Cryovialsyo souvan itilize pou depo kriyojenik nan liy selil ak lòt materyèl byolojik kritik, nan dewar plen ak nitwojèn likid.

Gen plizyè etap ki enplike nan prezèvasyon siksè nan selil nan nitwojèn likid. Pandan ke prensip debaz la se yon friz ralanti, teknik egzak yo anplwaye depann sou kalite selil ak kriyoprotektant yo itilize. Gen plizyè konsiderasyon sekirite ak pi bon pratik yo pran an kont lè estoke selil yo nan tanperati ki ba sa yo.

Pòs sa a gen pou objaktif pou bay yon apèsi sou fason kryovials yo estoke nan nitwojèn likid.

Ki sa ki Cryovials

Cryovials yo se ti flakon bouchon ki fèt pou estoke echantiyon likid nan tanperati ki ba anpil. Yo asire ke selil ki konsève nan kriyoprotektan pa antre an kontak dirèk ak nitwojèn likid la, minimize risk pou ka zo kase selilè pandan y ap toujou benefisye de efè refwadisman ekstrèm nitwojèn likid.

Flakon yo anjeneral disponib nan yon seri volim ak desen - yo ka anndan oswa deyò fil ak plat oswa awondi anba. Fòma esteril ak ki pa esteril yo disponib tou.

Ki moun ki itilizeCyrovialspou estoke selil yo nan Azòt likid

Yon seri de NHS ak laboratwa prive, osi byen ke enstitisyon rechèch ki espesyalize nan bank san kòd, byoloji selil epitelyal, iminoloji ak byoloji selil souch itilize kriyovial pou kriyoprezève selil yo.

Selil konsève nan fason sa a gen ladan selil B ak T, selil CHO, selil tij ematopoyetik ak selil progenitor, ibridom, selil entesten, makrofaj, selil tij mesenchymal ak selil progenitor, monosit, myeloma, selil NK ak selil souch plipotan.

Apèsi sou fason pou estoke kriyovyen nan Azòt likid

Kriyokonsèvasyon se yon pwosesis ki prezève selil yo ak lòt konstriksyon byolojik lè yo refwadi yo nan tanperati ki ba anpil. Selil yo ka estoke nan nitwojèn likid pou ane san yo pa pèdi viabilite selil yo. Sa a se yon deskripsyon pwosedi yo anplwaye.

Preparasyon selilè

Metòd egzak pou prepare echantiyon yo pral varye selon kalite selil la, men an jeneral, selil yo kolekte epi santrifuje pou devlope yon grenn selil ki rich. Lè sa a, granules sa a resuspende nan supernatant melanje ak cryoprotectant oswa yon mwayen kryopreservation.

Mwayen kriyoprezèvasyon

Mwayen sa a itilize pou prezève selil yo nan anviwonman tanperati ki ba yo pral sibi yo lè yo anpeche fòmasyon kristal andedan ak ekstraselilè yo e pakonsekan lanmò selil. Wòl yo se bay yon anviwònman ki an sekirite ak pwoteksyon pou selil yo ak tisi yo pandan pwosesis konjelasyon, depo, ak dekonjle.

Yon mwayen tankou plasma fre jele (FFP), solisyon plasmalit eparinize oswa solisyon san serom, san eleman bèt melanje ak kriyopwotektè tankou dimethyl sulfoxide (DMSO) oswa gliserin.

Granules echantiyon re-likidifye a aliquoted nan polypropylène cryovials tankouSuzhou Ace byomedikal konpayi kriyojenik depo flakon.

Li enpòtan pou pa twòp cryovials yo paske sa ap ogmante risk pou yo fann ak posib lage kontni an (1).

Pousantaj Jele Kontwole

An jeneral, yo itilize yon vitès konjel ralanti kontwole pou siksè kriyoprezèvasyon selil yo.

Apre echantiyon yo fin aliquot nan flakon kriyojenik, yo mete yo sou glas mouye oswa nan yon frijidè 4 ℃ epi pwosedi konjelasyon an kòmanse nan 5 minit. Kòm yon gid jeneral, selil yo refwadi nan yon pousantaj de -1 a -3 pou chak minit (2). Sa a se reyalize lè l sèvi avèk yon glasyè pwogramasyon oswa lè w mete flakon nan yon bwat izole mete nan yon frizè ki kontwole -70 °C a -90 °C.

