Ճգնավորսովորաբար օգտագործվում են բջջային գծերի կրիոգեն պահեստավորման եւ այլ կարեւոր կենսաբանական նյութերի համար, հեղուկ ազոտով լցված Dewars- ում:

Հեղուկ ազոտի մեջ բջիջների հաջող պահպանման մեջ ներգրավված մի քանի փուլեր կան: Մինչ հիմնական սկզբունքը դանդաղ սառեցում է, որն աշխատում է ճշգրիտ տեխնիկան, կախված բջջային տեսակից եւ կրիոպրոկեկտից: Կան մի քանի անվտանգության նկատառումներ եւ լավագույն փորձեր, որոնք հաշվի են առնում բջիջները այդպիսի ցածր ջերմաստիճանում պահելու ժամանակ:

Այս գրառումը նպատակ ունի ակնարկ տալ այն մասին, թե ինչպես են կրոնականները պահվում հեղուկ ազոտի մեջ:

Որոնք են cryovials

Cryovials- ը փոքր, ծածկված սրվակներ են, որոնք նախատեսված են հեղուկ նմուշներ ծայրահեղ ցածր ջերմաստիճանում պահելու համար: Նրանք ապահովում են, որ Cryoprotectant- ում պահպանված բջիջները չեն շփվում հեղուկ ազոտի հետ, նվազագույնի հասցնելով բջջային կոտրվածքների ռիսկը, որը դեռեւս օգուտ է քաղում հեղուկ ազոտի ծայրահեղ սառեցման ազդեցությունից:

Վիալները սովորաբար մատչելի են մի շարք ծավալներով եւ ձեւավորումներով. Դրանք կարող են լինել ներքին կամ արտաքին թելերով հարթ կամ կլորացված ներքեւներով: Առկա են նաեւ ստերիլ եւ ոչ ստերիլ ձեւաչափեր:

Ով է օգտագործումCyroovialsՀեղուկ ազոտի բջիջները պահելու համար

Մի շարք NHS եւ մասնավոր լաբորատորիաներ, ինչպես նաեւ հետազոտական ​​հաստատություններ, որոնք մասնագիտանում են լարի արյան բանկային գործի, էպիթելի բջիջների կենսաբանության, իմունոլոգիայի եւ ցողունային բջիջների կենսաբանության մեջ, օգտագործում են CryOpreserve բջիջների ճգնաժամերը:

Այս եղանակով պահպանված բջիջները ներառում են B եւ T բջիջներ, CHO բջիջներ, հեմատոպեետիկ ցողուններ եւ սերունդանյութեր, հիբրիդոմներ, աղիքային բջիջներ, մակրոֆագներ, MesenCal Cell բջիջներ, մոնոկիտներ, myeloma, լ. Բջիջներ եւ պլուրիպոտենտային ցողունային բջիջներ:

Ակնարկ, թե ինչպես պահել Cryovials- ը հեղուկ ազոտով

Cryopreservation- ը գործընթաց է, որը պահպանում է բջիջներն ու կենսաբանական այլ կառուցվածքները `դրանք սառեցնելով շատ ցածր ջերմաստիճանների վրա: Բջիջները կարող են տարիներ պահվել հեղուկ ազոտի մեջ `առանց բջիջների կենսունակության կորստի: Սա գործածված ընթացակարգերի ուրվագիծ է:

Բջջային պատրաստում

Նմուշների պատրաստման ճշգրիտ մեթոդը տարբեր կլինի `կախված բջջային տեսակից, բայց, ընդհանուր առմամբ, բջիջները հավաքվում եւ կենտրոնացված են բջջային հարուստ գնդիկավորելու համար: Այս գնդիկմուշը այնուհետեւ վերափոխվում է գերբնական խառնուրդով, որը խառնվում է Cryoprotectant- ի կամ Cryopreservation Medie- ի հետ:

Cryopreservation Medium

Այս միջոցը աշխատում է ցածր ջերմաստիճանի միջավայրում բջիջները պահպանելու համար, դրանք ենթարկվելու են `խանգարելով ներհամայնքի եւ արտաբջջային բյուրեղների ձեւավորմանը եւ, հետեւաբար, բջջային մահը: Նրանց դերը սառեցման, պահպանման եւ հալման գործընթացների ընթացքում բջիջների եւ հյուսվածքների անվտանգ, պաշտպանիչ միջավայր ապահովելն է:

Մի միջոց, ինչպիսիք են թարմ սառեցված պլազմա (FFP), հանկարծված պլազմալի լուծույթ կամ շիճուկից ազատ, կենդանիների բաղադրիչ անվճար լուծումներ, որոնք խառնվում են այնպիսի կրպագեղիչների հետ, ինչպիսիք են Dimethyl սուլֆօքսիդը (DMSO) կամ գլիցերինը:

Վերականգնվող նմուշի գնդիկավորումը հավասար է պոլիպրոպիլենային ճաճույների մեջ, ինչպիսիք ենSuzhou Ace կենսաբժշկական ընկերություն Cryogenic Storage սրվակներ.

