Կրիովիալներսովորաբար օգտագործվում են բջջային գծերի և այլ կարևոր կենսաբանական նյութերի կրիոգեն պահեստավորման համար՝ հեղուկ ազոտով լցված դևարներում:

Հեղուկ ազոտում բջիջների հաջող պահպանման գործում մի քանի փուլ է ներգրավված: Թեև հիմնական սկզբունքը դանդաղ սառեցումն է, կիրառվող ճշգրիտ տեխնիկան կախված է օգտագործվող բջջի տեսակից և կրիոպաշտպանիչից: Կան մի քանի անվտանգության նկատառումներ և լավագույն պրակտիկա, որոնք պետք է հաշվի առնել նման ցածր ջերմաստիճանում բջիջները պահելիս:

Այս գրառման նպատակն է ակնարկ տալ, թե ինչպես են կրիովիալները պահվում հեղուկ ազոտում:

Ինչ են կրիովիալները

Կրիովիալները փոքր, կափարիչով սրվակներ են, որոնք նախատեսված են հեղուկ նմուշները չափազանց ցածր ջերմաստիճաններում պահելու համար: Նրանք ապահովում են, որ կրիոպաշտպանիչում պահպանված բջիջները անմիջական շփման մեջ չեն մտնում հեղուկ ազոտի հետ՝ նվազագույնի հասցնելով բջջային կոտրվածքների վտանգը, մինչդեռ օգտվում են հեղուկ ազոտի ծայրահեղ սառեցնող ազդեցությունից:

Սրվակները սովորաբար հասանելի են մի շարք ծավալներով և դիզայնով. դրանք կարող են ներքևից կամ դրսից պարուրվել հարթ կամ կլորացված հատակով: Հասանելի են նաև ստերիլ և ոչ ստերիլ ձևաչափեր:

Ով օգտագործում էCyrovialsբջիջները պահել հեղուկ ազոտի մեջ

Մի շարք NHS և մասնավոր լաբորատորիաներ, ինչպես նաև հետազոտական ​​հաստատություններ, որոնք մասնագիտացած են լարային արյան բանկային, էպիթելային բջիջների կենսաբանության, իմունոլոգիայի և ցողունային բջիջների կենսաբանության մեջ, օգտագործում են կրիովիալներ՝ բջիջները կրիոպահպանման համար:

Այս եղանակով պահպանված բջիջները ներառում են B և T բջիջները, CHO բջիջները, արյունաստեղծ ցողունային և նախածննդյան բջիջները, հիբրիդոմները, աղիքային բջիջները, մակրոֆագները, մեզենխիմալ ցողունային և նախածննդյան բջիջները, մոնոցիտները, միելոման, NK բջիջները և բազմաուժ ցողունային բջիջները:

Հեղուկ ազոտի մեջ կրիովիալները պահելու ակնարկ

Կրիոպահպանումը գործընթաց է, որը պահպանում է բջիջները և այլ կենսաբանական կառուցվածքները՝ դրանք սառեցնելով մինչև շատ ցածր ջերմաստիճան: Բջիջները կարող են տարիներ շարունակ պահպանվել հեղուկ ազոտի մեջ՝ առանց բջիջների կենսունակության կորստի: Սա կիրառվող ընթացակարգերի ուրվագիծն է:

Բջիջների պատրաստում

Նմուշների պատրաստման ճշգրիտ մեթոդը կտարբերվի՝ կախված բջջի տեսակից, բայց ընդհանուր առմամբ, բջիջները հավաքվում և ցենտրիֆուգվում են՝ բջիջներով հարուստ գնդիկ ստեղծելու համար: Այս գնդիկն այնուհետև նորից կասեցվում է կրիոպրոտեկտանտի կամ կրիոպսերվացման միջավայրի հետ խառնված վերին նյութի մեջ:

Կրիոպահպանման միջավայր

Այս միջավայրը օգտագործվում է բջիջները պահպանելու համար այն ցածր ջերմաստիճանի միջավայրում, որին նրանք ենթարկվելու են՝ արգելակելով ներբջջային և արտաբջջային բյուրեղների ձևավորումը և, հետևաբար, բջիջների մահը: Նրանց դերը բջիջների և հյուսվածքների համար անվտանգ, պաշտպանիչ միջավայր ապահովելն է սառեցման, պահպանման և հալման գործընթացների ընթացքում:

Միջոցը, ինչպիսին է թարմ սառեցված պլազման (FFP), հեպարինացված պլազմալիտի լուծույթը կամ շիճուկից զերծ, կենդանական բաղադրիչներից զերծ լուծույթները խառնվում են կրիոպաշտպանիչների հետ, ինչպիսիք են դիմեթիլ սուլֆօքսիդը (DMSO) կամ գլիցերինը:

Վերահեղուկացված նմուշի գնդիկը բաժանվում է պոլիպրոպիլենային կրիովիալների, ինչպիսիք ենSuzhou Ace Biomedical ընկերությունը Cryogenic Storage Vials.

