Untuk reaksi amplifikasi yang berhasil, perlu bahwa komponen reaksi individu hadir dalam konsentrasi yang benar dalam setiap persiapan. Selain itu, penting bahwa tidak ada kontaminasi yang terjadi.
Terutama ketika banyak reaksi harus diatur, telah ditetapkan untuk menyiapkan campuran master yang disebut alih-alih memetik setiap reagen secara terpisah ke dalam setiap kapal. Campuran yang dikonfigurasi sebelumnya tersedia secara komersial, di mana hanya komponen sampel khusus (primer) dan air yang ditambahkan. Atau, Master Mix dapat disiapkan sendiri. Dalam kedua varian, campuran didistribusikan ke masing -masing kapal PCR tanpa templat dan sampel DNA individual ditambahkan secara terpisah di akhir.
Menggunakan campuran master memiliki beberapa keunggulan: pertama, jumlah langkah pemipaan tunggal berkurang. Dengan cara ini, baik risiko kesalahan pengguna selama pemipaan dan risiko kontaminasi diminimalkan dan, tentu saja, waktu dihemat. Pada prinsipnya, akurasi pemipaan juga lebih tinggi, karena volume yang lebih besar diberi dosis. Ini mudah dimengerti ketika memeriksa data teknis pipet: semakin kecil volume dosis, semakin tinggi penyimpangan. Fakta bahwa semua persiapan berasal dari kapal yang sama memiliki efek positif pada homogenitas (jika dicampur dengan baik). Ini juga meningkatkan reproduktifitas eksperimen.
Saat menyiapkan campuran master, setidaknya 10 % volume ekstra harus ditambahkan (misalnya jika 10 persiapan diperlukan, hitung berdasarkan 11), sehingga bahkan kapal terakhir diisi dengan benar. Dengan cara ini, ketidakakuratan pemipaan (sedikit), dan efek kehilangan sampel ketika solusi yang mengandung deterjen dapat dikompensasi. Deterjen terkandung dalam larutan enzim seperti polimerase dan campuran master, menyebabkan pembentukan busa dan residu pada permukaan bagian dalam normalTip Pipet.
Bergantung pada aplikasi dan jenis cairan yang akan dikeluarkan, teknik pemipaan yang benar (1) harus dipilih dan peralatan yang sesuai dipilih. Untuk solusi yang mengandung deterjen, sistem perpindahan langsung atau yang disebut ujung pipet "retensi rendah" sebagai alternatif untuk pipet bantalan udara direkomendasikan. EfekKiat Pipet Acedidasarkan pada permukaan hidrofobik. Cairan yang mengandung deterjen tidak meninggalkan film residu di bagian dalam dan luar, sehingga hilangnya solusi dapat diminimalkan.
Selain dosis yang tepat dari semua komponen, penting juga bahwa tidak ada kontaminasi persiapan yang terjadi. Tidak cukup untuk menggunakan bahan habis pakai kemurnian tinggi, karena proses pemipaan dalam pipet bantal udara dapat menghasilkan aerosol yang tetap ada di pipet. DNA yang mungkin terkandung dalam aerosol dapat ditransfer dari satu sampel ke yang berikutnya dalam langkah pemipaan berikut dan dengan demikian menyebabkan kontaminasi. Sistem perpindahan langsung yang disebutkan di atas juga dapat meminimalkan risiko ini. Untuk pipet bantalan udara masuk akal untuk menggunakan ujung filter untuk melindungi kerucut pipet dengan mempertahankan percikan, aerosol, dan biomolekul.
Waktu posting: Des-06-2022