Standardization nke usoro na-agụnye njikarịcha ha na nguzobe na-esote na nkwekọ, na-enye ohere ịrụ ọrụ kachasị mma ogologo oge - na-adabere na onye ọrụ. Standardization na-eme ka nsonaazụ dị elu dị elu, yana mmụgharị ha na nha anya.
Ebumnuche nke (kpochapụwo) PCR bụ ọgbọ nke nsonaazụ a pụrụ ịdabere na ya na nke enwere ike imepụtaghachi. Maka ụfọdụ ngwa, mkpụrụ nkeNgwaahịa PCRdịkwa mkpa. Maka mmeghachi omume ndị a, a ga-akpachapụ anya iji hụ na emebighị ihe nlele yana na usoro ọrụ PCR ka kwụsiri ike. Kpọmkwem, nke a na-atụgharị n'ibelata iwebata mmetọ nke nwere ike ibute nsonaazụ adịghị mma ma ọ bụ ụgha ụgha ma ọ bụ gbochie mmeghachi omume PCR. Ọzọkwa, ọnọdụ mmeghachi omume kwesịrị ịbụ otu dị ka o kwere mee maka onye ọ bụla n'ime ihe nlele n'ime ọsọ ma bụrụ nke a ga-ebufe ya na mmeghachi omume na-esote (nke otu usoro). Nke a na-ezo aka na nhazi nke mmeghachi omume yana ụdị njikwa okpomọkụ na cycler. N'ezie, a ga-ezere njehie onye ọrụ dịka o kwere mee.
N'okpuru ebe a, anyị ga-egosipụta ihe ịma aka ndị a na-ezute n'oge nkwadebe na oge niile nke PCR - yana ụzọ maka ngwọta dị adị n'ihe gbasara ngwá ọrụ na ihe eji eme ihe maka nhazi nke ọrụ PCR.
Nkwadebe mmeghachi omume
Ikesa ihe mmeghachi omume n'ime arịa PCR, ma ọ bụ efere, n'otu n'otu, nwere ọtụtụ ihe ịma aka nke a ga-emerịrị:
Ọnọdụ mmeghachi omume
Kpọmkwem na kpọmkwem dosing nke ihe ndị dị n'otu n'otu dị mkpa mgbe ị na-achọ ọnọdụ mmeghachi omume yiri nke ahụ enwere ike. Na mgbakwunye na usoro ọkpọkọ dị mma, ịhọrọ ngwá ọrụ kwesịrị ekwesị dị oke egwu. PCR master- mixs na-enwekarị ihe na-eme ka viscosity dịkwuo elu ma ọ bụ na-emepụta ụfụfụ. N'oge usoro pipetting, ndị a na-eduga na mmiri mmiri dị ukwuupipette ndụmọdụ, si otú a na-ebelata pipetting ziri ezi. Iji usoro nkesa ozugbo ma ọ bụ ndụmọdụ pipette ọzọ nke na-adịchaghị mfe wet nwere ike imeziwanye izi ezi na nhazi nke usoro pipetting.
Mmetọ
N'oge usoro nkesa, a na-emepụta ikuku ikuku nke, ọ bụrụ na ekwe ka ọ banye n'ime pipette, nwere ike imerụ ihe nlele ọzọ n'oge nzọụkwụ ọzọ nke pipetting. Enwere ike igbochi nke a site na iji ndụmọdụ nzacha ma ọ bụ usoro mbugharị ozugbo.
Ihe oriri dị kandụmọdụ, Ụgbọ mmiri na efere a na-eji na PCR na-arụ ọrụ agaghị enwe ihe ndị na-emebi ihe nlele ahụ ma ọ bụ mebie nsonaazụ ahụ. Ndị a gụnyere DNA, DNases, RNases na PCR inhibitors, yana akụkụ ndị nwere ike ịpụpụ n'ime ihe n'oge mmeghachi omume - ihe ndị a maara dị ka leachables.