Կարևոր է չլցնել կրիովիալները, քանի որ դա կբարձրացնի ճաքերի և պարունակության հնարավոր ազատման վտանգը (1):

Վերահսկվող սառեցման արագություն

Ընդհանուր առմամբ, դանդաղ վերահսկվող սառեցման արագությունը օգտագործվում է բջիջների հաջող կրիոպահպանման համար:

Նմուշները կրիոգեն սրվակների մեջ բաժանվելուց հետո դրանք տեղադրվում են թաց սառույցի վրա կամ 4℃ սառնարանում, և սառեցման գործընթացը սկսվում է 5 րոպեի ընթացքում: Որպես ընդհանուր ուղեցույց, բջիջները սառչում են րոպեում -1-ից -3 արագությամբ (2): Դա ձեռք է բերվում ծրագրավորվող հովացուցիչի միջոցով կամ սրվակները տեղադրելով մեկուսացված տուփի մեջ, որը տեղադրված է –70°C-ից –90°C վերահսկվող արագությամբ սառնարանում:

Փոխանցում հեղուկ ազոտի

Այնուհետև սառեցված կրիոգեն սրվակները տեղափոխվում են հեղուկ ազոտի տանկ անորոշ ժամանակով, եթե պահպանվի -135℃-ից ցածր ջերմաստիճան:

Այս ծայրահեղ ցածր ջերմաստիճանները կարելի է ձեռք բերել հեղուկ կամ գոլորշու ֆազային ազոտի մեջ ընկղմելով:

Հեղուկ, թե գոլորշի փուլ.

Հայտնի է, որ հեղուկ ֆազային ազոտի մեջ պահեստավորումը պահպանում է սառը ջերմաստիճանը բացարձակ հետևողականությամբ, բայց հաճախ խորհուրդ չի տրվում հետևյալ պատճառներով.

• Հեղուկ ազոտի մեծ ծավալների (խորության) անհրաժեշտությունը, որը պոտենցիալ վտանգ է ներկայացնում: Դրա պատճառով այրվածքները կամ շնչահեղձությունը իրական վտանգ է:
• Վարակիչ նյութերի, ինչպիսիք են ասպերգիլուսը, հեպատ B-ն և վիրուսային տարածումը հեղուկ ազոտի միջավայրի միջոցով խաչաձև աղտոտման փաստագրված դեպքեր (2,3)
• Ընկղման ընթացքում սրվակների մեջ հեղուկ ազոտի արտահոսքի հնարավորությունը: Երբ հանվում է պահեստից և տաքացվում մինչև սենյակային ջերմաստիճան, ազոտը արագորեն ընդլայնվում է: Հետևաբար, հեղուկ ազոտի պահեստից հեռացնելիս սրվակը կարող է փշրվել՝ վտանգ ստեղծելով ինչպես թռչող բեկորներից, այնպես էլ պարունակության ազդեցությունից (1, 4):

Այս պատճառներով ծայրահեղ ցածր ջերմաստիճանի պահեստավորումն առավել հաճախ կատարվում է գոլորշի փուլային ազոտում: Երբ նմուշները պետք է պահվեն հեղուկ փուլում, պետք է օգտագործվեն հատուկ կրիոֆլեքս խողովակներ:

Գոլորշիների փուլի բացասական կողմն այն է, որ կարող է առաջանալ ուղղահայաց ջերմաստիճանի գրադիենտ, որի արդյունքում ջերմաստիճանի տատանումներ կլինեն -135℃-ից -190℃: Սա պահանջում է հեղուկ ազոտի մակարդակների և ջերմաստիճանի տատանումների ուշադիր և ջանասիրաբար մոնիտորինգ (5):

Շատ արտադրողներ խորհուրդ են տալիս, որ կրիովիալները հարմար են մինչև -135℃ պահպանման կամ միայն գոլորշիների փուլում օգտագործելու համար:

Ձեր կրիոպահպանված բջիջների հալեցում

Հալեցման պրոցեդուրան սթրեսային է սառեցված կուլտուրաների համար, և բջիջների օպտիմալ կենսունակությունը, վերականգնումը և ֆունկցիոնալությունը ապահովելու համար անհրաժեշտ է պատշաճ մշակում և տեխնիկա: Հալեցման ճշգրիտ արձանագրությունները կախված կլինեն բջիջների հատուկ տեսակներից: Այնուամենայնիվ, արագ հալեցումը համարվում է ստանդարտ.

