כיצד לפפטה נפחים קטנים עם פיפטות ידניות ידניות

ככל שמוצב מיקוד נוסף על הפחתת ריאגנטים ועלויות, נפחים קטנים יותר הם בביקוש גבוה, למשל, להכנת תגובות PCR MasterMix או אנזים. אולם פיפט נפחים קטנים מ- 0.2 - 5 μl מגדיר אתגרים חדשים לדיוק ודיוק פיפטה. הנקודות הבאות חיוניות:

1. גודל פיפטה וקצה: בחר תמיד את הפיפטה עם הנפח הנומינלי הנמוך ביותר האפשרי והקצה הקטן ביותר לשמירה על כרית האוויר קטנה ככל האפשר. בעת פיפט 1 μl EG, בחר פיפטה 0.25 - 2.5 μL וקצה תואם ולא פיפטה של ​​1 - 10 μL.
2. כיול ותחזוקה: חיוני שהפטפטות שלך מכוילות ומתוחזקות כראוי. התאמות קטנות וחלקים שבורים על פיפטה מובילים לעלייה אדירה בערכי השגיאה השיטתיים והאקראיים. יש לבצע כיול על פי ISO 8655 פעם בשנה.
3. פיפטות תזוזה חיוביות: בדוק אם יש לך פיפטה עקירה חיובית עם טווח נפח נמוך במעבדה שלך. באופן כללי, שימוש בסוג זה של פיפטה מוביל לתוצאה טובה יותר של פיפטה מבחינת דיוק ודיוק מאשר עם פיפטות כובעי אוויר קלאסיים.
4. נסה להשתמש בנפחים גדולים יותר: אתה יכול לשקול לדילול הדגימה שלך לפיפטה נפחים גדולים יותר עם אותה כמות בתגובה הסופית. זה יכול להפחית שגיאות פיפטה עם נפחי מדגם קטנים מאוד.

בנוסף לכלי טוב, על החוקר להיות בעל טכניקת פיפטה טובה מאוד. שימו לב במיוחד לשלבים הבאים:

1. קובץ מצורף: אל תקפץ את הפיפטה על הקצה מכיוון שזה עלול לפגוע בקצה הקצה העדין לגרום להפניית קרן הנוזל או לפגוע בפתח. החל רק לחץ קל בעת חיבור קצה והשתמש בפיפטה עם חרוט קצה עמוס קפיץ.
2. החזקת הפיפטה: אל תחזיק את הפיפטה בידך בזמן שתמתין לצנטריפוגה, אופניים וכו '. החלק הפנימי של הפיפטה יחמם ויוביל את כרית האוויר כדי להתרחב וכתוצאה מכך סטיות מהנפח המוגדר בעת פיפט.
3. הרטבה מראש: לחות של האוויר בתוך הקצה והפיפטה מכינה את הקצה לדגימה ונמנעת מאייד בעת שאיפה של נפח ההעברה.
4. שאיפה אנכית: זה חשוב מאוד בעת הטיפול בנפחים קטנים כדי להימנע מהאפקט הנימי שמתרחש כאשר הפיפטה מוחזקת בזווית.
5. עומק טבילה: טבלו את הקצה כמה שפחות כדי למנוע נוזלים שנכנסים לקצה בגלל אפקט הנימים. כלל האצבע: ככל שהקצה ונפח הקטנים יותר, כך עומק הטבילה נמוך יותר. אנו ממליצים על מקסימום 2 מ"מ בעת פיפט נפחים קטנים.
6. חלוקה בזווית של 45 מעלות: זרימה אופטימלית של הנוזל מובטחת כאשר הפיפטה מוחזקת בזווית של 45 מעלות.
7. מגע אל קיר כלי השיט או משטח הנוזל: ניתן לחלק נפחים קטנים רק כראוי כאשר הקצה מוחזק אל דופן הכלי, או שקוע בנוזל. אפילו את הירידה האחרונה מהקצה ניתן לחלק במדויק.
8. פיצוץ: פיצוץ הוא חובה לאחר מחלק נפחים נמוכים כדי להפיץ אפילו את טיפת הנוזל האחרונה הקיימת בקצה. יש לבצע את המפוצץ גם על קיר כלי השיט. הקפד לא להכניס בועות אוויר לדגימה בעת ביצוע פיצוץ על פני השטח הנוזל.