Cryovialbiasanya digunakan untuk penyimpanan kriogenik garis sel dan bahan biologis penting lainnya, dalam dewar yang diisi dengan nitrogen cair.

Ada beberapa tahapan yang terlibat dalam keberhasilan pengawetan sel dalam nitrogen cair. Meskipun prinsip dasarnya adalah pembekuan lambat, teknik yang digunakan bergantung pada jenis sel dan krioprotektan yang digunakan. Ada beberapa pertimbangan keselamatan dan praktik terbaik yang perlu dipertimbangkan ketika menyimpan sel pada suhu rendah.

Postingan ini bertujuan untuk memberikan gambaran tentang bagaimana cryovial disimpan dalam nitrogen cair.

Apa itu Cryovial

Cryovial adalah botol kecil bertutup yang dirancang untuk menyimpan sampel cair pada suhu yang sangat rendah. Mereka memastikan bahwa sel-sel yang diawetkan dalam krioprotektan tidak bersentuhan langsung dengan nitrogen cair, sehingga meminimalkan risiko keretakan sel sambil tetap mendapatkan manfaat dari efek pendinginan ekstrim dari nitrogen cair.

Botol biasanya tersedia dalam berbagai volume dan desain – botol dapat memiliki ulir internal atau eksternal dengan bagian bawah datar atau bulat. Format steril dan non-steril juga tersedia.

Siapa yang MenggunakanCyrovialuntuk Menyimpan Sel dalam Nitrogen Cair

Sejumlah laboratorium NHS dan swasta, serta lembaga penelitian yang berspesialisasi dalam perbankan darah tali pusat, biologi sel epitel, imunologi, dan biologi sel induk menggunakan cryovial untuk kriopreservasi sel.

Sel yang diawetkan dengan cara ini meliputi Sel B dan T, Sel CHO, Sel Punca dan Progenitor Hematopoietik, Hibridoma, Sel Usus, Makrofag, Sel Punca Mesenkim dan Sel Progenitor, Monosit, Mieloma, Sel NK, dan Sel Punca Pluripoten.

Ikhtisar Cara Menyimpan Cryovial dalam Nitrogen Cair

Kriopreservasi adalah proses mengawetkan sel dan konstruksi biologis lainnya dengan mendinginkannya hingga suhu yang sangat rendah. Sel dapat disimpan dalam nitrogen cair selama bertahun-tahun tanpa kehilangan kelangsungan hidup sel. Ini adalah garis besar prosedur yang digunakan.

Persiapan Sel

Metode yang tepat untuk menyiapkan sampel akan bervariasi tergantung pada jenis sel, namun secara umum, sel dikumpulkan dan disentrifugasi untuk menghasilkan pelet yang kaya sel. Pelet ini kemudian diresuspensi dalam supernatan yang dicampur dengan krioprotektan atau media kriopreservasi.

Media Kriopreservasi

Media ini digunakan untuk mengawetkan sel di lingkungan bersuhu rendah dengan menghambat pembentukan kristal intra dan ekstraseluler dan karenanya kematian sel. Perannya adalah menyediakan lingkungan yang aman dan protektif bagi sel dan jaringan selama proses pembekuan, penyimpanan, dan pencairan.

Media seperti plasma beku segar (FFP), larutan plasmalit yang diheparinisasi, atau larutan bebas komponen hewani serum dicampur dengan krioprotektan seperti dimetil sulfoksida (DMSO) atau gliserol.

Pelet sampel yang dicairkan kembali dicairkan ke dalam cryovial polipropilen sepertiBotol Penyimpanan Kriogenik perusahaan biomedis Suzhou Ace.

Penting untuk tidak mengisi cryovial secara berlebihan karena hal ini akan meningkatkan risiko retak dan kemungkinan keluarnya isinya (1).

Tingkat Pembekuan Terkendali

Secara umum, laju pembekuan yang dikontrol secara perlahan digunakan untuk keberhasilan kriopreservasi sel.

Setelah sampel dimasukkan ke dalam botol kriogenik, sampel ditempatkan di atas es basah atau di lemari es bersuhu 4℃ dan prosedur pembekuan dimulai dalam waktu 5 menit. Sebagai panduan umum, sel didinginkan dengan kecepatan -1 hingga -3 per menit (2). Hal ini dicapai dengan menggunakan pendingin yang dapat diprogram atau dengan menempatkan vial dalam kotak berinsulasi yang ditempatkan dalam freezer dengan kecepatan terkontrol –70°C hingga –90°C.

