Cryovialsbiasanya digunakan untuk penyimpanan kriogenik garis sel dan bahan biologis kritis lainnya, dalam embar yang diisi dengan nitrogen cair.

Ada beberapa tahap yang terlibat dalam keberhasilan pelestarian sel dalam nitrogen cair. Sementara prinsip dasarnya adalah pembekuan yang lambat, teknik yang tepat yang digunakan tergantung pada jenis sel dan cryoprotectant yang digunakan. Ada beberapa pertimbangan keselamatan dan praktik terbaik untuk dipertimbangkan saat menyimpan sel pada suhu rendah.

Posting ini bertujuan untuk memberikan gambaran tentang bagaimana cryovial disimpan dalam nitrogen cair.

Apa itu cryovial

Cryovial adalah botol kecil yang ditutup yang dirancang untuk menyimpan sampel cairan pada suhu yang sangat rendah. Mereka memastikan bahwa sel yang diawetkan dalam cryoprotectant tidak bersentuhan langsung dengan nitrogen cair, meminimalkan risiko fraktur sel sementara masih mendapat manfaat dari efek pendinginan ekstrem nitrogen cair.

Botol biasanya tersedia dalam berbagai volume dan desain - mereka dapat diulir secara internal atau eksternal dengan dasar datar atau bulat. Format steril dan non-steril juga tersedia.

Siapa yang menggunakanCyrovialuntuk menyimpan sel dalam nitrogen cair

Berbagai NHS dan laboratorium swasta, serta lembaga penelitian yang berspesialisasi dalam perbankan darah tali pusat, biologi sel epitel, imunologi dan biologi sel induk menggunakan cryovial untuk sel cryopreserve.

Sel yang diawetkan dengan cara ini termasuk sel B dan T, sel CHO, batang hematopoietik dan sel progenitor, hibridoma, sel usus, makrofag, sel batang mesenchymal dan sel progenitor, monosit, myeloma, sel NK dan sel induk pluripoten.

Tinjauan cara menyimpan cryovial dalam nitrogen cair

Cryopreservasi adalah proses yang melestarikan sel dan konstruksi biologis lainnya dengan mendinginkannya hingga suhu yang sangat rendah. Sel dapat disimpan dalam nitrogen cair selama bertahun -tahun tanpa kehilangan viabilitas sel. Ini adalah garis besar prosedur yang digunakan.

Persiapan sel

Metode yang tepat untuk menyiapkan sampel akan bervariasi tergantung pada jenis sel, tetapi secara umum, sel-sel dikumpulkan dan disentrifugasi untuk mengembangkan pelet yang kaya sel. Pelet ini kemudian diresuspensi dalam supernatan dicampur dengan cryoprotectant atau media cryopreservasi.

Media cryopreservasi

Media ini digunakan untuk melestarikan sel-sel di lingkungan suhu rendah yang akan dikenakan dengan menghambat pembentukan kristal intra dan ekstraseluler dan karenanya kematian sel. Peran mereka adalah untuk menyediakan lingkungan yang aman dan protektif untuk sel dan jaringan selama proses pembekuan, penyimpanan, dan pencairan.

Media seperti plasma beku segar (FFP), larutan plasmalyte heparin atau larutan bebas komponen hewan bebas serum dicampur dengan cryoprotectants seperti dimetil sulphoxide (DMSO) atau gliserol.

Pellet sampel yang diliputi ulang dialikasikan menjadi cryovial polypropylene sepertiSuzhou ace perusahaan biomedis vial penyimpanan cryogenic.

Penting untuk tidak memenuhi cryovial karena ini akan meningkatkan risiko retak dan kemungkinan pelepasan konten (1).

Tingkat pembekuan terkontrol

Secara umum, laju pembekuan yang terkontrol lambat digunakan untuk cryopreservasi sel yang berhasil.

Setelah sampel dialikasikan menjadi botol cryogenic, mereka ditempatkan di atas es basah atau di lemari es 4 ℃ dan prosedur pembekuan dimulai dalam waktu 5 menit. Sebagai panduan umum, sel didinginkan dengan kecepatan -1 hingga -3 per menit (2). Ini dicapai dengan menggunakan pendingin yang dapat diprogram atau dengan menempatkan botol dalam kotak terisolasi yang ditempatkan di –70 ° C hingga –90 ° C terkontrol laju freezer.

