ʻO ka standardization o nā kaʻina hana e pili ana i kā lākou optimization a me ka hoʻokumu ʻana a me ka harmonization ma hope, e ʻae ana i ka hana maikaʻi loa - kūʻokoʻa i ka mea hoʻohana. Hōʻoia ka standardization i nā hopena kiʻekiʻe, a me kā lākou reproducibility a me ka hoʻohālikelike.
ʻO ka pahuhopu o (maʻamau) PCR ʻo ia ka hoʻokumu ʻana i kahi hopena hilinaʻi a hiki ke hana hou ʻia. No kekahi mau noi, ka hua o kahuahana PCRpili nō hoʻi. No kēia mau hopena, pono e mālama ʻia e hōʻoia ʻaʻole e hoʻopaʻa ʻia nā laʻana a paʻa mau ka PCR workflow. ʻO ka mea kikoʻī, ʻo ia ka unuhi ʻana i ka hoʻemi ʻana i ka hoʻokomo ʻana i nā mea ʻino e hiki ke alakaʻi i nā hopena maikaʻi ʻole a i ʻole nā hopena maikaʻi ʻole a i ʻole ke kāohi ʻana i ka hopena PCR. Eia kekahi, pono e like ke ano o ka hopena no kela me keia la'ana i loko o ka holo ana a hiki ke hoololiia i na hana mahope (ma ke ano like). E pili ana kēia i ke ʻano o nā hopena a me ke ʻano o ka mālama ʻana i ka mahana i loko o ka cycler. ʻO nā hewa o nā mea hoʻohana, ʻoiaʻiʻo, e pale ʻia e like me ka hiki.
Ma lalo nei, e hōʻike mākou i nā pilikia i loaʻa i ka wā hoʻomākaukau a me ka holo ʻana o kahi PCR - a me nā ala e pili ana i nā hoʻonā e kū nei e pili ana i nā mea hana a me nā mea hoʻohana i hoʻohana ʻia no ka hoʻohālikelike ʻana i nā kahe hana PCR.
Hoʻomākaukau pane
ʻO ka hāʻawi ʻana i nā ʻāpana hoʻololi i loko o nā moku PCR, a i ʻole nā palapala, i kēlā me kēia, aia nā pilikia he nui e pono ke hoʻokō ʻia:
Kūlana pane
ʻO ka hoʻopaʻa ʻana pololei a me ka pololei o nā ʻāpana ponoʻī he mea nui ia i ka wā e ʻimi ai i nā kūlana hoʻohālikelike like loa. Ma waho aʻe o kahi ʻenehana pipetting maikaʻi, ke koho ʻana i ka mea hana pono he mea koʻikoʻi. Loaʻa pinepine nā PCR master-mixes i nā mea e hoʻonui ai i ka viscosity a i ʻole e hoʻoulu i ka huʻa. I ka wā o ka pipetting, alakaʻi kēia i ka pulu nui o kaʻōlelo paipai pipette, pela e hoemi ai i ka pololei o ka paipu. ʻO ka hoʻohana ʻana i nā ʻōnaehana hoʻopuka pololei a i ʻole nā ʻōlelo aʻoaʻo pipette ʻē aʻe i hiki ke hoʻomaikaʻi i ka pololei a me ka pololei o ke kaʻina pipetting.
Hoʻohaumia
I ka wā o ka hāʻawi ʻana, hana ʻia nā aerosol, inā e ʻae ʻia e komo i loko o ka pipette, hiki ke hoʻohaumia i kekahi laʻana i ka wā pipetting e hiki mai ana. Hiki ke pale ʻia kēia ma ka hoʻohana ʻana i nā ʻōlelo aʻoaʻo kānana a i ʻole nā ʻōnaehana neʻe pololei.
Nā mea hoʻohana e like meʻōlelo aʻoaʻo, nā moku a me nā papa i ho'ohana 'ia ma ka PCR workflow 'a'ole pono e loa'a nā mea e ho'opō'ino ai i ka hāpana a i 'ole e ho'opunipuni i ka hopena. Hoʻopili kēia mau mea i ka DNA, DNases, RNases a me ka PCR inhibitors, a me nā ʻāpana i hiki ke hoʻoheheʻe ʻia mai ka mea i ka wā o ka hopena - nā mea i ʻike ʻia he leachables.
