Le reazioni a catena della polimerasi (PCR) sono uno dei metodi ampiamente conosciuti utilizzati nei laboratori di scienze della vita.
Le piastre PCR sono prodotte con plastica di prima qualità per un'eccellente lavorazione e analisi dei campioni o dei risultati raccolti.
Hanno pareti sottili e omogenee per fornire un trasferimento termico preciso.
In preparazione per le applicazioni in tempo reale, minuscole sezioni di DNA o RNA vengono isolate e conservate in piastre PCR.
Le piastre PCR sono altamente efficienti nella termosaldatura e limitano anche il flusso di calore.
Tuttavia, per quanto efficaci e affidabili siano le piastre PCR, errori e imprecisioni si annidano facilmente durante l'elaborazione dei campioni.
Pertanto, se sei interessato a ottenere un prodotto buono e di alta qualitàPiastre PCR.L'ideale è contattare un produttore affidabile di piastre PCR. Con questo hai la certezza di ottenere l'offerta migliore.
Ecco alcune precauzioni da seguire per evitare contaminazioni dei reagenti o dei campioni ed evitare che imprecisioni si insinuino nei risultati.
Sterilizzare l'ambiente circostante
Si verificano positivi o negativi errati a causa della presenza di impurità, il che fa dubitare dei risultati.
Impurezze e contaminanti si presentano in varie forme come DNA non correlato o additivi chimici che alla fine riducono l'efficienza e l'efficacia della reazione.
Esistono numerosi modi per ridurre notevolmente il tasso di contaminazione della piastra PCR.
L'uso di puntali con filtro sterilizzati è un altro modo utile per evitare che le impurità si insinuino nei campioni attraverso le pipette.
Dedicare un set di apparecchiature completamente pulite, comprendente pipette e rack, esclusivamente all'uso della PCR. Ciò garantirà un trasferimento trascurabile di impurità o contaminanti all'interno del laboratorio.
Utilizzare candeggina ed etanolo sulle pipette, sui rack e sui banchi per eliminare i contaminanti.
Assegna uno spazio riservato a tutte le reazioni PCR per ridurre ulteriormente la contaminazione da particelle.
Utilizzare guanti puliti ad ogni passaggio e sostituirli frequentemente.
Piastre PCR
Ispezionare la concentrazione e la purezza del modello.
È necessario mantenere la pulizia del banco e dell'attrezzatura utilizzata durante l'analisi dei campioni con la PCR. È essenziale convalidare il grado di purezza dei campioni prima dell'analisi e del trattamento.
Generalmente, gli analizzatori prendono in considerazione la concentrazione e il livello di purezza dei campioni di DNA.
Cercare che il rapporto di assorbanza per 260 nm/280 nm non deve essere inferiore a 1,8. Mentre la lunghezza d'onda successiva compresa tra 230 nm e 320 nm viene utilizzata per identificare le impurità.
Ad esempio, i sali caotropici e altri composti organici vengono rilevati con una velocità di assorbanza di 230 nm. Mentre anche la torbidità nei campioni di DNA viene rilevata e verificata con una velocità di assorbanza di 320 nm.
Evitare di sovraccaricare le piastre PCR con il prodotto
Per quanto si desideri analizzare più prodotti contemporaneamente, ciò provoca una contaminazione incrociata delle piastre PCR.
Il sovraccarico delle piastre PCR con prodotti diversi spreca e rende estremamente difficile l'accertamento dei campioni.
Conservare i registri delle aliquote dei reagenti PCR
I cicli continui di congelamento/scongelamento e l'uso frequente di aliquote potrebbero danneggiare i reagenti PCR, gli enzimi e i DNTP attraverso la ricristallizzazione.
Cercare sempre di monitorare la quantità di aliquota utilizzata durante la preparazione dei campioni da analizzare.
Il LIMS preferibile è più adatto per controllare l'inventario e la quantità di reagenti e campioni congelati o scongelati.
Scegli la migliore temperatura di ricottura.
Scegliere e utilizzare la temperatura di ricottura sbagliata è ancora un altro metodo in cui i risultati della PCR contengono errori.
A volte, la reazione non va come previsto. Si desidera ridurre la temperatura di ricottura per facilitare una reazione riuscita.
Tuttavia, l'abbassamento della temperatura aumenta le possibilità di falsi positivi e di comparsa di dimeri di primer.
È importante confermare l'analisi della curva di fusione quando si utilizzano le piastre PCR poiché è un buon indicatore della selezione della temperatura di ricottura corretta.
Il software di progettazione dei primer aiuta nella progettazione e fornisce la giusta temperatura di ricottura riducendo direttamente l'errore nelle piastre PCR.
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Orario di pubblicazione: 30 ottobre 2021