Կարեւոր է չլրացնել չխորտակները, քանի որ դա կբարձրացնի բովանդակության կոտրման եւ հնարավոր ազատման ռիսկը (1):

Վերահսկվող սառեցման արագությունը

Ընդհանուր առմամբ, դանդաղ վերահսկվող սառեցման դրույքաչափը օգտագործվում է բջիջների հաջող գաղտնահանման համար:

Այն բանից հետո, երբ նմուշները խառնվում են կրիոգեն սրվակների մեջ, դրանք տեղադրված են թաց սառույցի վրա կամ 4 ℃ սառնարանում եւ սառեցման կարգը սկսվում է 5 րոպեի ընթացքում: Որպես ընդհանուր ուղեցույց, բջիջները սառչում են -1-ից -3-ի փոխարժեքով մեկ րոպեի դիմաց (2): Դա ձեռք է բերվում `օգտագործելով ծրագրավորվող ավելի զովացուցիչ կամ սրվակներով տեղադրելով մեկուսացված տուփի մեջ տեղադրված մեկուսացված տուփի մեջ, որը տեղադրված է -70 ° C-90 ° C- ի վերահսկվող տոկոսադրույքի սառնարանով:

Տեղափոխում հեղուկ ազոտին

Սառեցված Cryogenic Gials- ը այնուհետեւ տեղափոխվում է հեղուկ ազոտի բաք, անորոշ ժամանակաշրջանների համար `ապահովված է -135-ից պակաս ջերմաստիճան:

Այս ծայրահեղ ցածր ջերմաստիճանը կարելի է ձեռք բերել հեղուկի կամ գոլորշիների փուլի ազոտով ընկղմամբ:

Հեղուկի կամ գոլորշիների փուլ:

Հեղուկ փուլում պահելը հայտնի է, որ պահպանում է սառը ջերմաստիճանը բացարձակ հետեւողությամբ, բայց հաճախ չի առաջարկվում հետեւյալ պատճառներով.

• Հեղուկ ազոտի մեծ ծավալի (խորության) անհրաժեշտությունը, որը հավանական վտանգ է ներկայացնում: Դրա պատճառով այրվածքները կամ ասֆիքսումը իրական ռիսկ է:
• Վարակիչ գործակալների կողմից խաչաձեւ աղտոտման դեպքեր, ինչպիսիք են Aspergillus, HEP B եւ վիրուսային տարածում հեղուկ ազոտի միջին (2,3) միջոցով
• Հեղուկ ազոտի ներուժը ընկղմման ընթացքում սրվակների արտահոսք է: Երբ պահումից հեռացված եւ տաքացվեց սենյակային ջերմաստիճանում, ազոտը արագորեն ընդլայնվում է: Հետեւաբար, սրվակը կարող է թափվել հեղուկ ազոտի պահեստից, քանի որ վտանգավոր բեկորներից վտանգ է ներկայացնում եւ բովանդակության ազդեցությունից (1, 4):

Այս պատճառներով ծայրահեղ ցածր ջերմաստիճանի պահպանումը ամենատարածվածն է գոլորշիների փուլային ազոտի մեջ: Երբ նմուշները պետք է պահվեն հեղուկ փուլում, պետք է օգտագործվեն մասնագիտացված cryoflex խողովակներ:

Գոլորշիների փուլի անկումն այն է, որ ուղղահայաց ջերմաստիճանի գրադիենտ կարող է առաջանալ, որի արդյունքում ջերմաստիճանի տատանումներ -135 ℃ եւ -190 ℃: Սա պահանջում է հեղուկ ազոտի մակարդակի եւ ջերմաստիճանի տատանումների զգույշ եւ ջանասեր մոնիտորինգ (5):

