A folyamatok szabványosítása magában foglalja azok optimalizálását és későbbi felépítését és harmonizációját, lehetővé téve a hosszú távú optimális teljesítményt-a felhasználótól függetlenül. A szabványosítás biztosítja a magas színvonalú eredményeket, valamint azok reprodukálhatóságát és összehasonlíthatóságát.
A (klasszikus) PCR célja egy megbízható és reprodukálható eredmény generálása. Bizonyos alkalmazásokhoz aPCR -termékszintén releváns. Ezeknek a reakcióknak a gondoskodni kell annak biztosítása érdekében, hogy a minták ne sérüljenek, és hogy a PCR munkafolyamat stabil maradjon. Pontosabban, ez azt jelenti, hogy minimalizálják a szennyezések bevezetését, amelyek hamis pozitív vagy hamis negatív eredményekhez vezethetnek, vagy akár gátolhatják a PCR reakciót. Ezenkívül a reakciófeltételeknek a lehető leginkább azonosnak kell lenniük az egyes mintákhoz egy futáson belül, és átadhatónak kell lenniük a későbbi reakciókhoz (azonos módszerrel). Ez a reakciók összetételére, valamint a ciklikus hőmérséklet -szabályozásának típusára utal. A felhasználói hibákat természetesen a lehető legnagyobb mértékben el kell kerülni.
Az alábbiakban bemutatjuk azokat a kihívásokat, amelyek az előkészítés során és a PCR - a PCR -munkafolyamatok standardizálásához használt műszerek és fogyóeszközökkel kapcsolatos megoldások megközelítésének megközelítéseit.
Reakció előkészítés
A reakciókomponensek PCR-erekbe vagy lemezekbe történő adagolása több kihívást tartalmaz, amelyeket meg kell küzdeni:
Reakciófeltételek
Az egyes komponensek pontos és pontos adagolása nélkülözhetetlen, ha a lehető leginkább azonos reakciófeltételeket célozza meg. A jó pipettázási technika mellett a megfelelő eszköz kiválasztása kritikus jelentőségű. A PCR mesterkeverékek gyakran tartalmaznak olyan anyagokat, amelyek növelik a viszkozitást vagy a habot generálják. A pipettázási folyamat során ezek apipett tippek, ezáltal csökkentve a pipettázási pontosságot. A közvetlen adagoló rendszerek vagy alternatív pipetta -tippek használata, amelyek kevésbé hajlamosak a nedvesítésre, javíthatja a pipettázási folyamat pontosságát és pontosságát.
Szennyeződések
Az adagolási folyamat során aeroszolokat generálnak, amelyek - ha megengedik, hogy elérjék a pipetta belsejét, potenciálisan szennyeződhet egy másik mintát a következő pipettázási lépés során. Ezt szűrők vagy közvetlen elmozdulási rendszerek használatával lehet megelőzni.
Olyan fogyóeszközök, mint példáultippek, a PCR munkafolyamatban használt hajók és lemezek nem tartalmazhatnak olyan anyagokat, amelyek veszélyeztetik a mintát, vagy hamisítják az eredményt. Ide tartoznak a DNS, a DNázok, az RNázok és a PCR -gátlók, valamint olyan komponensek, amelyek potenciálisan kiszivároghatnak az anyagból a reakció során - a kimosóként ismert anyagok.
Felhasználói hiba
Minél több mintát dolgoznak fel, annál nagyobb a hiba kockázata. Könnyen előfordulhat, hogy egy mintát pipettáznak a rossz edénybe vagy a rossz kútba. Ezt a kockázatot jelentősen csökkentheti a kutak könnyen észlelhető jelölésével. Az adagolási lépések automatizálásával az „emberi tényező”, azaz a hibák és a felhasználókkal kapcsolatos variációk minimalizálódnak, ezáltal növelve a reprodukálhatóságot, különösen a kis reakciómennyiségek esetén. Ehhez elegendő dimenziós stabilitási lemezeket kell alkalmazni a munkaállomáson. A csatolt vonalkódok további gép-olvashatóságot biztosítanak, amely egyszerűsíti a mintakövetést az egész folyamat során.
A termocikler programozása
A műszer programozása időigényesnek és hibára hajlamosnak bizonyulhat. A különféle PCR -termikus ciklus -funkciók együtt működnek a folyamat lépése egyszerűsítése érdekében, és ami a legfontosabb, hogy biztonságossá tegye:
A könnyű működés és a jó felhasználói útmutatás a hatékony programozás alapja. Az alapítványra épülve a jelszókóval védett felhasználói adminisztráció megakadályozza a saját programjait, hogy más felhasználók megváltoztassák. Ha több (azonos típusú) ciklus van használatban, akkor hasznos, ha egy programot közvetlenül az egyik műszerből a másikba lehet átvinni USB -vel vagy csatlakozással. A számítógépes szoftver lehetővé teszi a programok, a felhasználói jogok és a számítógépen található dokumentumok központi és biztonságos adminisztrációját.
PCR -futás
A futás során a DNS -t amplifikálják a reakció edényben, ahol minden mintát azonos, következetes reakciós körülmények alá kell vetni. A következő szempontok relevánsak a folyamathoz:
Hőmérsékleti szabályozás
A ciklusblokk hőmérséklet -szabályozásának és homogenitásának kiváló pontossága az összes minta egyenletes hőmérsékleti kondicionálásának alapja. A fűtési és hűtési elemek (Peltier Elements) magas színvonalú, valamint a blokkhoz való kapcsolódás módja a döntő tényezők, amelyek meghatározzák a hőmérsékleti eltérések kockázatát, mint „élhatás”.
Párolgás
Az egyes reakciókomponensek koncentrációinak nem változhatnak a párolgás miatti reakció során. Ellenkező esetben lehetséges, hogy nagyon kevésPCR -termékelőállítható, vagy egyáltalán nem. Ezért elengedhetetlen a párolgás minimalizálása a biztonságos pecsét biztosításával. Ebben az esetben a termocikler fűtött fedele és a hajó pecsétje kéz a kézben dolgozik. Különböző zárási lehetőségek állnak rendelkezésrePCR lemezek (link: Zsákó cikk), amellyel a legjobb pecsétet a hő tömítés révén érik el. Más bezárások is alkalmasak lehetnek, mindaddig, amíg a cikler fedél érintkezési nyomása beállítható a kiválasztott tömítéshez.
A folyamat szabványosítása a pontos és reprodukálható eredmények hosszú távon történő védelme érdekében van érvényben. Ez magában foglalja a berendezés rendszeres karbantartását annak biztosítása érdekében, hogy mindig jó működési állapotban legyen. Minden fogyóeszköznek következetesen magas színvonalúnak kell lennie az összes előállított tételben, és megbízható rendelkezésre állást garantálni kell.
A postai idő: november-29-2022