Nòmalizasyon nan pwosesis gen ladan optimize yo ak etablisman ki vin apre ak amonizasyon, sa ki pèmèt alontèm pèfòmans optimal-endepandan de itilizatè a. Estandadizasyon asire rezilta-wo kalite, osi byen ke repwodibilite yo ak comparability.
Objektif la nan (klasik) PCR se jenerasyon an nan yon rezilta serye ak repwodwi. Pou sèten aplikasyon, sede a nan laPwodwi PCRse tou ki enpòtan. Pou reyaksyon sa yo, yo dwe pran swen pou asire ke echantiyon yo pa konpwomèt e ke workflow PCR la rete estab. Espesyalman, sa a tradui pou minimize entwodiksyon nan kontaminasyon ki ta ka mennen nan fo pozitif oswa fo rezilta negatif oswa menm anpeche reyaksyon an PCR. Anplis de sa, kondisyon yo reyaksyon yo ta dwe kòm idantik ke posib pou chak echantiyon endividyèl nan yon kouri epi tou li ka transfere nan reyaksyon ki vin apre (nan menm metòd la). Sa refere a konpozisyon reyaksyon yo ak kalite kontwòl tanperati a nan siklatè a. Erè itilizatè, nan kou, yo dwe evite otan ke posib.
Anba a, nou pral demontre defi yo ki rankontre pandan preparasyon ak nan tout kouri nan yon PCR - ak apwòch yo nan solisyon ki egziste ki gen rapò ak enstriman mizik ak consommables yo itilize pou normalizasyon nan workflows yo PCR.
Preparasyon reyaksyon
Distribisyon nan eleman reyaksyon nan PCR-veso, oswa plak, respektivman, konprann plizyè defi ki dwe simonte:
Kondisyon reyaksyon
Dòz la egzak ak egzak nan eleman endividyèl yo se endispansab lè vise pou kondisyon sa yo reyaksyon ki pi idantik posib. Anplis de yon teknik bon pipetting, chwazi zouti ki dwat la se kritik. PCR Mèt-Mixes souvan gen sibstans ki sou ki ogmante viskozite oswa jenere kim. Pandan pwosesis la pipeting, sa yo mennen nan mouye sibstansyèl nan laKonsèy pipèt, konsa diminye presizyon pipeting. Itilizasyon sistèm distribisyon dirèk oswa konsèy pipèt altènatif ki gen mwens tandans fè pipi ka amelyore presizyon ak presizyon nan pwosesis pipeting la.
Kontaminasyon
Pandan pwosesis distribisyon an, aerosol yo pwodwi ki, si yo pèmèt yo rive jwenn anndan an nan pipèt la, ka potansyèlman kontamine yon lòt echantiyon pandan pwochen etap la pipetting. Sa a ka anpeche lè l sèvi avèk konsèy filtre oswa sistèm deplasman dirèk.
Consommables tankoukonsèy, veso ak plak ki yo te itilize nan workflow la PCR pa dwe gen sibstans ki sou ki konpwomi echantiyon an oswa fo rezilta a. Men sa yo enkli ADN, dnases, RNases ak inhibiteurs PCR, osi byen ke konpozan ki ka potansyèlman leach soti nan materyèl la pandan reyaksyon an - sibstans ki sou li te ye tankou leachab.
Itilizatè Erè
Echantiyon yo plis yo trete, pi wo a risk la erè. Li ka fasilman rive ke se yon echantiyon pipetted nan veso a mal oswa mal la byen. Ka risk sa a dwe konsiderableman redwi pa fasilman discernible make nan pwi yo. Atravè automatisation nan etap distribisyon, "faktè imen an", sètadi, erè ak itilizatè ki gen rapò ak varyasyon, yo minimize, konsa ogmante repwodibilite, espesyalman nan ka a nan komèsan ti reyaksyon. Sa mande pou plak nan estabilite ase dimansyon yo dwe travay nan yon estasyon. Barcodes tache bay plis machin-li, ki senplifye echantiyon swiv nan tout pwosesis la tout antye.
Pwogramasyon Thermocycler la
Pwogramasyon yon enstriman ka pwouve ke yo dwe tan konsome kòm byen ke erè-ki gen tandans. Diferan PCR tèmik Cycler karakteristik travay ansanm yo senplifye etap pwosesis sa a, epi, sa ki pi enpòtan, fè li an sekirite:
Fasil operasyon ak bon konsèy itilizatè yo se baz la nan pwogram efikas. Bati sou fondasyon sa a, modpas-pwoteje administrasyon itilizatè ap anpeche pwòp pwogram yon sèl la nan men yo te chanje pa lòt itilizatè yo. Si siklatè miltip (nan menm kalite a) yo nan itilize, li se benefisye si yon pwogram ka transfere dirèkteman nan yon enstriman nan yon lòt via USB oswa koneksyon. Lojisyèl òdinatè pèmèt administrasyon santral ak sekirite nan pwogram, dwa itilizatè ak dokiman sou yon òdinatè.
PCR kouri
Pandan kouri a, ADN se anplifye nan veso a reyaksyon, kote yo ta dwe chak echantiyon dwe sibi idantik, kondisyon reyaksyon ki konsistan. Aspè sa yo ki enpòtan pou pwosesis la:
Kontwòl Tanperati
Ekselan presizyon nan kontwòl tanperati ak omojèn nan blòk la sikler yo se baz la pou menm kondisyone tanperati nan tout echantiyon yo. Bon jan kalite a segondè nan eleman yo chofaj ak refwadisman (eleman Peltier), osi byen ke fason an nan ki sa yo yo ki konekte nan blòk la, yo se faktè sa yo n ap deside ki pral detèmine risk pou yo dezakò tanperati li te ye tankou "efè a kwen"
Evaporasyon
Konsantrasyon yo nan eleman yo reyaksyon endividyèl pa ta dwe chanje sou kou a nan reyaksyon an akòz evaporasyon. Sinon, li posib ke anpilPwodwi PCRKa pwodwi, oswa okenn nan tout. Se poutèt sa, se kritik pou misyon pou minimize evaporasyon pa asire yon sele sekirite. Nan ka sa a, kouvèti a chofe nan thermocycler a ak sele a nan veso a travay men nan men yo. Diferan opsyon sele yo disponib pouPlak PCR (lyen: atik sele), kijan se sele a pi byen reyalize nan sele chalè. Fèmti Lòt yo ka tou apwopriye, osi lontan ke presyon an kontak nan kouvèti a Cycler ka ajiste nan sele a chwazi.
Pwosesis normalizasyon an plas nan lòd yo pwoteje rezilta egzat ak repwodwi nan tèm long la. Sa gen ladan antretyen regilye nan ekipman an asire ke li se toujou nan bon kondisyon travay. Tout consommables yo ta dwe nan toujou bon jan kalite segondè nan tout anpil pwodwi, ak disponiblite serye yo dwe garanti.
Post tan: Nov-29-2022