Come pipettare piccoli volumi con pipette manuali portatili

Poiché si pone sempre più attenzione alla riduzione dei reagenti e dei costi, sono molto richiesti volumi più piccoli, ad esempio per la preparazione di Mastermix PCR o reazioni enzimatiche. Ma il pipettaggio di piccoli volumi da 0,2 a 5 µL pone nuove sfide per l'accuratezza e la precisione del pipettaggio. I seguenti punti sono essenziali:

1. Dimensioni della pipetta e del puntale: scegliere sempre la pipetta con il volume nominale più basso possibile e il puntale più piccolo per mantenere il cuscino d'aria il più piccolo possibile. Ad esempio, quando si pipetta 1 µL, scegliere una pipetta da 0,25 – 2,5 µL e puntale corrispondente anziché una pipetta da 1 – 10 µL.
2. Calibrazione e manutenzione: è essenziale che le pipette siano calibrate e mantenute correttamente. Piccoli aggiustamenti e parti rotte su una pipetta portano ad un massiccio aumento dei valori di errore sistematici e casuali. Una volta all'anno deve essere eseguita una calibrazione secondo ISO 8655.
3. Pipette a spostamento positivo: controlla se nel tuo laboratorio disponi di una pipetta a spostamento positivo con un intervallo di volume basso. In generale, l'utilizzo di questo tipo di pipette garantisce risultati di pipettaggio migliori in termini di accuratezza e precisione rispetto alle classiche pipette a cuscino d'aria.
4. Prova a utilizzare volumi più grandi: potresti prendere in considerazione di diluire il campione per pipettare volumi più grandi con la stessa quantità nella reazione finale. Ciò può ridurre gli errori di pipettaggio con volumi di campione molto piccoli.

Oltre a un buon strumento, il ricercatore deve possedere un'ottima tecnica di pipettaggio. Prestare particolare attenzione ai seguenti passaggi:

1. Attacco della punta: non incastrare la pipetta sulla punta poiché ciò potrebbe danneggiare l'estremità sottile della punta, causare il reindirizzamento del raggio del liquido o danneggiare l'orifizio. Applicare solo una leggera pressione quando si collega un puntale e utilizzare una pipetta con un cono del puntale caricato a molla.
2. Come tenere la pipetta: non tenere la pipetta in mano mentre si aspetta la centrifuga, il termociclatore, ecc. L'interno della pipetta si surriscalda e porta il cuscino d'aria ad espandersi con conseguenti deviazioni dal volume impostato durante il pipettaggio.
3. Pre-bagnatura: l'umidificazione dell'aria all'interno del puntale e della pipetta prepara il puntale per il campione ed evita l'evaporazione durante l'aspirazione del volume di trasferimento.
4. Aspirazione verticale: questo è molto importante quando si maneggiano piccoli volumi per evitare l'effetto capillare che si verifica quando la pipetta viene tenuta inclinata.
5. Profondità di immersione: immergere il puntale il meno possibile per evitare che il liquido entri nel puntale per effetto capillare. Regola pratica: più piccoli sono la punta e il volume, minore è la profondità di immersione. Si consiglia un massimo di 2 mm quando si pipettano piccoli volumi.
6. Dispensazione con un angolo di 45°: il flusso ottimale del liquido è garantito quando la pipetta viene tenuta con un angolo di 45°.
7. Contatto con la parete del vaso o la superficie del liquido: piccoli volumi possono essere dispensati correttamente solo quando la punta viene tenuta contro la parete del vaso o immersa nel liquido. Anche l'ultima goccia dalla punta può essere erogata con precisione.
8. Soffio: è obbligatorio dopo aver erogato bassi volumi per erogare anche l'ultima goccia di liquido presente nel puntale. Anche lo spurgo deve essere effettuato contro la parete del vaso. Fare attenzione a non introdurre bolle d'aria nel campione quando si esegue un soffiaggio sulla superficie del liquido.