Transfere nan Azòt likid

Lè sa a, flakon kriyojenik jele yo transfere nan yon tank nitwojèn likid pou peryòd endefini si yo kenbe yon tanperati ki mwens pase -135 ℃.

Tanperati ultra-ba sa yo ka jwenn pa imèsyon nan nitwojèn faz likid oswa vapè.

Faz likid oswa vapè?

Depo nan nitwojèn faz likid li te ye pou kenbe tanperati frèt la ak konsistans absoli, men li souvan pa rekòmande pou rezon sa yo:

• Bezwen pou gwo volim (pwofondè) nan nitwojèn likid ki se yon danje potansyèl. Burns oswa asfiksi akòz sa a se yon risk reyèl.
• Ka dokimante kontaminasyon kwa pa ajan enfektye tankou aspergillus, hep B ak gaye viral atravè mwayen nitwojèn likid la (2,3)
• Potansyèl pou nitwojèn likid koule nan flakon yo pandan imèsyon. Lè yo retire nan depo ak chofe nan tanperati chanm, azòt la rapidman elaji. Kontinwe, flakon an ka kraze lè yo retire li nan depo nitwojèn likid, sa ki kreye yon danje nan tou de vole debri ak ekspoze a sa ki ladann (1, 4).

Pou rezon sa yo, depo tanperati ultra-ba se pi souvan nan azòt faz vapè. Lè echantiyon yo dwe estoke nan faz likid la, yo ta dwe itilize tib espesyalize cryoflex.

Dezavantaj nan faz la vapè se ke yon gradyan tanperati vètikal ka rive sa ki lakòz fluctuations tanperati ant -135 ℃ ak -190 ℃. Sa a bezwen siveyans atansyon ak debouya nivo nitwojèn likid ak varyasyon tanperati (5).

Anpil manifakti yo rekòmande pou kriyoviyal yo apwopriye pou depo jiska -135 ℃ oswa pou itilize nan faz vapè sèlman.

Deglase selil kriyoprezève ou yo

Pwosedi dekonjle a se estrès pou yon kilti nan frizè, epi yo mande bon manyen ak teknik pou asire pi bon viabilite, rekiperasyon, ak fonksyonalite selil yo. Pwotokòl egzak dekonjle yo pral depann de kalite selil espesifik. Sepandan, dekonjle rapid konsidere kòm estanda pou:

• Diminye nenpòt enpak sou rekiperasyon selilè
• Ede diminye tan ekspoze a solut ki prezan nan medya konjelasyon an
• Minimize nenpòt domaj pa rekristalizasyon glas

Bann dlo, basen pèl, oswa enstriman espesyalize otomatik yo souvan itilize pou dekongele echantiyon yo.

Pi souvan 1 liy selil yo dekonjle nan yon moman pou 1-2 minit, pa dousman toubiyon nan yon beny dlo 37 ℃ jiskaske gen jis yon ti kras nan glas ki rete nan flakon an anvan yo lave yo nan yon mwayen kwasans prechofe.

Pou kèk selil tankou anbriyon mamifè, chofe dousman esansyèl pou siviv yo.

Selil yo kounye a pare pou kilti selil, izolasyon selil, oswa nan ka selil souch ematopoyetik - etid viabilite pou garanti entegrite selil souch donatè yo anvan terapi myeloablative.

Li se yon pratik nòmal pou pran ti aliquot echantiyon prelave yo itilize pou fè yon konte selil pou detèmine konsantrasyon selil pou plating nan kilti. Lè sa a, ou ka evalye rezilta yo nan pwosedi izolasyon selil yo epi detèmine viabilite selil yo.

Meyè Pratik pou Depo Cryovials

Siksè kriyoprezèvasyon echantiyon ki estoke nan kriyovi yo depann de anpil eleman nan pwotokòl la ki gen ladan depo apwopriye ak kenbe dosye.

