Hvernig á að pípetta lítið magn með handvirkum pípettum

Þar sem meiri áhersla er lögð á að draga úr hvarfefnum og kostnaði, er mikil eftirspurn eftir minni magni, td til undirbúnings PCR Mastermix eða ensímhvarfa. En pípulagning á litlu magni frá 0,2 – 5 µL setur nýjar áskoranir varðandi nákvæmni og nákvæmni í pípulagningu. Eftirfarandi atriði eru nauðsynleg:

1. Stærð pípettu og odds: Veldu alltaf pípettuna með lægsta mögulega nafnrúmmáli og minnsta oddinn til að halda loftpúðanum eins litlum og mögulegt er. Þegar 1 µL er pípettað skaltu td velja 0,25 – 2,5 µL pípettu og samsvarandi odd frekar en 1 – 10 µL pípettu.
2. Kvörðun og viðhald: Það er nauðsynlegt að pípetturnar þínar séu rétt kvarðaðar og viðhaldið. Litlar breytingar og brotnir hlutar á pípettu leiða til mikillar aukningar á kerfisbundnum og tilviljunarkenndum villugildum. Kvörðun samkvæmt ISO 8655 skal framkvæma einu sinni á ári.
3. Jákvætt tilfærslupípetta: Athugaðu hvort þú sért með jákvæða tilfærslupípettu með lítið rúmmál í rannsóknarstofunni þinni. Almennt séð leiðir notkun þessarar pípettna til betri pípettunarárangurs hvað varðar nákvæmni og nákvæmni en með klassískum loftpúðapípettum.
4. Reyndu að nota stærra rúmmál: Þú gætir íhugað að þynna sýnið þitt til að pípetta stærra rúmmál með sama magni í lokahvarfinu. Þetta getur dregið úr pípusetningarvillum með mjög litlum sýnishornum.

Auk góðs tóls þarf rannsakandinn að hafa mjög góða pípettunartækni. Gefðu sérstaka athygli á eftirfarandi skrefum:

1. Festing oddsins: Ekki festa pípettuna á oddinn þar sem það getur skemmt fína endann á endanum og valdið því að vökvageislanum berist aftur eða skemmir opið. Beittu aðeins léttum þrýstingi þegar oddurinn er festur á og notaðu pípettu með gormhleðinni oddskeilu.
2. Haltu pípettunni: Ekki halda pípettunni í hendinni á meðan þú bíður eftir skilvindu, hringrás osfrv. Inni í pípettunni hitnar og leiðir til þess að loftpúðinn stækkar sem leiðir til frávika frá settu rúmmáli við pípettrun.
3. Forbleyta: Rakagjöf loftsins inni í oddinum og pípettunni undirbýr oddinn fyrir sýnið og forðast uppgufun þegar flutningsrúmmálið er sogað upp.
4. Lóðrétt ásog: Þetta er mjög mikilvægt þegar lítið magn er meðhöndlað til að forðast háræðaáhrifin sem verða þegar pípettunni er haldið í horn.
5. Ídýpt: Dýptu oddinum eins lítið niður og hægt er til að koma í veg fyrir að vökvi komist inn í oddinn vegna háræðaáhrifa. Þumalfingursregla: Því minni oddurinn og rúmmálið, því minni dýpt. Við mælum með að hámarki 2 mm þegar pípettað er lítið magn.
6. Afgreiðsla við 45° horn: Ákjósanlegt flæði vökvans er tryggt þegar pípettunni er haldið í 45° horni.
7. Snerting við æðavegg eða vökvayfirborð: Aðeins er hægt að skammta litlu magni á réttan hátt þegar oddinum er haldið upp að æðaveggnum eða sökkt í vökva. Jafnvel síðasta dropann af oddinum er hægt að skammta nákvæmlega.
8. Útblástur: Skylt er að blása út eftir að lítið magn hefur verið skammtað til að losa jafnvel síðasta dropann af vökva sem er til staðar í oddinum. Útblásturinn ætti einnig að fara fram við æðavegginn. Gætið þess að koma ekki með loftbólum inn í sýnið þegar blásið er út á vökvayfirborðið.