प्रक्रियाओं के मानकीकरण में उनका अनुकूलन और बाद में स्थापना और सामंजस्य शामिल है, जिससे लंबे समय तक इष्टतम प्रदर्शन की अनुमति मिलती है-उपयोगकर्ता से स्वतंत्र। मानकीकरण उच्च-गुणवत्ता वाले परिणामों के साथ-साथ उनकी प्रजनन क्षमता और तुल्यता सुनिश्चित करता है।
(क्लासिक) पीसीआर का लक्ष्य एक विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम की पीढ़ी है। कुछ अनुप्रयोगों के लिए, की उपजपीसीआर उत्पादभी प्रासंगिक है। इन प्रतिक्रियाओं के लिए, यह सुनिश्चित करने के लिए देखभाल की जानी चाहिए कि नमूनों से समझौता नहीं किया गया है और पीसीआर वर्कफ़्लो स्थिर रहता है। विशेष रूप से, यह दूषित पदार्थों की शुरूआत को कम करने के लिए अनुवाद करता है जो झूठे सकारात्मक या झूठे नकारात्मक परिणामों को जन्म दे सकता है या यहां तक कि पीसीआर प्रतिक्रिया को रोक सकता है। इसके अलावा, प्रतिक्रिया की स्थिति एक रन के भीतर प्रत्येक व्यक्तिगत नमूने के लिए यथासंभव समान होनी चाहिए और बाद की प्रतिक्रियाओं (एक ही विधि के) के लिए हस्तांतरणीय होना चाहिए। यह प्रतिक्रियाओं की संरचना के साथ -साथ साइक्लर में तापमान नियंत्रण के प्रकार को भी संदर्भित करता है। उपयोगकर्ता की त्रुटियों, निश्चित रूप से, जितना संभव हो उतना बचा जाना चाहिए।
नीचे, हम उन चुनौतियों का प्रदर्शन करेंगे जो तैयारी के दौरान और एक पीसीआर के रन के दौरान सामना की जाती हैं - और समाधानों के लिए दृष्टिकोण जो पीसीआर वर्कफ़्लो के मानकीकरण के लिए उपयोग किए जाने वाले उपकरणों और उपभोग्य सामग्रियों के संबंध में मौजूद हैं।
प्रतिक्रिया तैयारी
क्रमशः पीसीआर-वाहिकाओं, या प्लेटों में प्रतिक्रिया घटकों के वितरण में, कई चुनौतियां शामिल हैं जिन्हें दूर किया जाना चाहिए:
प्रतिक्रिया की स्थिति
व्यक्तिगत घटकों की सटीक और सटीक खुराक अपरिहार्य है जब सबसे समान प्रतिक्रिया स्थितियों के लिए लक्ष्य किया जाता है। एक अच्छी पिपेटिंग तकनीक के अलावा, सही उपकरण का चयन करना महत्वपूर्ण है। पीसीआर मास्टर-मिक्स में अक्सर ऐसे पदार्थ होते हैं जो चिपचिपाहट बढ़ाते हैं या फोम उत्पन्न करते हैं। पिपेटिंग प्रक्रिया के दौरान, ये पर्याप्त गीला करने के लिए नेतृत्व करते हैंपिपेट टिप्स, इस प्रकार पिपेटिंग सटीकता को कम करना। प्रत्यक्ष डिस्पेंसिंग सिस्टम या वैकल्पिक पिपेट टिप्स का उपयोग जो गीले होने के लिए कम प्रवण हैं, पाइपिंग प्रक्रिया की सटीकता और सटीकता में सुधार कर सकते हैं।
संदूषण
डिस्पेंसिंग प्रक्रिया के दौरान, एरोसोल उत्पन्न होते हैं, जो अगर पिपेट के अंदर तक पहुंचने की अनुमति देते हैं, तो संभावित रूप से अगले पिपेटिंग चरण के दौरान एक और नमूने को दूषित कर सकते हैं। इसे फ़िल्टर युक्तियों या प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणालियों का उपयोग करके रोका जा सकता है।
जैसे उपभोग्यसुझावों, पीसीआर वर्कफ़्लो में उपयोग किए जाने वाले जहाजों और प्लेटों में ऐसे पदार्थ नहीं होने चाहिए जो नमूने से समझौता करते हैं या परिणाम को गलत साबित करते हैं। इनमें डीएनए, डीएनएएस, आरएनएएस और पीसीआर इनहिबिटर, साथ ही ऐसे घटक शामिल हैं जो प्रतिक्रिया के दौरान सामग्री से संभावित रूप से लीच कर सकते हैं - लीचबल्स के रूप में जाना जाने वाला पदार्थ।
उपयोगकर्ता त्रुटि