Pindahkan ke Nitrogen Cair

Botol kriogenik beku kemudian dipindahkan ke tangki nitrogen cair untuk jangka waktu tidak terbatas asalkan suhu dipertahankan kurang dari -135℃.

Suhu sangat rendah ini dapat diperoleh dengan merendam nitrogen dalam fase cair atau uap.

Fase Cair atau Uap?

Penyimpanan dalam nitrogen fase cair diketahui dapat menjaga suhu dingin dengan konsistensi absolut, namun seringkali tidak direkomendasikan karena alasan berikut:

• Kebutuhan akan nitrogen cair dalam jumlah besar (kedalaman) yang merupakan potensi bahaya. Luka bakar atau sesak napas akibat hal ini merupakan risiko yang nyata.
• Kasus kontaminasi silang yang terdokumentasi oleh agen infeksi seperti aspergillus, hep B dan penyebaran virus melalui media nitrogen cair (2,3)
• Potensi kebocoran nitrogen cair ke dalam vial selama perendaman. Ketika dikeluarkan dari penyimpanan dan dihangatkan hingga suhu kamar, nitrogen dengan cepat mengembang. Akibatnya, vial dapat pecah ketika dikeluarkan dari tempat penyimpanan nitrogen cair, sehingga menimbulkan bahaya baik dari serpihan yang beterbangan maupun paparan terhadap isinya (1, 4).

Karena alasan ini, penyimpanan suhu sangat rendah paling sering dilakukan dalam nitrogen fase uap. Jika sampel harus disimpan dalam fase cair, tabung cryoflex khusus harus digunakan.

Kelemahan dari fase uap adalah gradien suhu vertikal dapat terjadi sehingga mengakibatkan fluktuasi suhu antara -135℃ dan -190℃. Hal ini memerlukan pemantauan yang cermat dan rajin terhadap kadar nitrogen cair dan variasi suhu (5).

Banyak produsen merekomendasikan bahwa cryovial cocok untuk penyimpanan hingga -135℃ atau untuk digunakan dalam fase uap saja.

Mencairkan Sel Kriopreservasi Anda

Prosedur pencairan menimbulkan stres bagi kultur beku, dan penanganan serta teknik yang tepat diperlukan untuk memastikan kelangsungan hidup, pemulihan, dan fungsi sel yang optimal. Protokol pencairan yang tepat akan bergantung pada jenis sel tertentu. Namun, pencairan cepat dianggap sebagai standar untuk:

• Mengurangi dampak apa pun pada pemulihan sel
• Membantu mengurangi waktu pemaparan terhadap zat terlarut yang ada dalam media pembekuan
• Meminimalkan kerusakan akibat rekristalisasi es

Penangas air, penangas manik, atau instrumen otomatis khusus biasanya digunakan untuk mencairkan sampel.

Paling sering, 1 garis sel dicairkan sekaligus selama 1-2 menit, dengan memutar perlahan dalam penangas air bersuhu 37℃ hingga hanya tersisa sedikit es di dalam botol sebelum dicuci dalam media pertumbuhan yang telah dipanaskan sebelumnya.

Untuk beberapa sel seperti embrio mamalia, pemanasan yang lambat sangat penting untuk kelangsungan hidupnya.

Sel-sel tersebut sekarang siap untuk kultur sel, isolasi sel, atau dalam kasus sel induk hematopoietik – studi kelayakan untuk menjamin integritas sel induk donor sebelum terapi mieloablatif.

Merupakan praktik normal untuk mengambil sebagian kecil sampel yang telah dicuci sebelumnya yang digunakan untuk melakukan penghitungan sel guna menentukan konsentrasi sel untuk pelapisan dalam kultur. Anda kemudian dapat menilai hasil prosedur isolasi sel dan menentukan kelangsungan hidup sel.

Praktik Terbaik untuk Penyimpanan Cryovial

Keberhasilan kriopreservasi sampel yang disimpan dalam cryovial bergantung pada banyak elemen dalam protokol termasuk penyimpanan dan pencatatan yang tepat.

