Kako pipetirati male količine s ručnim ručnim pipetama

Kako se veći fokus stavlja na smanjenje reagensa i troškova, manje su količine u velikoj potražnji, npr. za pripremu PCR Mastermixa ili enzimske reakcije. Ali pipetiranje malih količina od 0,2 – 5 µL postavlja nove izazove za točnost i preciznost pipetiranja. Sljedeće točke su bitne:

1. Veličina pipete i vrha: Uvijek odaberite pipetu s najmanjim mogućim nazivnim volumenom i najmanjim vrhom kako bi zračni jastuk bio što je moguće manji. Kada pipetirate npr. 1 µL, odaberite pipetu od 0,25 – 2,5 µL i odgovarajući vrh umjesto pipete od 1 – 10 µL.
2. Kalibracija i održavanje: bitno je da su vaše pipete ispravno kalibrirane i održavane. Male prilagodbe i slomljeni dijelovi na pipeti dovode do velikog povećanja sustavnih i nasumičnih vrijednosti pogreške. Kalibracija prema ISO 8655 mora se izvršiti jednom godišnje.
3. Pipete s pozitivnim pomakom: provjerite imate li u svom laboratoriju pipete s pozitivnim volumenom s niskim rasponom volumena. Općenito, korištenje ove vrste pipete dovodi do boljeg rezultata pipetiranja u smislu točnosti i preciznosti nego s klasičnim pipetama sa zračnim jastukom.
4. Pokušajte koristiti veće volumene: možete razmisliti o razrjeđivanju uzorka kako biste pipetirali veće volumene s istom količinom u konačnoj reakciji. To može smanjiti pogreške pipetiranja s vrlo malim volumenima uzoraka.

Osim dobrog alata, istraživač mora posjedovati vrlo dobru tehniku ​​pipetiranja. Obratite posebnu pozornost na sljedeće korake:

1. Pričvršćivanje vrha: Nemojte zaglaviti pipetu na vrh jer to može oštetiti fini kraj vrha uzrokovati preusmjeravanje snopa tekućine ili oštetiti otvor. Samo lagano pritiskajte kada pričvršćujete vrh i koristite pipetu s konusom vrha s oprugom.
2. Držanje pipete: Ne držite pipetu u ruci dok čekate centrifugu, cikler itd. Unutrašnjost pipete će se zagrijati i dovesti do širenja zračnog jastuka što će rezultirati odstupanjima od postavljenog volumena prilikom pipetiranja.
3. Prethodno vlaženje: Ovlaživanje zraka unutar vrha i pipete priprema vrh za uzorak i izbjegava isparavanje prilikom aspiracije prijenosnog volumena.
4. Vertikalna aspiracija: Ovo je vrlo važno pri rukovanju malim količinama kako bi se izbjegao kapilarni učinak koji se javlja kada se pipeta drži pod kutom.
5. Dubina uranjanja: uronite vrh što je manje moguće kako biste spriječili ulazak tekućine u vrh zbog kapilarnog učinka. Praktično pravilo: što su vrh i volumen manji, to je manja dubina uranjanja. Preporučujemo maksimalno 2 mm pri pipetiranju malih količina.
6. Doziranje pod kutom od 45°: Optimalan protok tekućine zajamčen je kada se pipeta drži pod kutom od 45°.
7. Dodir sa stijenkom posude ili površinom tekućine: male količine mogu se pravilno dozirati samo kada se vrh drži uz stijenku posude ili uroni u tekućinu. Čak i posljednja kap s vrha može se točno dozirati.
8. Ispuhivanje: Ispuhivanje je obavezno nakon ispuštanja malih količina kako bi se ispustila i posljednja kap tekućine koja se nalazi u vrhu. Ispuhivanje također treba izvesti uz stijenku posude. Pazite da ne unesete mjehuriće zraka u uzorak kada izvodite ispuhivanje površine tekućine.