A sikeres amplifikációs reakciókhoz szükséges, hogy az egyes reakciócsomagok minden előkészítésben a megfelelő koncentrációban legyenek jelen. Ezenkívül fontos, hogy ne forduljon elő szennyeződés.
Különösen akkor, ha sok reakciót be kell állítani, úgy állapították meg, hogy az úgynevezett fő keveréket készítsük, ahelyett, hogy az egyes reagenseket külön-külön pipettáznák az egyes edényekbe. Az előre konfigurált keverékek kereskedelemben kaphatók, amelyekben csak a minta-specifikus komponenseket (primer) és a vizet adják hozzá. Alternatív megoldásként a mesterkeveréket önmagában is elkészítheti. Mindkét változatban a keveréket minden egyes PCR edényhez sablon nélkül osztják el, és az egyes DNS -mintákat a végén külön -külön adják hozzá.
A mesterkeverék használatával számos előnye van: Először is, az egyetlen pipettázási lépések száma csökken. Ilyen módon mind a pipettázás során a felhasználói hibák kockázatát, mind a szennyeződés kockázatát minimalizálják, és természetesen az időt megtakarítják. Alapvetően a pipettázási pontosság szintén magasabb, mivel a nagyobb mennyiségek adagolódnak. Ezt könnyű megérteni a pipetták műszaki adatainak ellenőrzésekor: Minél kisebb az adagolt mennyiség, annál nagyobb az eltérések. Az a tény, hogy az összes készítmény ugyanabból az érből származik, pozitív hatással van a homogenitásra (ha jól keveredtek). Ez javítja a kísérletek reprodukálhatóságát is.
A mesterkeverék elkészítésekor legalább 10 % -os extra térfogatot kell hozzáadni (pl. Ha 10 készítményre van szükség, akkor számoljon 11 -es alapján), hogy még az utolsó edény is megfelelően kitöltve. Ilyen módon a (enyhe) pipetták pontatlanságát és a minta elvesztésének hatását a mosószer-tartalmú oldatok adagolásakor kompenzálhatják. A mosószereket enzimoldatokban, például polimerázok és mesterkeverékek tartalmazzák, amelyek habképződést és maradékokat okoznak a normál belső felületénpipett tippek.
Az alkalmazástól és az adagolandó folyadék típusától függően a helyes pipettázási technikát (1) kell választani, és a megfelelő berendezéseket ki kell választani. A mosószereket tartalmazó oldatokhoz közvetlen elmozdulási rendszer vagy az úgynevezett „alacsony visszatartási” pipetta-tippek ajánlottak a légzavar-pipetták alternatívájaként. HatásaÁszpipett tippegy különösen hidrofób felületen alapul. A mosószereket tartalmazó folyadékok nem hagynak maradékfilmet belülről és kívülről, így az oldat elvesztése minimalizálható.
Az összes alkatrész pontos adagolása mellett az is fontos, hogy a készítmények szennyeződése ne forduljon elő. Nem elegendő a nagy tisztaságú fogyóeszközök felhasználása, mivel a légpárnás pipettában a pipettázási folyamat a pipettában marad. Az aeroszolban található DNS -t az egyik mintából a következő pipettázási lépésben lehet átvinni, és így szennyeződéshez vezethet. A fent említett közvetlen elmozdulási rendszerek szintén minimalizálhatják ezt a kockázatot. A légzavaros pipettákhoz szűrő tippek használata a pipettakúp védelmére a fröccsenések, aeroszolok és biomolekulák megőrzésével.
A postai idő: december-06-2022