• Նվազեցնել ցանկացած ազդեցություն բջջային վերականգնման վրա
• Օգնեք նվազեցնել սառեցման միջավայրում առկա լուծույթների ազդեցության ժամանակը
• Սառույցի վերաբյուրեղացման արդյունքում նվազագույնի հասցրեք ցանկացած վնաս

Նմուշները հալեցնելու համար սովորաբար օգտագործվում են ջրային լոգարաններ, ուլունքներով լոգարաններ կամ մասնագիտացված ավտոմատացված գործիքներ:

Ամենից հաճախ 1 բջջային գիծը միաժամանակ հալեցնում են 1-2 րոպե՝ նրբորեն պտտելով 37℃ ջրային բաղնիքում, մինչև սրվակի մեջ մի փոքր սառույց մնա, նախքան դրանք լվացվեն նախապես տաքացված աճեցման միջավայրում:

Որոշ բջիջների համար, ինչպիսիք են կաթնասունների սաղմերը, դանդաղ տաքացումը էական է նրանց գոյատևման համար:

Բջիջներն այժմ պատրաստ են բջիջների կուլտուրայի, բջիջների մեկուսացման կամ արյունաստեղծ ցողունային բջիջների դեպքում՝ կենսունակության ուսումնասիրություններ՝ երաշխավորելու դոնոր ցողունային բջիջների ամբողջականությունը մինչև միելոաբլատիվ թերապիան:

Սովորական պրակտիկա է նախապես լվացված նմուշից փոքր չափաբաժիններ վերցնելը, որն օգտագործվում է բջիջների հաշվում իրականացնելու համար՝ որոշելու համար բջիջների կոնցենտրացիաները մշակության մեջ ծածկելու համար: Այնուհետև կարող եք գնահատել բջիջների մեկուսացման ընթացակարգերի արդյունքները և որոշել բջիջների կենսունակությունը:

Կրիովիալների պահպանման լավագույն փորձը

Կրիովիալներում պահվող նմուշների հաջող կրիոպահպանումը կախված է արձանագրության բազմաթիվ տարրերից, ներառյալ պատշաճ պահպանումը և գրառումների պահպանումը:

• Բջիջները բաժանեք պահեստավորման վայրերի միջև– Եթե ծավալները թույլ են տալիս, բաժանեք բջիջները սրվակների միջև և պահեք դրանք առանձին վայրերում՝ սարքավորումների խափանումների պատճառով նմուշի կորստի ռիսկը նվազեցնելու համար:
• Կանխել խաչաձեւ աղտոտումը– Ընտրեք մեկանգամյա օգտագործման ստերիլ կրիոգեն սրվակներ կամ ավտոկլավ՝ հետագա օգտագործումից առաջ
• Ձեր բջիջների համար օգտագործեք համապատասխան չափի սրվակներ- սրվակները գալիս են 1-ից 5 մլ ծավալների միջակայքում: Խուսափեք սրվակների չափից ավելի լիցքավորումից՝ ճաքելու վտանգը նվազեցնելու համար:
• Ընտրեք ներքին կամ արտաքին թելերով կրիոգեն սրվակներ– Անվտանգության միջոցառումների համար որոշ համալսարաններ խորհուրդ են տալիս ներքին թելերով սրվակները. դրանք կարող են նաև կանխել աղտոտումը լցնելու ընթացքում կամ հեղուկ ազոտում պահելու ժամանակ:
• Կանխել արտահոսքը- Օգտագործեք երկու ներարկված կնիքները, որոնք կաղապարված են պտուտակային գլխարկի կամ O-օղակների մեջ՝ արտահոսքը և աղտոտումը կանխելու համար:
• Օգտագործեք 2D շտրիխ կոդեր և պիտակի սրվակներ– Հետագծելիություն ապահովելու համար գրելու մեծ տարածքներով սրվակները հնարավորություն են տալիս յուրաքանչյուր սրվակի համապատասխան պիտակավորում ունենալ: 2D շտրիխ կոդերը կարող են օգնել պահեստավորման կառավարման և գրառումների պահպանման հարցում: Գունավոր կոդավորված գլխարկները օգտակար են ավելի հեշտ նույնականացման համար:
• Բավարար պահեստային սպասարկում- Բջիջները չկորցնելու համար պահեստային անոթները պետք է մշտապես վերահսկեն ջերմաստիճանը և հեղուկ ազոտի մակարդակը: Զարթուցիչները պետք է տեղադրվեն՝ օգտատերերին սխալների մասին զգուշացնելու համար:

