सफल प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं के लिए, यह आवश्यक है कि व्यक्तिगत प्रतिक्रिया घटक प्रत्येक तैयारी में सही एकाग्रता में मौजूद हों। इसके अलावा, यह महत्वपूर्ण है कि कोई संदूषण नहीं होता है।
विशेष रूप से जब कई प्रतिक्रियाओं को सेट-अप करना पड़ता है, तो यह प्रत्येक अभिकर्मक को प्रत्येक बर्तन में अलग से पाइप करने के बजाय एक तथाकथित मास्टर मिश्रण तैयार करने के लिए स्थापित किया गया है। पूर्व-कॉन्फ़िगर मिक्स व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं, जिसमें केवल नमूना-विशिष्ट घटक (प्राइमर) और पानी जोड़ा जाता है। वैकल्पिक रूप से, मास्टर मिक्स को खुद से तैयार किया जा सकता है। दोनों वेरिएंट में, मिश्रण को प्रत्येक पीसीआर पोत को एक टेम्पलेट के बिना वितरित किया जाता है और व्यक्तिगत डीएनए नमूने को अंत में अलग से जोड़ा जाता है।
मास्टर मिक्स का उपयोग करने के कई फायदे हैं: सबसे पहले, सिंगल पिपेटिंग चरणों की संख्या कम हो जाती है। इस तरह, पिपेटिंग के दौरान उपयोगकर्ता की त्रुटियों के जोखिम और संदूषण के जोखिम को कम से कम किया जाता है और निश्चित रूप से, समय बचाया जाता है। सिद्धांत रूप में, पिपेटिंग सटीकता भी अधिक है, क्योंकि बड़े संस्करणों को डोज दिया जाता है। पिपेट के तकनीकी डेटा की जाँच करते समय यह समझना आसान है: डोज वॉल्यूम जितना छोटा होगा, विचलन उतने ही अधिक हो सकते हैं। तथ्य यह है कि एक ही पोत से आने वाली सभी तैयारी समरूपता (यदि अच्छी तरह से मिश्रित) पर सकारात्मक प्रभाव डालती है। यह प्रयोगों की प्रजनन क्षमता में भी सुधार करता है।
मास्टर मिक्स तैयार करते समय, कम से कम 10 % अतिरिक्त मात्रा को जोड़ा जाना चाहिए (उदाहरण के लिए यदि 10 तैयारी की आवश्यकता है, तो 11 के आधार पर गणना करें), ताकि यहां तक कि अंतिम पोत भी ठीक से भरा हो। इस तरह, (मामूली) डिटर्जेंट-युक्त समाधानों को खुराक करते समय नमूना हानि का प्रभाव, और नमूना हानि का प्रभाव मुआवजा दिया जा सकता है। डिटर्जेंट एंजाइम समाधानों जैसे कि पॉलीमरेज़ और मास्टर मिक्स में निहित हैं, जिससे सामान्य की आंतरिक सतह पर फोम का गठन और अवशेष होते हैंपिपेट टिप्स.
एप्लिकेशन और तरल के प्रकार के आधार पर, सही पिपेटिंग तकनीक (1) को चुना जाना चाहिए और चुने गए उपयुक्त उपकरणों को चुना जाना चाहिए। डिटर्जेंट वाले समाधानों के लिए, एक प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणाली या हवा-कुशन पिपेट के लिए एक विकल्प के रूप में तथाकथित "कम प्रतिधारण" पिपेट टिप्स की सिफारिश की जाती है। का प्रभावऐस पिपेट टिपएक विशेष रूप से हाइड्रोफोबिक सतह पर आधारित है। डिटर्जेंट युक्त तरल पदार्थ अंदर और बाहर एक अवशेष फिल्म नहीं छोड़ते हैं, ताकि समाधान के नुकसान को कम से कम किया जा सके।
सभी घटकों की सटीक खुराक के अलावा, यह भी महत्वपूर्ण है कि तैयारी का कोई संदूषण नहीं होता है। यह उच्च शुद्धता की उपभोग्य सामग्रियों का उपयोग करने के लिए पर्याप्त नहीं है, क्योंकि एक वायु कुशन पिपेट में पिपेटिंग प्रक्रिया एरोसोल का उत्पादन कर सकती है जो पिपेट में रहती है। एरोसोल में निहित डीएनए को निम्नलिखित पिपेटिंग चरण में एक नमूने से दूसरे में स्थानांतरित किया जा सकता है और इस प्रकार संदूषण की ओर ले जाता है। ऊपर उल्लिखित प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणाली भी इस जोखिम को कम कर सकती है। वायु-कुशन पिपेट के लिए यह स्प्लैश, एरोसोल और बायोमोलेक्यूलस को बनाए रखने के लिए पिपेट शंकु की रक्षा के लिए फिल्टर युक्तियों का उपयोग करने के लिए समझ में आता है।
पोस्ट टाइम: DEC-06-2022