Njehie onye ọrụ
Ka a na-edozi ihe nlele ndị ọzọ, ihe ize ndụ dị elu dị elu. Ọ nwere ike ime ngwa ngwa na a na-agbanye ihe nlele n'ime arịa na-ezighi ezi ma ọ bụ olulu mmiri na-ezighi ezi. Enwere ike ibelata ihe egwu a site n'ịka akara n'olulu mmiri ndị ahụ ngwa ngwa. Site na akpaaka nke usoro nkesa, a na-ebelata "ihe mmadụ", ya bụ, njehie na ụdị dị iche iche metụtara onye ọrụ, si otú a na-abawanye mmepụtaghachi, karịsịa n'ihe gbasara obere mmeghachi omume. Nke a na-achọ efere nkwụsi ike akụkụ zuru oke ka a were rụọ ọrụ na ebe a na-arụ ọrụ. Barcode agbakwunyere na-enye mgbakwunye igwe-agụ, nke na-eme ka nlele nlele dị mfe n'oge usoro niile.
Mmemme nke thermocycler
Ịmepụta ngwá ọrụ nwere ike ịpụta na ọ na-ewe oge nakwa na ọ na-enwekarị mmejọ. Ihe dị iche iche PCR thermal cycler na-arụkọ ọrụ ọnụ iji mee ka usoro a dị mfe yana, nke kachasị mkpa, iji mee ka ọ dị nchebe:
Ịrụ ọrụ dị mfe na ezigbo nduzi onye ọrụ bụ ihe ndabere nke mmemme dị mma. Ịmelite na ntọala a, nchịkwa onye ọrụ echedoro paswọọdụ ga-egbochi ndị ọrụ ndị ọzọ gbanwee mmemme nke ya. Ọ bụrụ na a na-eji ọtụtụ cyclers (nke otu ụdị) eme ihe, ọ bara uru ma ọ bụrụ na enwere ike ibugharị mmemme ozugbo site n'otu ngwa gaa na nke ọzọ site na USB ma ọ bụ njikọta. Akụrụngwa Kọmputa na-enyere aka nchịkwa etiti na nchekwa nke mmemme, ikike onye ọrụ na akwụkwọ na kọmputa.
PCR arụ ọrụ
N'oge a na-agba ọsọ, DNA na-abawanye n'ime arịa mmeghachi omume, ebe nlele ọ bụla kwesịrị idobe otu ọnọdụ mmeghachi omume na-agbanwe agbanwe. Akụkụ ndị a dị mkpa maka usoro a:
Njikwa okpomọkụ
Ezigbo mma na njikwa okpomọkụ na homogeneity nke ngọngọ cycler bụ ihe ndabere maka ọbụna ọnọdụ okpomọkụ nke ihe nlele niile. Ogo dị elu nke ihe ndị na-ekpo ọkụ na ihe ndị na-ekpo ọkụ (peltier element), yana ụzọ e si ejikọta ihe ndị a na ngọngọ, bụ ihe ndị na-ekpebi ihe ga-ekpebi ihe ize ndụ nke esemokwu okpomọkụ a maara dị ka "mmetụta ihu"
evaporation
Nchịkọta nke ihe mmeghachi omume nke onye ọ bụla ekwesịghị ịgbanwe n'oge mmeghachi omume ahụ n'ihi evaporation. Ma ọ bụghị ya, ọ ga-ekwe omume nke ahụ dị ntakịrịNgwaahịa PCRnwere ike ịmepụta, ma ọ bụ ọ dịghị ma ọlị. Ya mere, ọ dị oke mkpa ibelata evaporation site n'ịhụ na akara akara. N'okwu a, mkpuchi na-ekpo ọkụ nke thermocycler na akara nke ụgbọ mmiri na-arụ ọrụ n'aka. Nhọrọ akara dị iche iche dị makaMpempe PCR (njikọ: akụkọ akara), ebe a na-enweta akara kacha mma site na mkpuchi okpomọkụ. Mkpuchi ndị ọzọ nwekwara ike dabara adaba, ọ bụrụhaala na nrụgide kọntaktị nke mkpuchi cycler nwere ike gbanwee na akara ahọpụtara.
Nhazi usoro dị n'ọnọdụ iji chekwaa nsonaazụ ziri ezi yana enwere ike imepụtaghachi n'ime ogologo oge. Nke a na-agụnye ịrụzi akụrụngwa mgbe niile iji hụ na ọ na-arụ ọrụ nke ọma mgbe niile. Ihe oriri niile kwesịrị ịdị na-adị elu mgbe niile n'ofe nza niile emepụtara, na a ga-enwerịrị ike ịnweta ha nwere ntụkwasị obi.
Oge nzipu: Nov-29-2022