A sikeres amplifikációs reakciókhoz szükséges, hogy az egyes reakciókomponensek minden készítményben a megfelelő koncentrációban legyenek jelen. Ezenkívül fontos, hogy ne történjen szennyeződés.
Különösen akkor, ha sok reakciót kell beállítani, úgy nevezett mesterkeveréket kell készíteni ahelyett, hogy minden reagenst külön-külön pipettáznának minden egyes edénybe. Kereskedelmi forgalomban kaphatók előre konfigurált keverékek, amelyekbe csak mintaspecifikus komponenseket (primer) és vizet adnak hozzá. Alternatív megoldásként a mesterkeveréket saját maga is elkészítheti. Mindkét változatban a keveréket mindegyik PCR-edénybe templát nélkül osztják szét, és a végén külön adják hozzá az egyedi DNS-mintát.
A mesterkeverék használata számos előnnyel jár: Először is, csökken az egyes pipettázási lépések száma. Ily módon mind a pipettázás során fellépő felhasználói hibák, mind a szennyeződés kockázata minimálisra csökken, és természetesen időt takarít meg. Elvileg a pipettázási pontosság is nagyobb, mivel nagyobb mennyiségeket adagolnak. Ez könnyen érthető a pipetták műszaki adatainak ellenőrzésekor: Minél kisebb az adagolt térfogat, annál nagyobbak lehetnek az eltérések. Az a tény, hogy minden készítmény ugyanabból az edényből származik, pozitív hatással van a homogenitásra (ha jól keverjük össze). Ez a kísérletek reprodukálhatóságát is javítja.
A mesterkeverék elkészítésekor legalább 10 % többlettérfogatot kell hozzáadni (pl. ha 10 készítményre van szükség, 11 alapján számoljunk), hogy az utolsó edény is megfelelően megteljen. Ezzel kompenzálható a (kis) pipettázási pontatlanság, illetve a mosószer tartalmú oldatok adagolásakor fellépő mintaveszteség hatása. A mosószereket enzimoldatok, például polimerázok és mesterkeverékek tartalmazzák, habképződést és maradékanyagokat okozva a normál belső felületén.pipettahegyek.
Az alkalmazástól és az adagolandó folyadék típusától függően a megfelelő pipettázási technikát (1) és a megfelelő felszerelést kell kiválasztani. Mosószereket tartalmazó oldatokhoz a légpárnás pipetták alternatívájaként a közvetlen kiszorításos rendszer vagy az úgynevezett „alacsony visszatartású” pipettahegyek javasoltak. A hatásaACE PIPETTA hegykülönösen hidrofób felületen alapul. A mosószert tartalmazó folyadékok nem hagynak maradék filmet sem belül, sem kívül, így minimalizálható az oldatveszteség.
Az összes komponens pontos adagolása mellett az is fontos, hogy a készítmények ne szennyeződjenek. Nem elegendő a nagy tisztaságú fogyóeszközök használata, mert a légpárnás pipettában történő pipettázás során aeroszolok keletkezhetnek, amelyek a pipettában maradnak. Az esetlegesen az aeroszolban lévő DNS a következő pipettázási lépésben átvihető egyik mintából a másikba, és így szennyeződéshez vezethet. A fent említett közvetlen eltolási rendszerek szintén minimalizálhatják ezt a kockázatot. Légpárnás pipettáknál célszerű szűrőhegyeket használni a pipettakúp védelmére a kifröccsenő folyadékok, aeroszolok és biomolekulák visszatartásával.
Feladás időpontja: 2022. december 06