Standarisasi proses mencakup optimasi dan pembentukan dan harmonisasi selanjutnya, memungkinkan kinerja optimal jangka panjang-terlepas dari pengguna. Standardisasi memastikan hasil berkualitas tinggi, serta reproduktifitas dan komparabilitasnya.
Tujuan PCR (klasik) adalah generasi hasil yang andal dan dapat direproduksi. Untuk aplikasi tertentu, hasilProduk PCRjuga relevan. Untuk reaksi ini, perawatan harus diambil untuk memastikan bahwa sampel tidak dikompromikan dan bahwa alur kerja PCR tetap stabil. Secara khusus, ini diterjemahkan untuk meminimalkan pengenalan kontaminasi yang dapat menyebabkan hasil negatif positif atau palsu palsu atau bahkan menghambat reaksi PCR. Selain itu, kondisi reaksi harus sama identiknya untuk setiap sampel individu dalam proses dan juga dapat ditransfer ke reaksi selanjutnya (dari metode yang sama). Ini mengacu pada komposisi reaksi serta jenis kontrol suhu pada pengendara sepeda. Kesalahan pengguna, tentu saja, harus dihindari sebanyak mungkin.
Di bawah ini, kami akan menunjukkan tantangan yang ditemui selama persiapan dan selama menjalankan PCR - dan pendekatan untuk solusi yang ada sehubungan dengan instrumen dan barang habis pakai yang digunakan untuk standardisasi alur kerja PCR.
Persiapan reaksi
Pengeluaran komponen reaksi ke dalam pcr-bejana, atau pelat, masing-masing, terdiri dari beberapa tantangan yang harus diatasi:
Kondisi reaksi
Dosis yang tepat dan tepat dari komponen individu sangat diperlukan saat mengincar kondisi reaksi yang paling identik. Selain teknik pemipaan yang baik, memilih alat yang tepat sangat penting. PCR Master-campuran sering mengandung zat yang meningkatkan viskositas atau menghasilkan busa. Selama proses pemipaan, ini mengarah pada pembasahan substansialTip Pipet, sehingga mengurangi akurasi pipetting. Penggunaan sistem pengeluaran langsung atau ujung pipet alternatif yang kurang rentan terhadap pembasahan dapat meningkatkan akurasi dan ketepatan proses pemipaan.
Kontaminasi
Selama proses pengeluaran, aerosol dihasilkan yang, jika diizinkan mencapai bagian dalam pipet, berpotensi mencemari sampel lain selama langkah pipeting berikutnya. Ini dapat dicegah dengan menggunakan tip filter atau sistem perpindahan langsung.
Barang habis pakai sepertiTips, kapal dan pelat yang digunakan dalam alur kerja PCR tidak boleh mengandung zat yang membahayakan sampel atau memalsukan hasilnya. Ini termasuk DNA, DNAS, RNase dan inhibitor PCR, serta komponen yang berpotensi menyelaraskan dari material selama reaksi - zat yang dikenal sebagai leachable.
Kesalahan pengguna
Semakin banyak sampel diproses, semakin tinggi risiko kesalahan. Dapat dengan mudah terjadi bahwa sampel dipipet ke kapal yang salah atau sumur yang salah. Risiko ini dapat dikurangi dengan penandaan sumur yang mudah dilihat. Melalui otomatisasi langkah-langkah pengeluaran, "faktor manusia", yaitu, kesalahan dan variasi terkait pengguna, diminimalkan, sehingga meningkatkan reproduktifitas, terutama dalam kasus volume reaksi kecil. Ini membutuhkan pelat stabilitas dimensi yang cukup untuk digunakan di stasiun kerja. Kode bar yang terpasang memberikan kemampuan membaca mesin tambahan, yang menyederhanakan pelacakan sampel di seluruh proses.
Pemrograman termosikler
Pemrograman instrumen dapat terbukti memakan waktu serta rawan kesalahan. Fitur pengendara sepeda termal PCR yang berbeda bekerja bersama untuk menyederhanakan langkah proses ini dan, yang paling penting, untuk membuatnya aman:
Operasi yang mudah dan panduan pengguna yang baik adalah dasar pemrograman yang efisien. Membangun di atas yayasan ini, administrasi pengguna yang dilindungi kata sandi akan mencegah program sendiri dari diubah oleh pengguna lain. Jika beberapa pengendara sepeda (dari jenis yang sama) digunakan, itu bermanfaat jika suatu program dapat ditransfer langsung dari satu instrumen ke instrumen lainnya melalui USB atau konektivitas. Perangkat lunak komputer memungkinkan administrasi program, hak pengguna, dan dokumen yang terpusat dan aman di komputer.
PCR berjalan
Selama menjalankan, DNA diamplifikasi dalam pembuluh reaksi, di mana setiap sampel harus mengalami kondisi reaksi yang identik dan konsisten. Aspek -aspek berikut relevan untuk prosesnya:
Kontrol suhu
Akurasi yang sangat baik dalam kontrol suhu dan homogenitas blok pengendara sepeda adalah dasar untuk pengkondisian suhu semua sampel. Kualitas tinggi elemen pemanas dan pendinginan (elemen peltier), serta cara di mana ini terhubung ke blok, adalah faktor penentu yang akan menentukan risiko perbedaan suhu yang dikenal sebagai "efek tepi"
Penguapan
Konsentrasi komponen reaksi individu tidak boleh berubah selama reaksi karena penguapan. Jika tidak, ada kemungkinannya sangat sedikitProduk PCRdapat dihasilkan, atau tidak sama sekali. Oleh karena itu penting untuk meminimalkan penguapan dengan memastikan segel yang aman. Dalam hal ini, tutup pemanas termosikler dan segel pembuluh kerja di tangan. Opsi penyegelan yang berbeda tersedia untukPelat PCR (tautan: artikel penyegelan), di mana segel terbaik dicapai melalui penyegelan panas. Penutupan lain mungkin juga cocok, selama tekanan kontak tutup pengendara sepeda dapat disesuaikan dengan segel yang dipilih.
Standardisasi proses ada untuk melindungi hasil yang akurat dan dapat direproduksi dalam jangka panjang. Ini termasuk pemeliharaan peralatan rutin untuk memastikan bahwa selalu dalam kondisi kerja yang baik. Semua bahan habis pakai harus memiliki kualitas tinggi secara konsisten di semua lot yang diproduksi, dan ketersediaannya yang andal harus dijamin.
Waktu posting: Nov-29-2022