पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) जीवन विज्ञान प्रयोगशालाओं में उपयोग की जाने वाली व्यापक रूप से ज्ञात विधियों में से एक है।
एकत्र किए गए नमूनों या परिणामों के उत्कृष्ट प्रसंस्करण और विश्लेषण के लिए पीसीआर प्लेटें प्रथम श्रेणी के प्लास्टिक से निर्मित की जाती हैं।
सटीक तापीय स्थानांतरण प्रदान करने के लिए उनमें पतली और एक समान दीवारें होती हैं।
वास्तविक समय अनुप्रयोगों की तैयारी में, डीएनए या आरएनए के सूक्ष्म खंड को एकांत में रखा जाता है और पीसीआर प्लेटों में संग्रहीत किया जाता है।
पीसीआर प्लेटें हीट सीलिंग में अत्यधिक कुशल हैं और साथ ही गर्मी के प्रवाह को भी रोकती हैं।
हालाँकि, पीसीआर प्लेटें जितनी प्रभावी और विश्वसनीय हैं, नमूनों को संसाधित करते समय त्रुटि और अशुद्धियाँ आसानी से दूर हो जाती हैं।
इसलिए, यदि आप अच्छी और उच्च गुणवत्ता प्राप्त करने में रुचि रखते हैंपीसीआर प्लेटें.किसी विश्वसनीय पीसीआर प्लेट निर्माता से संपर्क करना आदर्श है। इससे आपको बेस्ट डील मिलने का भरोसा रहता है.
यहां अभिकर्मकों या नमूनों के संदूषण से बचने और परिणामों में अशुद्धियां आने से रोकने के लिए पालन की जाने वाली कुछ सावधानियां दी गई हैं।
परिवेश को स्टरलाइज़ करना
अशुद्धियों की उपस्थिति के कारण गलत सकारात्मक या नकारात्मक परिणाम होते हैं, जिससे आपको परिणामों पर संदेह होता है।
अशुद्धियाँ और संदूषक विभिन्न रूपों में होते हैं जैसे असंबद्ध डीएनए या रासायनिक योजक जो अंततः प्रतिक्रिया की दक्षता और प्रभावशीलता को कम कर देते हैं।
पीसीआर प्लेट के संदूषण की दर को काफी हद तक कम करने के कई तरीके हैं।
पिपेट के माध्यम से अशुद्धियों को आपके नमूनों में प्रवेश करने से रोकने के लिए निष्फल फ़िल्टर युक्तियों का उपयोग करना एक और उपयोगी तरीका है।
विशेष रूप से पीसीआर के उपयोग के लिए पिपेट और रैक सहित उपकरणों का एक पूरी तरह से साफ सेट समर्पित करें। यह प्रयोगशाला के चारों ओर अशुद्धियों या संदूषकों के नगण्य स्थानांतरण की गारंटी देगा।
प्रदूषकों को मिटाने के लिए पिपेट, रैक और बेंच पर ब्लीच, इथेनॉल का उपयोग करें।
कण संदूषण को और कम करने के लिए अपनी सभी पीसीआर प्रतिक्रियाओं के लिए एक आरक्षित स्थान आवंटित करें।
हर कदम पर साफ दस्तानों का उपयोग करें और उन्हें बार-बार बदलें।
पीसीआर प्लेटें
टेम्पलेट की एकाग्रता और शुद्धता का निरीक्षण करें।
पीसीआर के साथ नमूनों का विश्लेषण करते समय उपयोग की जाने वाली बेंच और उपकरणों की सफाई बनाए रखी जानी चाहिए। विश्लेषण और प्रसंस्करण से पहले नमूनों की शुद्धता की डिग्री को मान्य करना आवश्यक है।
आम तौर पर, विश्लेषक डीएनए नमूनों की एकाग्रता और शुद्धता स्तर को ध्यान में रखते हैं।
प्रयास करें कि 260एनएम/280एनएम के लिए अवशोषण का अनुपात 1.8 से कम न हो। जबकि अशुद्धियों की पहचान करने के लिए 230nm और 320nm के बीच की तरंग दैर्ध्य का उपयोग किया जाता है।
एक उदाहरण में, 230nm अवशोषण दर पर कैओट्रोपिक लवण और अन्य कार्बनिक यौगिकों का पता लगाया जाता है। जबकि डीएनए नमूनों में गंदगी का भी 320nm की अवशोषण दर पर पता लगाया और सत्यापित किया जाता है।
उत्पाद के साथ पीसीआर प्लेटों को ओवरलोड करने से बचें
जितना एक साथ कई उत्पादों को चलाने की इच्छा होती है, इसके परिणामस्वरूप पीसीआर प्लेटों का क्रॉस-संदूषण होता है।
विभिन्न उत्पादों के अपशिष्टों के साथ पीसीआर प्लेटों को ओवरलोड करने से नमूनों का पता लगाना बेहद मुश्किल हो जाता है।
एलिकोट पीसीआर अभिकर्मकों का रिकॉर्ड रखें
निरंतर फ्रीज/पिघलना चक्र और एलिकोट का बार-बार उपयोग पुन: क्रिस्टलीकरण के माध्यम से पीसीआर अभिकर्मकों, एंजाइमों और डीएनटीपी को नुकसान पहुंचा सकता है।
विश्लेषण के लिए नमूने तैयार करते समय हमेशा उपयोग किए जाने वाले अंशांश की दर की निगरानी करने का प्रयास करें।
पसंदीदा एलआईएमएस इन्वेंट्री और अभिकर्मकों और नमूनों के जमने या पिघलने की मात्रा को नियंत्रित करने के लिए अधिक उपयुक्त है।
सर्वश्रेष्ठ एनीलिंग तापमान चुनें।
गलत एनीलिंग तापमान चुनना और उसका उपयोग करना एक और तरीका है जिसमें पीसीआर परिणामों में त्रुटि होती है।
कभी-कभी, प्रतिक्रिया योजना के अनुसार नहीं होती है। एक सफल प्रतिक्रिया को सुविधाजनक बनाने के लिए एनीलिंग तापमान को कम करना वांछित है।
हालाँकि, तापमान कम करने से झूठी सकारात्मकता और प्राइमर डिमर की उपस्थिति की संभावना बढ़ जाती है।
पीसीआर प्लेटों का उपयोग करते समय पिघलने की अवस्था के विश्लेषण की पुष्टि करना महत्वपूर्ण है क्योंकि यह सही एनीलिंग तापमान का चयन करने का एक अच्छा संकेतक है।
प्राइमर डिज़ाइन सॉफ़्टवेयर डिज़ाइनिंग में सहायता करता है, सही एनीलिंग तापमान का प्रावधान सीधे पीसीआर प्लेटों में त्रुटि को कम करता है।
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पोस्ट करने का समय: अक्टूबर-30-2021