Transfer ke nitrogen cair

Botol kriogenik beku kemudian ditransfer ke tangki nitrogen cair untuk periode tidak terbatas asalkan suhu kurang dari -135 ℃ dipertahankan.

Suhu ultra-rendah ini dapat diperoleh dengan perendaman dalam nitrogen fase cair atau uap.

Fase cair atau uap?

Penyimpanan dalam fase cair nitrogen diketahui mempertahankan suhu dingin dengan konsistensi absolut, tetapi sering tidak direkomendasikan karena alasan berikut:

• Kebutuhan akan volume besar (kedalaman) nitrogen cair yang merupakan bahaya potensial. Luka bakar atau sesak napas karena ini adalah risiko nyata.
• Kasus kontaminasi silang yang terdokumentasi oleh agen infeksi seperti Aspergillus, Hep B dan penyebaran virus melalui media nitrogen cair (2,3)
• Potensi nitrogen cair untuk bocor ke dalam botol selama pencelupan. Saat dihilangkan dari penyimpanan dan dihangatkan ke suhu kamar, nitrogen dengan cepat mengembang. Akibatnya, botol dapat pecah ketika dihilangkan dari penyimpanan nitrogen cair, menciptakan bahaya dari puing -puing terbang dan paparan isinya (1, 4).

Untuk alasan ini, penyimpanan suhu ultra-rendah paling umum dalam nitrogen fase uap. Ketika sampel harus disimpan dalam fase cair, tabung cryoflex khusus harus digunakan.

Kelemahan ke fase uap adalah bahwa gradien suhu vertikal dapat terjadi yang mengakibatkan fluktuasi suhu antara -135 ℃ dan -190 ℃. Ini mengharuskan pemantauan yang cermat dan rajin dari kadar nitrogen cair dan variasi suhu (5).

Banyak produsen merekomendasikan bahwa cryovial cocok untuk penyimpanan hingga -135 ℃ atau untuk digunakan hanya dalam fase uap.

Mencairkan sel cryopreserved Anda

Prosedur pencairan sangat menegangkan untuk kultur beku, dan penanganan dan teknik yang tepat diperlukan untuk memastikan viabilitas, pemulihan, dan fungsionalitas sel yang optimal. Protokol pencairan yang tepat akan tergantung pada jenis sel tertentu. Namun, pencairan cepat dianggap standar untuk:

• Mengurangi dampak pada pemulihan seluler
• Membantu mengurangi waktu eksposur ke zat terlarut yang ada di media pembekuan
• Meminimalkan kerusakan apa pun dengan rekristalisasi es

Pemandian air, pemandian manik, atau instrumen otomatis khusus biasanya digunakan untuk mencairkan sampel.

Paling sering 1 garis sel dicairkan pada satu waktu selama 1-2 menit, dengan dengan lembut berputar-putar dalam penangas air 37 ℃ sampai hanya ada sedikit es yang tersisa di botol sebelum dicuci dalam media pertumbuhan sebelum waktunya.

Untuk beberapa sel seperti embrio mamalia, pemanasan lambat sangat penting untuk kelangsungan hidup mereka.

Sel -sel sekarang siap untuk kultur sel, isolasi sel, atau dalam kasus sel induk hematopoietik - studi viabilitas untuk menjamin integritas sel induk donor sebelum terapi myeloablative.

Ini adalah praktik normal untuk mengambil alikuot kecil dari sampel prewashed yang digunakan untuk melakukan jumlah sel untuk menentukan konsentrasi sel untuk pelapisan kultur. Anda kemudian dapat menilai hasil prosedur isolasi sel dan menentukan viabilitas sel.

Praktik terbaik untuk penyimpanan cryovial

Cryopreservasi sampel yang sukses yang disimpan dalam cryovial tergantung pada banyak elemen dalam protokol termasuk penyimpanan dan pencatatan yang tepat.

