Za uspješne reakcije pojačanja, potrebno je da su pojedinačne reakcijske komponente prisutne u ispravnoj koncentraciji u svakom pripravku. Osim toga, važno je da ne dođe do onečišćenja.
Pogotovo kada se moraju postaviti mnoge reakcije, uspostavljeno je da pripremi takozvanu glavnu mješavinu, umjesto da svaki reagens zasebno zasebno pipte u svako plovilo. Predkonfigurirane mješavine su komercijalno dostupne, u kojima se dodaju samo komponente specifične za uzorke (temeljni premaz) i voda. Alternativno, glavnu mješavinu možete pripremiti sami. U obje varijante smjesa se raspoređuje na svaku PCR posudu bez predloška, a pojedinačni uzorak DNA dodaje se odvojeno na kraju.
Korištenje glavnog miksa ima nekoliko prednosti: prvo se smanjuje broj pojedinačnih koraka za pipke. Na taj se način i rizik od pogrešaka korisnika tijekom pipetiranja i rizik od onečišćenja minimalizira i, naravno, vrijeme se sprema. U principu, točnost pipetiranja je također veća, jer se doziraju veće količine. To je lako razumjeti prilikom provjere tehničkih podataka pipeta: što je manji dozirani volumen, to su veća odstupanja. Činjenica da svi pripravci dolaze iz iste posude pozitivno utječe na homogenost (ako je dobro pomiješana). To također poboljšava obnovljivost eksperimenata.
Prilikom pripreme glavne mješavine treba dodati najmanje 10 % dodatnog volumena (npr. Ako je potrebno 10 priprema, izračunajte na temelju 11), tako da je čak i posljednje plovilo pravilno ispunjeno. Na taj se način (lagano) netočnosti piptaja i učinak gubitka uzorka prilikom doziranja otopina koje sadrže deterdžent mogu nadoknaditi. Deterdženti su sadržani u enzimskim otopinama kao što su polimeraze i glavne mješavine, uzrokujući stvaranje pjene i ostatke na unutarnjoj površini normalneSavjeti za pipete.
Ovisno o primjeni i vrsti tekućine koju treba dodijeliti, treba odabrati ispravnu tehniku pipetiranja (1) i odabranu odgovarajuću opremu. Za otopine koje sadrže deterdženti, preporučuju se sustav s izravnim pomakom ili takozvani vrhovi pipete s niskim zadržavanjem kao alternativu pipetama za zračno jastuk. UčinakSavjet za pipetutemelji se na posebno hidrofobnoj površini. Tekućine koje sadrže deterdženti ne ostavljaju film o ostatku iznutra i izvana, tako da se gubitak otopine može umanjiti.
Osim točnog doziranja svih komponenti, također je važno da se ne dogodi kontaminacija pripravaka. Nije dovoljno koristiti potrošne materijale visoke čistoće, jer postupak pipeta u pipeti za jastuk zraka može proizvesti aerosole koji ostaju u pipeti. DNK koji se može sadržavati u aerosolu može se prenijeti s jednog uzorka na drugi u sljedećem koraku pipetiranja i tako dovesti do onečišćenja. Gore spomenuti sustavi izravnog pomaka također mogu umanjiti ovaj rizik. Za pipete od zračnog jastuka ima smisla koristiti vrhove filtra za zaštitu pipete konusa zadržavanjem prskanja, aerosola i biomolekula.
Post Vrijeme: dec-06-2022