Le reazioni a catena della polimerasi (PCR) sono uno dei metodi ampiamente noti utilizzati nei laboratori delle scienze della vita.
Le piastre PCR sono prodotte da materie plastiche di prima classe per l'eccellente elaborazione e l'analisi di campioni o risultati raccolti.
Hanno pareti sottili e omogenee per fornire un preciso trasferimento termico.
In preparazione per applicazioni in tempo reale, la sezione minuscole di DNA o RNA è isolata e conservata in piastre PCR.
Le piastre PCR sono altamente efficienti nella tenuta del calore e limitano anche il flusso di calore.
Tuttavia, poiché sono efficaci e affidabili le piastre PCR, l'errore e le inesattezze si muovono facilmente durante l'elaborazione dei campioni.
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Ecco alcune precauzioni da seguire per evitare le contaminazioni di reagenti o campioni e impedire che le inesattezze si insinuano nei risultati.
Sterilizzare l'ambiente circostante
Positivi o negativi errati si verificano a causa della presenza di impurità, il che ti fa dubitare dei risultati.
Impurità e contaminanti si verificano in varie forme come DNA non correlato o additivi chimici che alla fine riducono l'efficienza e l'efficacia della reazione.
Esistono numerosi modi per ridurre notevolmente la velocità di contaminazione della piastra PCR.
L'uso di punte del filtro sterilizzato è un altro modo utile per impedire alle impurità di insinuarsi nei campioni attraverso le pipette.
Dedica un set completamente pulito di attrezzature, composta da pipette e rack, esclusivamente per l'uso della PCR. Ciò garantirà il trasferimento trascurabile di impurità o contaminanti intorno al laboratorio.
Utilizza candeggini, etanolo su pipette, scaffali e panche per cancellare i contaminanti.
Assegnare uno spazio riservato per tutte le reazioni PCR per ridurre al minimo ulteriormente la contaminazione delle particelle.
Usa i guanti puliti ad ogni passo e sostituirli frequentemente.
Piatti PCR
Ispezionare la concentrazione e la purezza del modello.
È necessario mantenere la pulizia del banco e delle attrezzature utilizzate quando si analizzano i campioni con la PCR. È essenziale convalidare il grado di purezza dei campioni prima dell'analisi e dell'elaborazione.
In generale, gli analizzatori prendono in considerazione il livello di concentrazione e purezza dei campioni di DNA.
Effettuare il rapporto di assorbanza per 260 nm/280nm non deve essere inferiore a 1,8. Mentre la successiva lunghezza d'onda tra 230 nm e 320nm viene utilizzata per identificare le impurità.
In caso di esempio, i sali caotropici e altri composti organici vengono rilevati con un tasso di assorbanza di 230 nm. Mentre la torbidità nei campioni di DNA viene anche rilevata e verificata ad un tasso di assorbanza di 320 nm.
Evita il sovraccarico di piastre PCR con il prodotto
Per quanto si desideri eseguire più prodotti contemporaneamente, si traduce in contaminazione incrociata delle piastre PCR.
Il sovraccarico delle piastre di PCR con diversi rifiuti di prodotti e rende estremamente difficile accertare i campioni.
Conservare i registri dei reagenti PCR di aliquota
Cicli di congelamento/disgelo continuo e uso frequente di aliquota potrebbero danneggiare i reagenti della PCR, gli enzimi e i DNTP attraverso la ricristallizzazione.
Sforzarsi sempre di monitorare il tasso di aliquota utilizzata durante la preparazione dei campioni da analizzare.
LIMS preferibile è più adatto per controllare l'inventario e la quantità di reagenti e campioni si sono congelati o scongelati.
Scegli la migliore temperatura di ricottura.
La raccolta e l'uso della temperatura di ricottura errata è un altro metodo che i risultati della PCR contengono errori.
A volte, la reazione non va come previsto. Si desidera ridurre la temperatura di ricottura al fine di facilitare una reazione di successo.
Tuttavia, l'abbassamento della temperatura aumenta le possibilità di falsi positivi e aspetto dei dimeri di primer.
È significativo confermare l'analisi della curva di fusione quando si utilizzano le piastre PCR in quanto è un buon indicatore della selezione della temperatura di ricottura corretta.
Il software di progettazione di primer aiuta a progettare, la fornitura di temperatura di ricottura giusta con riduce direttamente l'errore nelle piastre PCR.
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Tempo post: ottobre-30-2021