Ego ole ka template ka anyị ga-agbakwunye na mmeghachi omume PCR m?

Ọ bụ ezie na na tiori, otu molekul nke template ahụ ga-ezuru, a na-ejikarị DNA buru ibu maka PCR kpochapụwo, dịka ọmụmaatụ, ruo 1 μg nke DNA mammalian genomic na ihe dị ka 1 pg nke DNA plasmid. Ọnụ ego kacha mma na-adabere n'ụzọ dị ukwuu na ọnụọgụ nke mbipụta nke usoro ebumnuche, yana na mgbagwoju anya ya.

Ọ bụrụ na ejiri obere ndebiri mee ihe, ọ ga-adị mkpa ka mmụba kwekọrọ na ọnụ ọgụgụ okirikiri nkwalite iji nweta oke ngwaahịa zuru oke. A Taq polymerase nke a na-eji maka ọtụtụ nyocha PCR adịghị arụ ọrụ mgbazi (ọrụ 3'-5' exonuclease); yabụ, enweghị ike idozi njehie na-eme n'oge mmụba. Ọnụ ọgụgụ nke okirikiri dị elu, ka mmụba nke ngwaahịa nwere ntụpọ ga-adị. Ọ bụrụ na, n'aka nke ọzọ, ọnụ ọgụgụ nke template dị oke elu, ihe gbasara nke puru omume na-eme ka ndị ọzọ (ọ bụghị otu narị pasent ekele) usoro, yana nhazi nke primer dimers, ga-abawanye, nke ga-eme ka mmụba nke ndị ọzọ. site-ngwaahịa. N'ọtụtụ ọnọdụ, DNA dịpụrụ adịpụ na omenala cell ma ọ bụ site na microorganisms wee jiri ya mee ihe dịka ndebiri PCR. Na-esote nchacha, ọ dị mkpa iji chọpụta ntinye nke DNA iji nwee ike ịkọwapụta olu achọrọ maka nhazi PCR. Ọ bụ ezie na agarose gel electrophoresis nwere ike inye atụmatụ, usoro a abụghị eziokwu. Emebela UV-Vis spectrophotometry dị ka ọkọlọtọ ọla edo maka ọnụọgụ nucleic acid; Nke a kpọmkwem na ya mere dị mfe na ngwa ngwa usoro jikoro absorbance nke sample na 260 nm, na ịta na-gbakọọ na-enyemaka nke a ntughari ihe.

Ọ bụrụ na ntinye DNA dị ntakịrị, Otú ọ dị (<1 µg/mL dsDNA), ma ọ bụ ọ bụrụ na ejiri ihe ndị na-etinye aka na 260 nm (dịka RNA, protein, salts), usoro a ga-eru oke ya. N'ihe gbasara mkpokọta dị ala, n'oge na-adịghị anya, agụ ga-abụ nke na-ezighi ezi iji mee ihe, na mmetọ ga-eduga na (mgbe ụfọdụ nnukwu) oke uru nke uru ahụ n'ezie. N'okwu a, ọnụọgụ n'iji fluorescence nwere ike iwepụta ihe ọzọ. Usoro a gbadoro ụkwụ na iji akwa fluorescent na-ejikọta kpọmkwem na dsDNA naanị mgbagwoju anya nke nwere nucleic acid na agba na-enwe obi ụtọ site na ìhè, ọ ga-emesịa na-amụnye ìhè nke obere ifegharị dị elu. N'ebe a, ike nke mgbaàmà fluorescent na-adaba na ọnụọgụ DNA, na maka ikpebi ntinye ya, a na-enyocha ya na usoro ọkọlọtọ. Uru nke usoro a dabere na nkọwapụta nke njikọ ahụ, nke na-ewepụ mmetụta mpụga sitere na mmetọ butere, yana n'ikike a na-enweta iji chọpụta mkpokọta DNA dị obere. Kwesịrị ekwesị nke usoro ọ bụla na-adabere karịsịa na nlele nlele na ịdị ọcha; n'ọtụtụ ọnọdụ, ọ nwere ike ịdị mma ka itinye usoro abụọ ahụ n'otu oge.