• Divize selil ant kote depo yo– Si volim pèmèt, separe selil yo ant flakon epi estoke yo nan kote separe pou diminye risk pou yo pèdi echantiyon akòz echèk ekipman yo.
• Anpeche kwa-kontaminasyon– Chwazi yon sèl-itilize flakon kriyojeni esteril oswa otoklav anvan itilizasyon ki vin apre
• Sèvi ak flakon gwosè apwopriye pou selil ou yo– flakon vini nan yon seri volim ant 1 ak 5mls. Evite twòp ranpli flakon pou diminye risk pou yo fann.
• Chwazi flakon kriyojenik entèn oswa deyò– Gen kèk inivèsite rekòmande flacon fil anndan yo pou mezi sekirite – yo kapab tou anpeche kontaminasyon pandan ranpli oswa lè yo estoke nan nitwojèn likid la.
• Anpeche flit- Sèvi ak sele bi-enjekte modle nan bouchon vis la oswa O-bag pou anpeche koule ak kontaminasyon.
• Sèvi ak kòd bar 2D ak etikèt flakon- pou asire trasabilite, flakon ki gen gwo zòn ekri pèmèt chak flakon yo dwe make adekwat. Kod bar 2D ka ede ak jesyon depo ak kenbe dosye. Koulè kode bouchon yo itil pou idantifikasyon pi fasil.
• Adekwat antretyen depo- Pou asire selil yo pa pèdi, veso depo yo ta dwe toujou ap kontwole tanperati a ak nivo nitwojèn likid. Alam yo ta dwe ekipe pou avèti itilizatè yo sou erè.

Prekosyon Sekirite

Azòt likid te vin yon pratik komen nan rechèch modèn men pote risk pou yo blese grav si yo itilize mal.

Yo ta dwe mete bon jan ekipman pwoteksyon pèsonèl (PPE) pou minimize risk friz, boule ak lòt ensidan negatif lè w ap manyen nitwojèn likid. Mete

• Gan kriyojenik
• Rad laboratwa
• Pwoteksyon plen figi rezistan enpak ki kouvri kou a tou
• Soulye zòtèy fèmen
• Splashproof plastik tabliye

Yo ta dwe mete frijidè nitwojèn likid nan zòn ki byen vantile pou minimize risk pou yo asfiksi - nitwojèn ki chape vaporize ak deplase oksijèn atmosferik. Magazen gwo volim ta dwe gen sistèm alam oksijèn ki ba.

Travay an pè lè w ap manyen nitwojèn likid se ideyal epi yo ta dwe entèdi itilizasyon li an deyò lè nòmal travay yo.

Cryovials pou sipòte workflow ou

Konpayi Suzhou Ace byomedikal ofri yon seleksyon lajè nan pwodwi ki satisfè bezwen kriyoprezèvasyon ou pou diferan kalite selil. Pòtfolyo a gen ladann yon seri tubesas ak yon seri kriyovial esteril.

Cryovials nou yo se:

• Laboratwa Vis Bouchon 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Flacons konik anba Cryotube ak Joint

  ● 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml spesifikasyon, ak jip oswa san jip
  ● Konik oswa pwòp tèt ou kanpe konsepsyon, esteril oswa ki pa esteril yo tou de disponib
  ● Tib bouchon vis yo fèt ak polypropylène klas medikal
  ● PP Cryotube Flakon yo ka repete jele ak dekonjle
  ●The ekstèn bouchon konsepsyon ka diminye pwobabilite kontaminasyon pandan tretman echantiyon.
  ● Tib kriyojenik bouchon vis Inivèsèl fil vis pou itilize
  ● Tib anfòm pi komen rotor
  ● Tib kriyojenik o-bag anfòm estanda 1-pous ak 2-pous, 48well, 81well, 96well ak 100well bwat frizè
  ● Autoclavable a 121 ° C ak frizable a -86 ° C

  PATI NO	MATERYÈL	VOLIM	CAPKOULÈ	PCS/SAK	SAK/KA
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Nwa, jòn, ble, wouj, koulè wouj violèt, blan	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Nwa, jòn, ble, wouj, koulè wouj violèt, blan	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Nwa, jòn, ble, wouj, koulè wouj violèt, blan	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Nwa, jòn, ble, wouj, koulè wouj violèt, blan	500	10