सफल प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं के लिए, यह आवश्यक है कि प्रत्येक तैयारी में व्यक्तिगत प्रतिक्रिया घटक सही एकाग्रता में मौजूद हों। इसके अलावा, यह महत्वपूर्ण है कि कोई संदूषण न हो।
विशेष रूप से जब कई प्रतिक्रियाओं को स्थापित करना होता है, तो प्रत्येक अभिकर्मक को प्रत्येक बर्तन में अलग से पाइप करने के बजाय एक तथाकथित मास्टर मिश्रण तैयार करने के लिए इसे स्थापित किया गया है। पूर्व-कॉन्फ़िगर मिश्रण व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं, जिनमें केवल नमूना-विशिष्ट घटक (प्राइमर) और पानी मिलाया जाता है। वैकल्पिक रूप से, मास्टर मिश्रण स्वयं तैयार किया जा सकता है। दोनों वेरिएंट में, मिश्रण को बिना टेम्पलेट के प्रत्येक पीसीआर पोत में वितरित किया जाता है और अंत में व्यक्तिगत डीएनए नमूना अलग से जोड़ा जाता है।
मास्टर मिक्स का उपयोग करने के कई फायदे हैं: सबसे पहले, एकल पिपेटिंग चरणों की संख्या कम हो जाती है। इस तरह, पिपेटिंग के दौरान उपयोगकर्ता की त्रुटियों का जोखिम और संदूषण का जोखिम दोनों कम हो जाते हैं और निश्चित रूप से, समय की बचत होती है। सिद्धांत रूप में, पिपेटिंग सटीकता भी अधिक है, क्योंकि बड़ी मात्रा में खुराक दी जाती है। पिपेट के तकनीकी डेटा की जांच करते समय इसे समझना आसान है: खुराक की मात्रा जितनी छोटी होगी, विचलन उतना ही अधिक हो सकता है। तथ्य यह है कि सभी तैयारियां एक ही बर्तन से आती हैं, इसका एकरूपता (यदि अच्छी तरह मिश्रित हो) पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है। इससे प्रयोगों की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता में भी सुधार होता है।
मास्टर मिश्रण तैयार करते समय, कम से कम 10% अतिरिक्त मात्रा मिलानी चाहिए (उदाहरण के लिए यदि 10 तैयारियों की आवश्यकता है, तो 11 के आधार पर गणना करें), ताकि अंतिम बर्तन भी ठीक से भर जाए। इस तरह, (मामूली) पाइपिंग अशुद्धियाँ, और डिटर्जेंट युक्त समाधानों की खुराक देते समय नमूना हानि के प्रभाव की भरपाई की जा सकती है। डिटर्जेंट पोलीमरेज़ और मास्टर मिक्स जैसे एंजाइम समाधानों में निहित होते हैं, जिससे सामान्य की आंतरिक सतह पर फोम का निर्माण और अवशेष होते हैं।पिपेट युक्तियाँ.
अनुप्रयोग और वितरित किए जाने वाले तरल के प्रकार के आधार पर, सही पिपेटिंग तकनीक (1) का चयन किया जाना चाहिए और उपयुक्त उपकरण का चयन किया जाना चाहिए। डिटर्जेंट युक्त समाधानों के लिए, एयर-कुशन पिपेट के विकल्प के रूप में एक प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणाली या तथाकथित "कम अवधारण" पिपेट युक्तियों की सिफारिश की जाती है। का प्रभावऐस पिपेट टिपविशेष रूप से हाइड्रोफोबिक सतह पर आधारित है। डिटर्जेंट युक्त तरल पदार्थ अंदर और बाहर कोई अवशेष फिल्म नहीं छोड़ते हैं, ताकि घोल के नुकसान को कम किया जा सके।
सभी घटकों की सटीक खुराक के अलावा, यह भी महत्वपूर्ण है कि तैयारियों में कोई संदूषण न हो। उच्च शुद्धता की उपभोग्य सामग्रियों का उपयोग करना पर्याप्त नहीं है, क्योंकि एयर कुशन पिपेट में पिपेटिंग प्रक्रिया एयरोसोल का उत्पादन कर सकती है जो पिपेट में रहते हैं। एरोसोल में मौजूद डीएनए को निम्नलिखित पिपेटिंग चरण में एक नमूने से दूसरे नमूने में स्थानांतरित किया जा सकता है और इस प्रकार संदूषण हो सकता है। ऊपर उल्लिखित प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणालियाँ भी इस जोखिम को कम कर सकती हैं। एयर-कुशन पिपेट के लिए स्पलैश, एरोसोल और बायोमोलेक्यूल्स को बनाए रखकर पिपेट शंकु की रक्षा के लिए फ़िल्टर युक्तियों का उपयोग करना समझ में आता है।
पोस्ट करने का समय: दिसम्बर-06-2022