Շատ արտադրողներ խորհուրդ են տալիս, որ Cryovials- ը հարմար է պահելու համար -135 ℃ կամ միայն գոլորշիների փուլում օգտագործելու համար:

Հալելով ձեր կրոնոզ բջիջները

Հալելու կարգը սթրեսային է սառեցված մշակույթի համար, եւ պահանջվում է պատշաճ վարում եւ տեխնիկա `բջիջների օպտիմալ կենսունակությունը, վերականգնումը եւ գործառույթը ապահովելու համար: Հալածական արձանագրությունները կախված կլինեն բջջային հատուկ տեսակներից: Այնուամենայնիվ, արագ հալեցումը համարվում է ստանդարտ,

• Նվազեցրեք բջջային վերականգնման վրա ցանկացած ազդեցություն
• Օգնեք նվազեցնել ազդեցության ժամանակը սառեցնող լրատվամիջոցներում առկա լուծույթներին
• Նվազագույնի հասցնել սառույցի վերամշակման ցանկացած վնաս

Water րի լոգանքները, բշտիկ լոգանքները կամ մասնագիտացված ավտոմատացված գործիքները սովորաբար օգտագործվում են նմուշների հալելու համար:

Առավել հաճախ 1 բջջային գիծը 1-2 րոպե տեւողությամբ հալվում է 37 ℃ ջրային բաղնիքում նրբորեն պտտվելով, քանի դեռ սրվակի մեջ մնում է ընդամենը մի փոքր սառույց:

Որոշ բջիջների համար, ինչպիսիք են կաթնասունների սաղմերը, դանդաղ տաքացումը անհրաժեշտ է դրանց գոյատեւման համար:

Բջիջներն այժմ պատրաստ են բջջային մշակույթի, բջջային մեկուսացման կամ հեմակոպեետական ​​ցողունային բջիջների դեպքում `կենսունակության ուսումնասիրություններ` երաշխավորելու դոնորական ցողունային բջիջների ամբողջականությունը MyEloableative թերապիայի առաջ:

Նորմալ պրակտիկա է PrewaShed նմուշի փոքր այլընտրանքները, որոնք օգտագործվում են բջջային հաշվարկ կատարելու համար `բջջային կոնցենտրացիաները որոշելու համար մշակույթում սալիկապատման համար: Այնուհետեւ կարող եք գնահատել բջջային մեկուսացման ընթացակարգերի արդյունքները եւ որոշել բջիջների կենսունակությունը:

Կրոնովների պահպանման լավագույն փորձը

Cr իրհովներում պահվող նմուշների հաջող գաղտնիքը կախված է արձանագրության բազմաթիվ տարրերից, ներառյալ պատշաճ պահեստավորում եւ գրառումներ:

• Պառակտված բջիջները պահեստավորման վայրերի միջեւ- Եթե ծավալները թույլ են տալիս, բեկորային բջիջներ սրվակների միջեւ եւ դրանք պահեք առանձին վայրերում, սարքավորումների ձախողումների պատճառով նմուշի կորստի ռիսկը նվազեցնելու համար:
• Կանխել խաչաձեւ աղտոտումը- Ընտրեք մեկանգամյա ստերիլ Cryogenic Gials կամ AutoClave- ը նախքան հետագա օգտագործումը
• Օգտագործեք համապատասխան չափի սրվակներ ձեր բջիջների համար- Վիալները գալիս են 1-ից 5 մմ-ականների միջեւ մի շարք ծավալներով: Խուսափեք գերբեռնված սրվակներից `կոտրելու ռիսկը նվազեցնելու համար:
• Ընտրեք ներքին կամ արտաքին սեղմված cryogenic սրվակները- Ներքին ակոսավոր սրվակները որոշ բուհերի կողմից առաջարկվում են անվտանգության միջոցառումների համար. Նրանք կարող են նաեւ կանխել աղտոտումը լրացնելիս կամ հեղուկ ազոտում պահվելիս:
• Կանխել արտահոսքը- Օգտագործեք պտուտակային գլխարկ կամ օ-օղակների մեջ ձուլված երկկողմանի կնիքներ `արտահոսքը եւ աղտոտումը կանխելու համար:
• Օգտագործեք 2D շտրիխ եւ պիտակի սրվակներ- Անվտանգության ապահովման համար, գրավոր մեծ տարածքներով սրվակները հնարավորություն են տալիս յուրաքանչյուր սրվակին համապատասխան պիտակավորված լինել: 2D շտրիխ կոդերը կարող են օգնել պահեստավորման կառավարման եւ գրառման պահմանը: Գույնի կոդավորված գլխարկները օգտակար են ավելի հեշտ նույնականացման համար:
• Պահպանման համարժեք պահպանում- Խցերը կորած չեն, պահեստային անոթները պետք է անընդհատ վերահսկեն ջերմաստիճանի եւ հեղուկ ազոտի մակարդակը: Ահազանգերը պետք է տեղավորվեն սխալների օգտագործողներին:

