Entwodiksyon
Ki sa ki se Ekstraksyon Asid Nukleik?
Nan tèm ki pi senp, ekstraksyon asid nikleyik se retire RNA ak / oswa ADN nan yon echantiyon ak tout depase ki pa nesesè. Pwosesis ekstraksyon izole asid nikleyik yo nan yon echantiyon epi li bay yo nan fòm yon eluate konsantre, san diluan ak kontaminan ki ta ka afekte nenpòt aplikasyon en.
Aplikasyon pou fè ekstraksyon asid nikleik
Asid nikleyik pirifye yo itilize nan yon multitude de aplikasyon diferan, sòti nan plizyè endistri diferan. Swen sante se petèt zòn kote yo itilize li pi plis, ak RNA ak ADN pirifye ki nesesè pou yon pakèt rezon diferan nan tès diferan.
Aplikasyon pou fè ekstraksyon asid nikleyik nan swen sante yo enkli:
- Sekans pwochen jenerasyon (NGS)
- Genotip SNP ki baze sou anplifikasyon
- Jenotip ki baze sou etalaj
- Restriksyon anzim dijesyon
- Analiz lè l sèvi avèk Modifying Anzim (egzanp ligasyon ak klonaj)
Genyen tou lòt domèn pi lwen pase swen sante kote ekstraksyon asid nikleyik yo itilize, ki gen ladan men pa limite a tès patènite, legal ak jenomik.
Yon istwa kout nan ekstraksyon asid nikleik
ekstraksyon ADNdate depi lontan, ak premye izolasyon li te ye a te fèt pa yon doktè Swis yo te rele Friedrich Miescher an 1869. Miescher te espere rezoud prensip fondamantal yo nan lavi a lè li detèmine konpozisyon chimik selil yo. Apre echwe ak lenfosit, li te kapab jwenn yon presipite brit nan ADN nan leucosit yo te jwenn nan pi sou bandaj jete. Li te fè sa lè li ajoute asid ak Lè sa a, alkali nan selil la kite sitoplasm selil la, ak Lè sa a, devlope yon pwotokòl separe ADN a ak lòt pwoteyin yo.
Apre rechèch pionan Miescher a, anpil lòt syantis te kontinye avanse epi devlope teknik pou izole ak pirifye ADN. Edwin Joseph Cohn, yon syantis pwoteyin devlope anpil teknik pou pirifye pwoteyin pandan WW2. Li te responsab pou izole fraksyon albumin serom nan plasma san, ki enpòtan nan kenbe presyon osmotik nan veso sangen yo. Sa a te enpòtan anpil pou kenbe sòlda yo vivan.
An 1953 Francis Crick, ansanm ak Rosalind Franklin ak James Watson, te detèmine estrikti ADN, ki montre ke li te fòme ak de chenn long nukleotid asid nikleyik. Dekouvèt zouti sa a te pave wout la pou Meselson ak Stahl, ki te kapab devlope yon pwotokòl santrifujasyon gradyan dansite pou izole ADN nan bakteri E. Coli pandan yo te demontre replikasyon semi-konsèvatif ADN pandan eksperyans 1958 yo.
Teknik pou fè ekstraksyon asid nikleik
Ki 4 etap ekstraksyon ADN?
Tout metòd ekstraksyon bouyi nan menm etap fondamantal yo.
Dezòd selilè. Etap sa a, ke yo rele tou liz selil, enplike nan kraze miray selil la ak/oswa manbràn selilè a, yo nan lòd yo lage likid yo intra-selilè ki gen asid nikleyik ki enterese yo.
Retire debri ki pa vle. Sa a gen ladan lipid manbràn, pwoteyin ak lòt asid nikleyik vle ki ka entèfere ak aplikasyon en.
An karantèn. Gen plizyè fason diferan pou izole asid nikleyik ki enterese nan lisate ou te kreye a, ki tonbe ant de kategori prensipal: ki baze sou solisyon oswa eta solid (gade pwochen seksyon).
Konsantrasyon. Apre asid nikleyik yo te izole nan tout lòt kontaminan ak diluan, yo prezante yo nan yon eluate ki trè konsantre.
De kalite ekstraksyon
Gen de kalite ekstraksyon asid nikleyik - metòd ki baze sou solisyon ak metòd eta solid. Metòd ki baze sou solisyon an konnen tou kòm metòd ekstraksyon chimik, paske li enplike nan itilize pwodui chimik pou kraze selil la epi jwenn aksè nan materyèl nikleyè a. Sa a ka itilize swa konpoze òganik tankou fenol ak klowofòm, oswa konpoze inòganik ki mwens danjere ak Se poutèt sa plis rekòmande tankou Proteinase K oswa jèl silica.
Men kèk egzanp diferan metòd ekstraksyon chimik pou kraze yon selil yo enkli:
- Osmotik rupture nan manbràn
- Dijesyon anzimatik nan miray selil yo
- Solubilizasyon manbràn
- Ak detèjan
- Avèk tretman alkali
Teknik eta solid, ke yo rele tou metòd mekanik, enplike nan eksplwate fason ADN reyaji avèk yon substra solid. Lè w chwazi yon pèl oswa molekil ki ADN a pral mare men analit la pa pral, li posib pou separe de la. Egzanp teknik ekstraksyon solid-faz ki gen ladan itilize silica ak pèl mayetik.
Eksplikasyon mayetik pèl ekstraksyon
Metòd ekstraksyon mayetik chaplèt la
Potansyèl pou fè ekstraksyon lè l sèvi avèk pèl mayetik te rekonèt premye nan yon patant US depoze pa Trevor Hawkins, pou enstitisyon rechèch Whitehead Institute. Patant sa a te rekonèt ke li te posib yo ekstrè materyèl jenetik pa mare yo nan yon konpayi asirans sipò solid, ki ta ka yon pèl mayetik. Prensip la se ke ou sèvi ak yon chaplèt mayetik trè fonksyonalize sou ki materyèl jenetik la pral mare sou, ki ka Lè sa a, separe de surnatant la lè w aplike yon fòs mayetik sou deyò veso ki kenbe echantiyon an.
Poukisa sèvi ak ekstraksyon mayetik pèl?
Teknoloji ekstraksyon mayetik pèl ap vin de pli zan pli répandus, akòz potansyèl li genyen pou pwosedi ekstraksyon rapid ak efikas. Nan dènye tan yo te gen devlopman nan pèl mayetik trè fonksyonalize ak sistèm tanpon apwopriye, ki te fè posib automatisation nan ekstraksyon asid nikleyik ak yon workflow ki se trè resous limyè ak pri-efikas. Epitou, metòd ekstraksyon mayetik pèl pa enplike etap santrifujasyon yo ki ka lakòz fòs taye ki kraze pi long moso nan ADN. Sa vle di ke pi long seksyon ADN rete entak, sa ki enpòtan nan tès jenomik.
Tan pòs: 25-Nov-2022