अधिक नमूने संसाधित होते हैं, त्रुटि जोखिम उतना ही अधिक होता है। यह आसानी से हो सकता है कि एक नमूना गलत पोत या गलत कुएं में पिपेट किया जाता है। इस जोखिम को कुओं के आसानी से स्पष्ट अंकन से काफी कम किया जा सकता है। डिस्पेंसिंग चरणों के स्वचालन के माध्यम से, "मानव कारक", अर्थात, त्रुटियों और उपयोगकर्ता-संबंधित विविधताओं को कम से कम किया जाता है, इस प्रकार प्रजनन क्षमता बढ़ जाती है, विशेष रूप से छोटे प्रतिक्रिया संस्करणों के मामले में। इसके लिए वर्कस्टेशन में नियोजित होने के लिए पर्याप्त आयामी स्थिरता की प्लेटों की आवश्यकता होती है। संलग्न बारकोड अतिरिक्त मशीन-रीडबिलिटी प्रदान करते हैं, जो पूरी प्रक्रिया में नमूना ट्रैकिंग को सरल बनाता है।
थर्मोसाइक्लर का प्रोग्रामिंग
एक उपकरण प्रोग्रामिंग समय लेने के साथ-साथ त्रुटि-प्रवण साबित हो सकता है। अलग -अलग पीसीआर थर्मल साइक्लर विशेषताएं इस प्रक्रिया चरण को सरल बनाने के लिए एक साथ काम करती हैं और, सबसे महत्वपूर्ण बात, इसे सुरक्षित बनाने के लिए:
आसान संचालन और अच्छा उपयोगकर्ता मार्गदर्शन कुशल प्रोग्रामिंग का आधार है। इस नींव पर निर्माण, पासवर्ड-संरक्षित उपयोगकर्ता प्रशासन अपने स्वयं के कार्यक्रमों को अन्य उपयोगकर्ताओं द्वारा बदल दिए जाने से रोक देगा। यदि कई साइकिलर्स (एक ही प्रकार के) उपयोग में हैं, तो यह फायदेमंद है यदि किसी प्रोग्राम को सीधे एक उपकरण से दूसरे में USB या कनेक्टिविटी के माध्यम से स्थानांतरित किया जा सकता है। कंप्यूटर सॉफ्टवेयर कंप्यूटर पर कार्यक्रमों, उपयोगकर्ता अधिकारों और दस्तावेजों के केंद्रीय और सुरक्षित प्रशासन को सक्षम करता है।
पीसीआर रन
रन के दौरान, डीएनए को प्रतिक्रिया पोत में प्रवर्धित किया जाता है, जहां प्रत्येक नमूने को समान, सुसंगत प्रतिक्रिया स्थितियों के अधीन किया जाना चाहिए। निम्नलिखित पहलू प्रक्रिया के लिए प्रासंगिक हैं:
तापमान नियंत्रण
तापमान नियंत्रण और साइक्लर ब्लॉक के समरूपता में उत्कृष्ट सटीकता सभी नमूनों के तापमान कंडीशनिंग का भी आधार है। हीटिंग और कूलिंग तत्वों (पेल्टियर तत्वों) की उच्च गुणवत्ता, साथ ही साथ जिस तरह से ये ब्लॉक से जुड़े हैं, वे निर्णायक कारक हैं जो "एज इफेक्ट" के रूप में ज्ञात तापमान विसंगतियों के जोखिम को निर्धारित करेंगे, जो कि "एज इफेक्ट" के रूप में जाना जाता है।
वाष्पीकरण
व्यक्तिगत प्रतिक्रिया घटकों की सांद्रता वाष्पीकरण के कारण प्रतिक्रिया के दौरान नहीं बदलना चाहिए। अन्यथा, यह संभव है कि बहुत कमपीसीआर उत्पादउत्पन्न किया जा सकता है, या कोई भी नहीं। इसलिए एक सुरक्षित सील सुनिश्चित करके वाष्पीकरण को कम करना महत्वपूर्ण है। इस मामले में, थर्मोसाइक्लर के गर्म ढक्कन और पोत की सील हाथ में काम करती है। विभिन्न सीलिंग विकल्प उपलब्ध हैंपीसीआर प्लेट्स (लिंक: सीलिंग लेख), जिससे गर्मी सीलिंग के माध्यम से सबसे अच्छी सील प्राप्त की जाती है। अन्य क्लोजर भी उपयुक्त हो सकते हैं, जब तक कि साइक्लर के ढक्कन के संपर्क दबाव को चयनित सील में समायोजित किया जा सकता है।
लंबी अवधि में सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणामों की सुरक्षा के लिए प्रक्रिया मानकीकरण जगह में है। इसमें यह सुनिश्चित करने के लिए उपकरणों का नियमित रखरखाव शामिल है कि यह हमेशा अच्छी काम करने की स्थिति में है। सभी उपभोग्य सामग्रियों को सभी बहुत सारे उत्पादों में लगातार उच्च गुणवत्ता का होना चाहिए, और उनकी विश्वसनीय उपलब्धता की गारंटी दी जानी चाहिए।
पोस्ट टाइम: NOV-29-2022