Անվտանգության նախազգուշական միջոցներ

Հեղուկ ազոտը դարձել է սովորական պրակտիկա ժամանակակից հետազոտություններում, բայց իրականացնում է լուրջ վնասվածքի ռիսկ, եթե սխալ է օգտագործվում:

Prop իշտ անձնական պաշտպանիչ սարքավորումներ (PPE) պետք է մաշված լինի հեղուկ ազոտը գործածելիս ցրտահարության, այրվածքների եւ այլ անբարենպաստ միջադեպերի ռիսկը նվազագույնի հասցնելու համար: Հագնել

• Cryogenic ձեռնոցներ
• Լաբորատոր բաճկոն
• Ազդեցության դիմացկուն լիարժեք դեմքի վահան, որը պարանոցը ներառում է նաեւ
• Փակ կոշիկներ
• Splashproof պլաստիկ գոգնոց

Հեղուկ ազոտի սառնարանները պետք է տեղադրվեն լավ օդափոխվող տարածքներում `ասֆիքսացիայի ռիսկը նվազագույնի հասցնելու համար. Փախուստ ազոտը գոլորշիանում եւ տեղահանում է մթնոլորտային թթվածին: Խոշոր ծավալի խանութները պետք է ունենան թթվածնի ազդանշանային ցածր համակարգեր:

Հեղուկ ազոտը գործածելիս զույգերով աշխատելը իդեալական է, եւ դրա օգտագործումը նորմալ աշխատանքային ժամերից դուրս պետք է արգելվի:

Cryovials- ը `ձեր աշխատանքային հոսքը սատարելու համար

Suzhou Ace Biomedical ընկերությունը առաջարկում է ապրանքների լայն ընտրություն, որոնք բավարարում են ձեր Cryopreservation կարիքները տարբեր տեսակի բջիջների համար: Պորտֆոլիոն պարունակում է մի շարք խողովակներ, ինչպես նաեւ ստերիլ աղաղակող մի շարք:

Մեր կրոնականներն են.

• Լաբորատոր պտուտակային գլխարկ 0.5ml 1.5ml 2.0ml Cryovial Cryogenic Gials Conical Bottom Cryotube with Conket- ի հետ

  ● 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml ճշգրտում, փեշով կամ առանց փեշով
  ● Կոնոնիկական կամ ինքնուրույն դիզայնը, ստերիլը կամ ոչ ստերիլը մատչելի են
  ● Պտուտակային գլխարկների խողովակները պատրաստված են բժշկական դասարանի պոլիպրոպիլենից
  ● PP Cryotube- ի սրվակները կարող են բազմիցս սառեցված եւ հալվել
  ● Արտաքին գլխարկի դիզայնը կարող է նվազեցնել աղտոտման հավանականությունը նմուշների բուժման ընթացքում:
  ● Պտուտակային գլխարկ Cryogenic Tubes Universal պտուտակային թելեր օգտագործման համար
  ● Խողովակներ տեղավորվում են ամենատարածված ռոտորների վրա
  Cryogenic Tube O-Ring Tubes Fit Standard 1-Inch եւ 2 դյույմ, 48well, 81well, 96well եւ 100well սառնարանային տուփ
  ● Autoclavable- ից 121 ° C եւ սառեցվող -86 ° C

  Մաս ոչ	Նյութական	Ծավալ	ԿափարիչԳույն	ԱՀ /Պայուսակ	Պայուսակներ / գործ
  Act05-BL-N	PP	0,5 մլ	Սեւ, դեղին, կապույտ, կարմիր, մանուշակագույն, սպիտակ	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5 մլ	Սեւ, դեղին, կապույտ, կարմիր, մանուշակագույն, սպիտակ	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5 մլ	Սեւ, դեղին, կապույտ, կարմիր, մանուշակագույն, սպիտակ	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0 մլ	Սեւ, դեղին, կապույտ, կարմիր, մանուշակագույն, սպիտակ	500	10