Ketika volume pemipaan dari 0,2 hingga 5 μL, akurasi pemipaan dan presisi sangat penting, teknik pemipaan yang baik sangat penting karena menangani kesalahan lebih jelas dengan volume kecil.
Karena lebih banyak fokus ditempatkan pada pengurangan reagen dan biaya, volume yang lebih kecil dalam permintaan tinggi, misalnya, untuk persiapan reaksi PCR Mastermix atau enzim. Tetapi pemipaan volume kecil dari 0,2 - 5 μL menetapkan tantangan baru untuk akurasi dan presisi pemipaan. Poin -poin berikut sangat penting:
- Pipet dan Ukuran Tip: Selalu pilih pipet dengan volume nominal serendah mungkin dan ujung terkecil untuk menjaga bantal udara sekecil mungkin. Saat memipet 1 μl misalnya, pilih pipet 0,25 - 2,5 μl dan ujung yang cocok daripada pipet 1 - 10 μl.
- Kalibrasi dan pemeliharaan: Penting bahwa pipet Anda dikalibrasi dan dipelihara dengan baik. Penyesuaian kecil dan bagian yang rusak pada pipet menyebabkan peningkatan besar -besaran dalam nilai kesalahan sistematis dan acak. Kalibrasi menurut ISO 8655 harus dilakukan setahun sekali.
- Pipet perpindahan positif: Periksa apakah Anda memiliki pipet perpindahan positif dengan kisaran volume rendah di lab Anda. Secara umum, menggunakan jenis pipet ini mengarah ke hasil pipetting yang lebih baik dalam hal akurasi dan presisi daripada dengan pipet bantalan udara klasik.
- Cobalah untuk menggunakan volume yang lebih besar: Anda dapat mempertimbangkan untuk mengencerkan sampel Anda ke pipet volume yang lebih besar dengan jumlah yang sama dalam reaksi akhir. Ini dapat mengurangi kesalahan pemipaan dengan volume sampel yang sangat kecil.
Selain alat yang baik, peneliti harus memiliki teknik pemipaan yang sangat baik. Berikan perhatian khusus pada langkah -langkah berikut:
- Lampiran Tip: Jangan macet pipet ke ujung karena ini dapat merusak ujung ujung halus menyebabkan balok cair diarahkan atau merusak lubang. Hanya berikan tekanan ringan saat memasang ujung dan gunakan pipet dengan kerucut ujung pegas.
- Memegang pipet: Jangan pegang pipet di tangan Anda sambil menunggu centrifuge, pengendara sepeda, dll. Bagian dalam pipet akan memanas dan memimpin bantal udara untuk mengembang yang mengakibatkan penyimpangan dari volume yang ditetapkan saat memipet.
- Pre-wetting: Humidifikasi udara di dalam ujung dan pipet menyiapkan ujung untuk sampel dan menghindari penguapan saat aspirasi volume transfer.
- Aspirasi Vertikal: Ini sangat penting ketika menangani volume kecil untuk menghindari efek kapiler yang terjadi ketika pipet dipegang pada sudut.
- Kedalaman Perendaman: Rendam ujung sesedikit mungkin untuk mencegah cairan memasuki ujung karena efek kapiler. Aturan praktis: Semakin kecil ujung dan volume, semakin rendah kedalaman perendaman. Kami merekomendasikan maksimal 2 mm saat memetik volume kecil.
- Dispensing pada sudut 45 °: Optimal mengalir dari cairan dijamin ketika pipet ditahan pada sudut 45 °.
- Kontak ke dinding kapal atau permukaan cair: Volume kecil hanya dapat dibagikan dengan benar ketika ujung dipegang di dinding kapal, atau direndam menjadi cairan. Bahkan penurunan terakhir dari ujung dapat dikeluarkan secara akurat.
- Blow-out: Blow-out adalah wajib setelah mengeluarkan volume rendah untuk mengeluarkan bahkan setetes cairan terakhir yang ada di ujungnya. Peledakan juga harus dilakukan di dinding kapal. Berhati-hatilah untuk tidak membawa gelembung udara ke dalam sampel saat melakukan pukulan di permukaan cair.
Waktu pos: Feb-18-2021