כיצד לבצע פיפטה של ​​נפחים קטנים עם פיפטות ידניות

ככל שמתמקדים יותר בהפחתת ריאגנטים ועלויות, נפחים קטנים יותר מבוקשים, למשל, להכנת PCR Mastermix או תגובות אנזימים. אבל פיפטציה של נפחים קטנים מ-0.2 - 5 μL מציבה אתגרים חדשים לדיוק ודיוק בפיפטציה. הנקודות הבאות חיוניות:

1. גודל פיפטה וקצה: בחר תמיד בפיפטה עם הנפח הנומינלי הנמוך ביותר האפשרי והקצה הקטן ביותר כדי לשמור על כרית האוויר קטנה ככל האפשר. בעת פיפטציה של 1 μL למשל, בחר פיפטה של ​​0.25 - 2.5 μL וקצה תואם במקום פיפטה של ​​1 - 10 μL.
2. כיול ותחזוקה: חיוני שהפיפטות שלך מכוילות ומתוחזקות כראוי. התאמות קטנות וחלקים שבורים על פיפטה מובילים לעלייה מסיבית בערכי שגיאה שיטתיים ואקראיים. יש לבצע כיול לפי ISO 8655 פעם בשנה.
3. פיפטות עקירה חיובית: בדוק אם יש לך פיפטת עקירה חיובית עם טווח נפח נמוך במעבדה שלך. באופן כללי, שימוש בסוג זה של פיפטה מוביל לתוצאה טובה יותר של פיפטציה מבחינת דיוק ודיוק מאשר עם פיפטות קלאסיות של כרית אוויר.
4. נסה להשתמש בנפחים גדולים יותר: אתה יכול לשקול לדלל את הדגימה שלך לפיפטה של ​​נפחים גדולים יותר עם אותה כמות בתגובה הסופית. זה יכול להפחית שגיאות פיפטציה עם נפחי דגימה קטנים מאוד.

בנוסף לכלי טוב, על החוקר להיות בעל טכניקת פיפטציה טובה מאוד. שימו לב במיוחד לשלבים הבאים:

1. הצמדת קצה: אין להדביק את הפיפטה על הקצה מכיוון שהדבר עלול לפגוע בקצה הקצה העדין לגרום לניתוב מחדש של קרן הנוזל או לפגוע בפתח. הפעל רק לחץ קל בעת חיבור קצה והשתמש בפפטה עם קונוס קצה קפיץ.
2. החזקת הפיפטה: אין להחזיק את הפיפטה ביד בזמן ההמתנה לצנטריפוגה, מחזור וכו'. החלק הפנימי של הפיפטה יתחמם ויוביל את כרית האוויר להתרחב וכתוצאה מכך סטיות מהנפח שנקבע בעת הפיפטה.
3. הרטבה מוקדמת: הלחות של האוויר בתוך הקצה והפיפטה מכינה את הקצה לדגימה ומונעת אידוי בעת שאיבת נפח ההעברה.
4. שאיפה אנכית: זה חשוב מאוד בעת טיפול בנפחים קטנים כדי למנוע את האפקט הנימים המתרחש כאשר הפיפטה מוחזקת בזווית.
5. עומק טבילה: טבלו את הקצה כמה שפחות כדי למנוע כניסת נוזלים לקצה בגלל האפקט הנימים. כלל אצבע: ככל שהקצה והנפח קטנים יותר, כך עומק הטבילה נמוך יותר. אנו ממליצים על 2 מ"מ לכל היותר בעת פיפטציה של נפחים קטנים.
6. מתן בזווית של 45°: זרימה אופטימלית של הנוזל מובטחת כאשר הפיפטה מוחזקת בזווית של 45°.
7. מגע עם דופן כלי הדם או משטח הנוזל: נפחים קטנים יכולים להיות מופקים כראוי רק כאשר הקצה מוחזק כנגד דופן הכלי, או טבול בנוזל. אפילו הטיפה האחרונה מהקצה ניתנת לחלוקה מדויקת.
8. נשיפה: חובה לנפץ לאחר הוצאת נפחים נמוכים כדי להוציא אפילו את טיפת הנוזל האחרונה שנמצאת בקצה. הפריצה צריכה להתבצע גם כנגד דופן הכלי. היזהר לא להכניס בועות אוויר לתוך המדגם בעת ביצוע הוצאת נשיפה על פני הנוזל.