Անվտանգության նախազգուշական միջոցներ

Հեղուկ ազոտը սովորական պրակտիկա է դարձել ժամանակակից հետազոտություններում, սակայն սխալ օգտագործման դեպքում կրում է լուրջ վնասվածքների վտանգ:

Հեղուկ ազոտի հետ աշխատելիս ցրտահարության, այրվածքների և այլ անբարենպաստ միջադեպերի ռիսկը նվազագույնի հասցնելու համար պետք է կրել համապատասխան անձնական պաշտպանիչ սարքավորումներ (PPE): Հագնում

• Կրիոգենիկ ձեռնոցներ
• Լաբորատոր վերարկու
• Հարվածների դիմացկուն ամբողջական դեմքի վահան, որը նաև ծածկում է պարանոցը
• Փակ կոշիկներ
• Պլաստիկ գոգնոց ցայտելու համար

Հեղուկ ազոտի սառնարանները պետք է տեղադրվեն լավ օդափոխվող տարածքներում, որպեսզի նվազագույնի հասցվի շնչահեղձության վտանգը. Մեծ ծավալի պահեստները պետք է ունենան ցածր թթվածնի ազդանշանային համակարգեր:

Հեղուկ ազոտի հետ աշխատելիս զույգերով աշխատելը իդեալական է, և դրա օգտագործումը սովորական աշխատանքային ժամերից դուրս պետք է արգելվի:

Cryovials՝ ձեր աշխատանքային հոսքին աջակցելու համար

Suzhou Ace Biomedical ընկերությունը առաջարկում է ապրանքների լայն ընտրանի, որոնք բավարարում են տարբեր տեսակի բջիջների կրիոպահպանման ձեր կարիքները: Պորտֆոլիոն ներառում է մի շարք խողովակներ, ինչպես նաև մի շարք ստերիլ կրիովիալներ:

Մեր կրիովիալներն են.

• Lab Screw Cap 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Vials Conical Bottom Cryotube with Gasket

  ● 0,5 մլ, 1,5 մլ, 2,0 մլ հստակեցում, կիսաշրջազգեստով կամ առանց կիսաշրջազգեստի
  ● Հասանելի են կոնաձև կամ ինքնուրույն ձևավորում, ստերիլ կամ ոչ ստերիլ
  ● Պտուտակային գլխարկի խողովակները պատրաստված են բժշկական կարգի պոլիպրոպիլենից
  ● PP Cryotube Vials-ը կարելի է բազմիցս սառեցնել և հալեցնել
  ● Արտաքին գլխարկի դիզայնը կարող է նվազեցնել աղտոտման հավանականությունը նմուշի մշակման ժամանակ:
  ● Պտուտակային գլխարկ կրիոգեն խողովակներ Օգտագործման համար ունիվերսալ պտուտակային թելեր
  ● Խողովակները համապատասխանում են ամենատարածված ռոտորներին
  ● Կրիոգենիկ խողովակի o-ring խողովակները տեղավորվում են ստանդարտ 1-դյույմանոց և 2-դյույմանոց, 48 ջրհոր, 81 հորատանցք, 96 ջրհոր և 100 ջրատար սառնարանային տուփերի համար:
  ● Ավտոկլավվում է մինչև 121°C և սառչում մինչև -86°C

  ՄԱՍ ԹԻՎ	ՆՅՈՒԹ	ԾԱՎԱԼ	CAPԳՈՒՅՆ	հատ/ՊԱՍԿ	ՊԱՍԿԵՐ/ՊԱՏՈՒԿ
  ACT05-BL-N	PP	0,5 մլ	Սև, Դեղին, Կապույտ, Կարմիր, Մանուշակագույն, Սպիտակ	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1,5 մլ	Սև, Դեղին, Կապույտ, Կարմիր, Մանուշակագույն, Սպիտակ	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1,5 մլ	Սև, Դեղին, Կապույտ, Կարմիր, Մանուշակագույն, Սպիտակ	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0 մլ	Սև, Դեղին, Կապույտ, Կարմիր, Մանուշակագույն, Սպիտակ	500	10