ניתן למנוע זאת באמצעות טיפים לסינון או מערכות תזוזה ישירה.
חומרים מתכלים כמוטיפים, כלי שיט וצלחות המשמשים בזרימת העבודה של ה- PCR אסור להכיל חומרים אשר פוגעים בדגימה או מזייפים את התוצאה. אלה כוללים DNA, DNASES, RNASE ומעכבי PCR, כמו גם רכיבים שעלולים להדליק מהחומר במהלך התגובה - חומרים המכונים Leachables.
שגיאת משתמש
ככל שמעיבוד דגימות יותר, כך סיכון השגיאה גבוה יותר. זה יכול בקלות לקרות שדגימה מוגבלת לכלי הלא נכון או לבאר שגויה. ניתן להפחית במידה ניכרת סיכון זה על ידי סימון שניתן להבחין בקלות בבארות. באמצעות אוטומציה של שלבי מחלקה, ממוזערים "הגורם האנושי", IE, שגיאות וריאציות הקשורות למשתמש, ובכך מגדילים את ההתרבות, במיוחד במקרה של נפחי תגובה קטנים. זה דורש צלחות בעלות יציבות ממדית מספקת כדי להיות מועסקים בתחנת עבודה. ברקודים מצורפים מספקים קריאות מכונה נוספת, המפשטת את מעקב הדגימה לאורך כל התהליך.
תכנות של מחזור התרמי
תכנות מכשיר יכולה להוכיח כגוזרת זמן כמו גם נוטה לשגיאות. תכונות מחזור תרמיות שונות של PCR פועלות יחד כדי לפשט את שלב התהליך הזה, והכי חשוב, כדי להפוך אותו לבטוח:
פעולה קלה והנחיות משתמשים טובות הם הבסיס לתכנות יעילות. על סמך בסיס זה, ניהול משתמשים המוגן על סיסמה ימנע משתנים על ידי משתמשים אחרים. אם נמצאים מספר אופניים (מאותו סוג) בשימוש, מועיל אם ניתן להעביר תוכנית ישירות ממכשיר אחד למשנהו באמצעות USB או קישוריות. תוכנת מחשב מאפשרת ניהול מרכזי ומאובטח של תוכניות, זכויות משתמש ומסמכים במחשב.
ריצת PCR
במהלך הריצה, DNA מוגבר בכלי התגובה, שם כל דגימה צריכה להיות נתונה לתנאי תגובה זהים ועקביים. ההיבטים הבאים רלוונטיים לתהליך:
בקרת טמפרטורה
דיוק מצוין בבקרת טמפרטורה והומוגניות של בלוק המחזור הם הבסיס למיזוג טמפרטורה אפילו של כל הדגימות. האיכות הגבוהה של יסודות החימום והקירור (אלמנטים של Peltier), כמו גם האופן בו אלה מחוברים לבלוק, הם הגורמים המכריעים שיקבעו את הסיכון לאי -התאמות בטמפרטורה המכונה "אפקט הקצה"
הִתאַדוּת
ריכוזי רכיבי התגובה האישיים לא צריכים להשתנות במהלך התגובה כתוצאה מאידוי. אחרת, יתכן שמעט מאודמוצר PCRיכול להיווצר, או בכלל לא. לפיכך חיוני למזער את האידוי על ידי הבטחת חותם מאובטח. במקרה זה, המכסה המחומם של מחזיר התרמי וחותם הכלי עובדים יד ביד. אפשרויות איטום שונות זמינות עבורצלחות PCR (קישור: מאמר איטום)לפיה החותם הטוב ביותר מושג באמצעות איטום חום. סגירות אחרות עשויות להיות מתאימות, כל עוד ניתן להתאים את לחץ המגע של מכסה המחזור לחותם שנבחר.
סטנדרטיזציה של תהליכים קיימת על מנת לשמור על תוצאות מדויקות וניתנות לשחזור לטווח הארוך. זה כולל תחזוקה שוטפת של הציוד כדי להבטיח שהוא תמיד במצב עבודה טוב. על כל המתכלים להיות באיכות גבוהה בעקביות בכל המגרשים המיוצרים, ויש להבטיח את הזמינות האמינה שלהם.
זמן פוסט: נובמבר 29-2022