• Split sel antar lokasi penyimpanan- Jika volume memungkinkan, split sel antara botol dan menyimpannya di lokasi terpisah untuk mengurangi risiko kehilangan sampel karena kegagalan peralatan.
• Mencegah kontaminasi silang-Pilih vial cryogenic steril sekali pakai atau autoklaf sebelum penggunaan berikutnya
• Gunakan botol berukuran tepat untuk sel Anda- Botol datang dalam kisaran volume antara 1 dan 5mls. Hindari vial yang berlebihan untuk mengurangi risiko retak.
• Pilih botol kriogenik internal atau eksternal- Botol berulir internal direkomendasikan oleh beberapa universitas untuk langkah -langkah keamanan - mereka juga dapat mencegah kontaminasi selama pengisian atau ketika disimpan dalam nitrogen cair.
• Mencegah kebocoran-Gunakan segel bi-suntikan yang dicetak ke dalam cincin sekrup atau cincin-O untuk mencegah bocor dan kontaminasi.
• Gunakan barcode 2D dan label vials- Untuk memastikan keterlacakan, botol dengan area penulisan yang besar memungkinkan setiap botol untuk diberi label yang memadai. Barcode 2D dapat membantu manajemen penyimpanan dan penyimpanan. Tutup kode warna berguna untuk identifikasi yang lebih mudah.
• Pemeliharaan penyimpanan yang memadai- Untuk memastikan sel tidak hilang, kapal penyimpanan harus terus -menerus memantau kadar suhu dan nitrogen cair. Alarm harus dipasang untuk mengingatkan pengguna kesalahan.

Tindakan pencegahan keselamatan

Nitrogen cair telah menjadi praktik umum dalam penelitian modern tetapi membawa risiko cedera serius jika digunakan secara tidak benar.

Peralatan pelindung pribadi yang tepat (APD) harus dipakai untuk meminimalkan risiko radang dingin, luka bakar dan insiden buruk lainnya saat menangani nitrogen cair. Memakai

• Sarung tangan kriogenik
• Mantel laboratorium
• Perisai wajah penuh tahan benturan yang juga menutupi leher
• Sepatu tertutup
• Celemek plastik tahan percikan

Kulkas nitrogen cair harus ditempatkan di daerah yang berventilasi baik untuk meminimalkan risiko sesak napas-melarikan diri dari nitrogen menguap dan menggeser oksigen atmosfer. Simpan volume besar harus memiliki sistem alarm oksigen rendah.

Bekerja berpasangan saat menangani nitrogen cair sangat ideal dan penggunaannya di luar jam kerja normal harus dilarang.

Cryovials untuk mendukung alur kerja Anda

Suzhou Ace Biomedical Company menawarkan berbagai pilihan produk yang memenuhi kebutuhan cryopreservasi Anda untuk berbagai jenis sel. Portofolio mencakup berbagai tabung serta serangkaian cryovial steril.

Cryovial kami adalah:

• Tutup sekrup lab 0.5ml 1.5ml 2.0ml Cryovial Cryogenic Vials Conical Bottom Cryotube Dengan Gasket

  ● 0.5ml, 1.5ml, spesifikasi 2.0ml, dengan rok atau tanpa rok
  ● Desain kerucut atau berdiri sendiri, steril atau non-steril keduanya tersedia
  ● Tabung tutup sekrup terbuat dari polipropilen tingkat medis
  ● Botol Cryotube PP dapat berulang kali dibekukan dan dicairkan
  ● Desain tutup eksternal dapat mengurangi probabilitas kontaminasi selama perawatan sampel.
  ● tabung tabung kriogenik sekrup utas sekrup universal untuk digunakan
  ● Tabung cocok dengan rotor paling umum
  ● Tabung cincin-O-cincin Cryogenic sesuai dengan standar 1 inci dan 2-inci, 48well, 81well ， 96well dan 100well freezer boxes
  ● Autoclavable hingga 121 ° C dan freezable hingga -86 ° C

  Bagian no	BAHAN	VOLUME	TOPIWARNA	PC/TAS	Tas/kasing
  ACT05-BL-N	PP	0,5ml	Hitam, kuning, biru, merah, ungu, putih	500	10
  Act15-Bl-N	PP	1.5ml	Hitam, kuning, biru, merah, ungu, putih	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ml	Hitam, kuning, biru, merah, ungu, putih	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ml	Hitam, kuning, biru, merah, ungu, putih	500	10