Txawm hais tias nyob rau hauv txoj kev xav, ib qho molecule ntawm tus qauv yuav txaus, ntau npaum li cas ntawm DNA feem ntau yog siv rau classic PCR, piv txwv li, mus txog 1 µg ntawm genomic mammalian DNA thiab tsawg li 1 pg ntawm plasmid DNA. Qhov zoo tshaj plaws yog nyob ntawm ntau yam ntawm cov ntawv luam ntawm lub hom phiaj ib ntus, nrog rau nws qhov nyuaj.
Yog tias siv cov qauv me me, yuav tsum muaj qhov sib txuas ntxiv ntawm cov voj voog amplification kom tau txais cov khoom txaus. Ib tug Taq polymerase uas yog siv rau feem ntau PCR thwmsim tsis feature ib tug kho muaj nuj nqi (3′-5′ exonuclease kev ua si); Yog li, qhov yuam kev tshwm sim thaum lub sijhawm amplification tsis tuaj yeem kho. Qhov ntau dua ntawm cov voj voog, qhov ntau dua qhov kev nthuav dav ntawm cov khoom tsis raug yuav. Yog hais tias, ntawm qhov tod tes, tus nqi ntawm cov qauv yog siab dhau lawm, qhov tshwm sim ntawm primers annealing rau lwm yam (tsis yog ib puas feem pua pw dawb) sequences, nrog rau kev tsim ntawm primer dimers, yuav nce, uas yuav ua rau kom lub amplification. los ntawm cov khoom. Feem ntau, DNA raug cais tawm ntawm cov kab lis kev cai ntawm tes lossis los ntawm cov kab mob thiab tom qab siv los ua PCR template. Tom qab ua kom huv huv, nws yog ib qho tsim nyog los txiav txim siab qhov concentration ntawm DNA kom muaj peev xwm txheeb xyuas qhov ntim uas xav tau rau kev teeb tsa PCR. Thaum agarose gel electrophoresis tuaj yeem pab muab kev kwv yees, txoj kev no tsis yog qhov tseeb. UV-Vis spectrophotometry tau raug tsim los ua tus qauv kub rau kom muaj nuj nqis ntawm nucleic acids; no ncaj qha thiab yog li no yooj yim thiab ceev txoj kev ntsuas absorbance ntawm tus qauv ntawm 260 nm, thiab concentration yog xam nrog kev pab los ntawm ib tug conversion yam.
Yog tias DNA concentration tsawg heev, txawm li cas los xij (< 1 µg / mL dsDNA), lossis yog tias nws muaj cov kab mob sib kis uas tseem nqus tau hauv 260 nm (xws li RNA, protein, ntsev), txoj kev no yuav ncav cuag nws cov kev txwv. Nyob rau hauv cov ntaub ntawv ntawm cov concentrations tsawg heev, cov kev nyeem yuav sai sai no yuav dhau los ua tsis raug ntawm kev siv, thiab kev sib kis yuav ua rau (qee zaum loj) overestimation ntawm tus nqi tiag tiag. Hauv qhov no, kev siv cov fluorescence tuaj yeem muaj lwm txoj hauv kev. Cov txheej txheem no yog ua raws li kev siv cov fluorescent zas xim uas khi tshwj xeeb rau dsDNA nkaus xwb cov complex muaj nucleic acid thiab dye yog zoo siab los ntawm lub teeb, thiab nws yuav tom qab emit lub teeb ntawm ib tug me ntsis dua wavelength. Ntawm no, qhov kev siv ntawm cov teeb liab fluorescent yog proportional rau tus nqi ntawm DNA, thiab rau kev txiav txim siab concentration nws yog soj ntsuam nyob rau hauv relation mus rau ib tug qauv nkhaus. Qhov zoo ntawm txoj kev no yog nyob ntawm qhov tshwj xeeb ntawm daim ntawv cog lus, uas tsis suav nrog cov kev cuam tshuam sab nraud qhia los ntawm kev sib kis, nrog rau kev muaj peev xwm los txheeb xyuas qhov muaj pes tsawg leeg ntawm DNA. Qhov tsim nyog ntawm ob txoj kev yog nyob ntawm tus qauv concentration thiab purity; nyob rau hauv ntau qhov xwm txheej nws tseem yuav raug pom zoo los siv ob txoj hauv kev ua ke.
Lub sij hawm xa tuaj: Nov-30-2022