जब 0.2 से 5 μl तक वॉल्यूम को पाइप करना होता है, तो सटीकता और सटीकता का पाइपिंग करना अत्यंत महत्वपूर्ण होता है, एक अच्छी पिपेटिंग तकनीक आवश्यक होती है क्योंकि गलतियों को संभालना छोटे संस्करणों के साथ अधिक स्पष्ट होता है।
जैसा कि अभिकर्मकों और लागतों को कम करने पर अधिक ध्यान केंद्रित किया जा रहा है, पीसीआर मास्टरमिक्स या एंजाइम प्रतिक्रियाओं की तैयारी के लिए छोटे वॉल्यूम उच्च मांग में हैं, उदाहरण के लिए। लेकिन 0.2 से छोटे संस्करणों को पाइप करना - 5 μl सटीकता और सटीकता के लिए नई चुनौतियां सेट करता है। निम्नलिखित बिंदु आवश्यक हैं:
- पिपेट और टिप आकार: हमेशा सबसे कम नाममात्र की मात्रा के साथ पिपेट चुनें और हवा के कुशन को यथासंभव छोटा रखने के लिए सबसे छोटा टिप। जब 1 μl जैसे पिपेटिंग करते हैं, तो 1 - 10 μl पिपेट के बजाय 0.25 - 2.5 μl पिपेट और मिलान टिप चुनें।
- अंशांकन और रखरखाव: यह आवश्यक है कि आपके पिपेट को ठीक से कैलिब्रेट और बनाए रखा जाए। पिपेट पर छोटे समायोजन और टूटे हुए भागों को व्यवस्थित और यादृच्छिक त्रुटि मूल्यों में भारी वृद्धि होती है। आईएसओ 8655 के अनुसार एक अंशांकन वर्ष में एक बार किया जाना चाहिए।
- सकारात्मक विस्थापन पिपेट: जांचें कि क्या आपके पास अपनी प्रयोगशाला में कम मात्रा रेंज के साथ एक सकारात्मक विस्थापन पिपेट है। सामान्य तौर पर, इस प्रकार के पिपेट का उपयोग करने से क्लासिक एयर-कुशन पिपेट की तुलना में सटीकता और सटीकता के संदर्भ में बेहतर पाइपिंग परिणाम होता है।
- बड़े वॉल्यूम का उपयोग करने का प्रयास करें: आप अंतिम प्रतिक्रिया में समान मात्रा के साथ बड़े वॉल्यूम को पिपेट करने के लिए अपने नमूने को पतला करने पर विचार कर सकते हैं। यह बहुत छोटे नमूना संस्करणों के साथ pipetting त्रुटियों को कम कर सकता है।
एक अच्छे उपकरण के अलावा, शोधकर्ता के पास एक बहुत अच्छी पिपेटिंग तकनीक होनी चाहिए। निम्नलिखित चरणों पर विशेष ध्यान दें:
- टिप अटैचमेंट: टिप पर पिपेट को जाम न करें क्योंकि यह ठीक टिप अंत को नुकसान पहुंचा सकता है क्योंकि तरल बीम को पुनर्निर्देशित किया जा सकता है या छिद्र को नुकसान पहुंचाया जा सकता है। केवल एक टिप संलग्न करते समय हल्के दबाव को लागू करें और एक स्प्रिंग-लोडेड टिप शंकु के साथ एक पिपेट का उपयोग करें।
- पिपेट को पकड़े हुए: सेंट्रीफ्यूज, साइक्लर, आदि की प्रतीक्षा करते हुए अपने हाथ में पिपेट को न पकड़ें। पिपेट के अंदर गर्म गर्म हो जाएगा और हवा के कुशन का नेतृत्व करने के लिए सेट वॉल्यूम से विचलन का विस्तार करने के लिए पिपेटिंग करते समय।
- प्री-वेटिंग: टिप और पिपेट के अंदर हवा का आर्द्रकरण नमूना के लिए टिप तैयार करता है और ट्रांसफर वॉल्यूम की आकांक्षा करते समय वाष्पीकरण से बचता है।
- ऊर्ध्वाधर आकांक्षा: यह बहुत महत्वपूर्ण है जब केशिका प्रभाव से बचने के लिए छोटे संस्करणों को संभालते हैं जो तब होता है जब पिपेट को एक कोण पर आयोजित किया जाता है।
- विसर्जन गहराई: केशिका प्रभाव के कारण टिप में प्रवेश करने वाले तरल को रोकने के लिए टिप को जितना संभव हो उतना कम विसर्जित करें। अंगूठे का नियम: टिप और वॉल्यूम जितना छोटा होगा, विसर्जन की गहराई कम होगी। हम छोटे संस्करणों को पाइप करते समय अधिकतम 2 मिमी की सलाह देते हैं।
- 45 ° कोण पर वितरण: तरल के इष्टतम प्रवाह-आउट की गारंटी दी जाती है जब पिपेट 45 ° कोण पर आयोजित किया जाता है।
- पोत की दीवार या तरल सतह से संपर्क करें: छोटे संस्करणों को केवल ठीक से तब ही डिस्पेंस किया जा सकता है जब टिप पोत की दीवार के खिलाफ आयोजित की जाती है, या तरल में डूब जाती है। यहां तक कि टिप से अंतिम बूंद को सटीक रूप से भेजा जा सकता है।
- ब्लो-आउट: टिप में मौजूद तरल की अंतिम बूंद को भी फैलाने के लिए कम मात्रा में फैलाने के बाद एक ब्लो-आउट अनिवार्य है। पोत की दीवार के खिलाफ ब्लो-आउट भी किया जाना चाहिए। तरल सतह पर एक ब्लो-आउट प्रदर्शन करते समय नमूने में हवा के बुलबुले नहीं लाने के लिए सावधान रहें।
पोस्ट टाइम: फरवरी -18-2021