Kupa ka mea hoʻohana
ʻOi aku ka nui o nā laʻana, ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka hewa. Hiki ke maʻalahi ke hoʻokomo ʻia kahi laʻana i loko o ka moku hewa a i ʻole ka luawai hewa. Hiki ke hoemi nui ia keia pilikia ma ka hoailona maalahi o na luawai. Ma o ka automation o ka hāʻawi ʻana i nā ʻanuʻu, ua hōʻemi ʻia ka "human factor", ʻo ia hoʻi, nā hewa a me nā ʻano like ʻole e pili ana i ka mea hoʻohana, no laila e hoʻonui ai i ka reproducibility, ʻoi aku ka nui o ka nui o ka hopena. Pono kēia i nā papa o ke kūpaʻa kūpono e hoʻohana ʻia i loko o kahi hale hana. Hāʻawi nā barcode i hoʻopili ʻia i ka hiki ke heluhelu i ka mīkini, e hoʻomaʻamaʻa i ka nānā ʻana i ka laʻana ma ke kaʻina holoʻokoʻa.
Ka papahana o ka thermocycler
ʻO ka hoʻolālā ʻana i kahi mea hana hiki ke hoʻopau i ka manawa a me ka hewa. Hana pū nā hiʻohiʻona PCR thermal cycles e hoʻomaʻamaʻa i kēia kaʻina hana a, ʻo ka mea nui loa, e palekana ia:
ʻO ka hana maʻalahi a me ke alakaʻi hoʻohana maikaʻi ke kumu o ka hoʻolālā kūpono. Ke kūkulu ʻia nei ma luna o kēia kumu, ʻo ka hoʻokele hoʻohana ʻana i ka ʻōlelo huna e pale aku i nā polokalamu ponoʻī mai ka hoʻololi ʻia e nā mea hoʻohana ʻē aʻe. Inā hoʻohana ʻia nā mea hoʻokele he nui (o ke ʻano like), he mea maikaʻi inā hiki ke hoʻololi pololei ʻia kahi papahana mai kekahi mea hana i kekahi ma o USB a i ʻole ka pilina. Hiki i nā polokalamu kamepiula ke hoʻokele i waena a paʻa i nā polokalamu, nā kuleana mea hoʻohana a me nā palapala ma ke kamepiula.
Holo PCR
I ka wā o ka holo ʻana, hoʻonui ʻia ka DNA i loko o ka moku pane, kahi e hoʻopili ʻia ai kēlā me kēia hāpana i nā kūlana hoʻohālikelike like. Ua pili kēia mau ʻaoʻao no ke kaʻina hana:
Hoʻomalu mahana
ʻO ka pololei maikaʻi loa i ka mālama ʻana i ka wela a me ka homogeneity o ka poloka cycler ke kumu no ka hoʻomaʻamaʻa wela o nā laʻana āpau. ʻO ke ʻano kiʻekiʻe o nā mea hoʻomehana a me nā mea hoʻoluʻu (peltier elements), a me ke ʻano o ka pili ʻana o kēia mau mea i ka poloka, ʻo ia nā mea hoʻoholo e hoʻoholo ai i ka pilikia o nā ʻokoʻa wela i kapa ʻia ʻo "ka hopena hopena".
Hoʻohuehu
ʻAʻole pono e hoʻololi nā manaʻo o nā ʻāpana hoʻololi i ka wā o ka hopena ma muli o ka evaporation. A i ʻole, hiki i ka liʻiliʻi loahuahana PCRhiki ke hana ʻia, a ʻaʻole loa. No laila he mea koʻikoʻi ia e hōʻemi i ka evaporation ma ka hōʻoia ʻana i kahi sila paʻa. I kēia hihia, hana lima lima ka uhi wela o ka thermocycler a me ke sila o ka moku. Loaʻa nā koho hoʻopaʻa ʻokoʻa noNā pā PCR (loulou: ʻatikala hoʻopaʻa ʻana), kahi e loaʻa ai ka sila maikaʻi loa ma o ka sila wela. Hiki ke kūpono nā pani ʻē aʻe, inā hiki ke hoʻololi ʻia ke kaomi hoʻopili o ka poʻi cycler i ke sila i koho ʻia.
Hoʻonohonoho ʻia ka hana maʻamau i mea e pale ai i nā hopena pololei a hiki ke hana hou ʻia i ka wā lōʻihi. Hoʻopili kēia i ka mālama mau ʻana i nā mea hana e hōʻoia i ke kūlana hana maikaʻi mau. Pono nā mea hoʻohana a pau i ke kūlana kiʻekiʻe ma waena o nā ʻāpana āpau i hana ʻia, a pono e hōʻoia ʻia ko lākou loaʻa hilinaʻi.
Ka manawa hoʻouna: Nov-29-2022