• Pisahkan sel antar lokasi penyimpanan– Jika volume memungkinkan, pisahkan sel di antara vial dan simpan di lokasi terpisah untuk mengurangi risiko hilangnya sampel karena kegagalan peralatan.
• Mencegah kontaminasi silang– Pilihlah botol kriogenik steril sekali pakai atau autoklaf sebelum penggunaan berikutnya
• Gunakan botol berukuran tepat untuk sel Anda– botol tersedia dalam kisaran volume antara 1 dan 5ml. Hindari mengisi botol secara berlebihan untuk mengurangi risiko retak.
• Pilih botol kriogenik berulir internal atau eksternal– Botol berulir internal direkomendasikan oleh beberapa universitas untuk tindakan keamanan – botol ini juga dapat mencegah kontaminasi selama pengisian atau saat disimpan dalam nitrogen cair.
• Mencegah Kebocoran- Gunakan segel dengan injeksi ganda yang dibentuk pada tutup ulir atau cincin-O untuk mencegah kebocoran dan kontaminasi.
• Gunakan kode batang 2D dan botol label– untuk memastikan ketertelusuran, vial dengan area penulisan yang luas memungkinkan setiap vial diberi label yang memadai. Kode batang 2D dapat membantu manajemen penyimpanan dan pencatatan. Tutup berkode warna berguna untuk memudahkan identifikasi.
• Pemeliharaan penyimpanan yang memadai- Untuk memastikan sel tidak hilang, wadah penyimpanan harus terus memantau suhu dan kadar nitrogen cair. Alarm harus dipasang untuk mengingatkan pengguna akan kesalahan.

Tindakan Pencegahan Keamanan

Nitrogen cair telah menjadi praktik umum dalam penelitian modern namun memiliki risiko cedera serius jika digunakan secara tidak benar.

Alat pelindung diri (APD) yang tepat harus dipakai untuk meminimalkan risiko radang dingin, luka bakar, dan insiden merugikan lainnya saat menangani nitrogen cair. Memakai

• Sarung tangan kriogenik
• Jas laboratorium
• Pelindung wajah penuh tahan benturan yang juga menutupi leher
• Sepatu dengan ujung tertutup
• Celemek plastik anti cipratan air

Lemari es nitrogen cair harus ditempatkan di area yang berventilasi baik untuk meminimalkan risiko sesak napas – nitrogen yang keluar akan menguap dan menggantikan oksigen di atmosfer. Penyimpanan dalam jumlah besar harus memiliki sistem alarm oksigen rendah.

Bekerja berpasangan ketika menangani nitrogen cair adalah hal yang ideal dan penggunaannya di luar jam kerja normal harus dilarang.

Cryovial untuk Mendukung Alur Kerja Anda

Perusahaan Biomedis Suzhou Ace menawarkan beragam pilihan produk yang memenuhi kebutuhan kriopreservasi Anda untuk berbagai jenis sel. Portofolionya mencakup rangkaian tabung serta rangkaian cryovial steril.

Cryovial kami adalah:

• Tutup Sekrup Lab 0.5mL 1.5mL 2.0mL Botol Kriogenik Cryovial Cryotube Bawah Kerucut dengan Gasket

  ● Spesifikasi 0,5ml,1,5ml,2,0ml, dengan rok atau tanpa rok
  ● Tersedia desain berbentuk kerucut atau berdiri sendiri, steril atau tidak steril
  ● Tabung bertutup ulir terbuat dari polipropilen kelas medis
  ● Botol PP Cryotube dapat dibekukan dan dicairkan berulang kali
  ●Desain tutup eksternal dapat mengurangi kemungkinan kontaminasi selama pengolahan sampel.
  ● Tutup ulir tabung kriogenik Ulir sekrup universal untuk digunakan
  ● Tabung cocok untuk sebagian besar rotor umum
  ● Tabung o-ring tabung kriogenik sesuai dengan kotak freezer standar 1 inci dan 2 inci, 48 lubang, 81 lubang, 96 lubang, dan 100 lubang
  ● Dapat diautoklaf hingga suhu 121°C dan dapat dibekukan hingga -86°C

  BAGIAN NO	BAHAN	VOLUME	TOPIWARNA	buah/TAS	TAS/KASUS
  ACT05-BL-N	PP	0,5ML	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10