Pou reyaksyon anplifikasyon siksè, li nesesè ke eleman reyaksyon endividyèl yo prezan nan konsantrasyon ki kòrèk la nan chak preparasyon. Anplis de sa, li enpòtan ke pa gen okenn kontaminasyon rive.
Espesyalman lè gen anpil reyaksyon yo dwe mete kanpe, li te etabli yo prepare yon melanj sa yo rele mèt olye pou yo pipe chak reyaktif separeman nan chak veso. Melanj pre-konfigirasyon yo disponib nan komès, kote yo ajoute sèlman eleman espesifik echantiyon (primer) ak dlo. Altènativman, melanj mèt la ka prepare poukont ou. Nan tou de variantes, melanj lan distribye nan chak veso PCR san yon modèl epi yo ajoute echantiyon ADN endividyèl la separeman nan fen an.
Sèvi ak yon melanj mèt gen plizyè avantaj: Premyèman, kantite etap pipète sèl redwi. Nan fason sa a, tou de risk pou erè itilizatè pandan pipette ak risk pou kontaminasyon yo minimize epi, nan kou, tan sove. Nan prensip, presizyon nan pipette pi wo tou, depi pi gwo volim yo dòz. Sa a se fasil pou konprann lè w tcheke done teknik nan pipèt: Plis volim dòz la pi piti, se pi wo devyasyon yo. Lefèt ke tout preparasyon soti nan menm veso a gen yon efè pozitif sou omojèn (si byen melanje). Sa a tou amelyore repwodiksyon eksperyans yo.
Lè w ap prepare melanj mèt la, yo ta dwe ajoute omwen 10% volim siplemantè (egzanp si yo mande 10 preparasyon, kalkile sou baz 11), pou menm dènye veso a ranpli byen. Nan fason sa a, (ti tay) erè pipet, ak efè a nan pèt echantiyon lè dòz solisyon ki gen detèjan ka konpanse. Detèjan yo genyen nan solisyon anzim tankou polymerases ak melanj mèt, sa ki lakòz fòmasyon kim ak résidus sou sifas enteryè nòmal.konsèy pipèt.
Tou depan de aplikasyon an ak kalite likid yo dwe dispanse, yo ta dwe chwazi teknik pipèt kòrèk la (1) epi chwazi ekipman ki apwopriye a. Pou solisyon ki gen detèjan, yo rekòmande yon sistèm deplasman dirèk oswa sa yo rele "retansyon ki ba" konsèy pipèt kòm yon altènatif pou pipèt kousen lè. Efè a nanACE PIPETTE pwentbaze sou yon sifas patikilyèman idrofob. Likid ki gen detèjan pa kite yon fim rezidi sou andedan ak deyò, pou yo ka minimize pèt solisyon an.
Anplis dòz egzak la nan tout eleman, li enpòtan tou pou pa gen okenn kontaminasyon nan preparasyon yo rive. Li pa ase pou sèvi ak consommables ki gen pite segondè, paske pwosesis la pipet nan yon pipèt kousen lè ka pwodwi ayewosòl ki rete nan pipèt la. ADN ki ka genyen nan ayewosòl la ka transfere soti nan yon echantiyon nan pwochen nan etap sa a pipèt epi konsa mennen nan kontaminasyon. Sistèm deplasman dirèk yo mansyone pi wo a kapab tou minimize risk sa a. Pou pipèt kousen lè li fè sans pou sèvi ak konsèy filtre pou pwoteje kòn pipèt la lè yo kenbe ti gout, ayewosòl ak biomolekil.
Tan poste: Dec-06-2022