Hoʻolauna
He aha ka Nucleic Acid Extraction?
Ma nā huaʻōlelo maʻalahi loa, ʻo ka unuhi ʻana o ka nucleic acid ka wehe ʻana i ka RNA a me / a i ʻole DNA mai kahi laʻana a me nā mea ʻē aʻe ʻaʻole pono. Hoʻokaʻawale ke kaʻina hana o ka unuhi ʻana i nā ʻakika nucleic mai kahi laʻana a loaʻa iā lākou ma ke ʻano o kahi eluate koʻikoʻi, ʻaʻohe mea hoʻoheheʻe a me nā mea haumia e hiki ke hoʻopilikia i nā noi o lalo.
Noi no ka Nucleic Acid Extraction
Hoʻohana ʻia nā ʻakika nucleic i hoʻomaʻemaʻe ʻia i kahi plethora o nā noi like ʻole, e kū ana ma waena o nā ʻoihana like ʻole. ʻO ka mālama ola kino paha ka wahi i hoʻohana nui ʻia, me ka RNA i hoʻomaʻemaʻe ʻia a me ka DNA i koi ʻia no ka lehulehu o nā kumu hoʻāʻo like ʻole.
ʻO nā noi o ka ʻokiʻoki nucleic acid i ka mālama olakino e komo pū ana:
- Ke Kaʻina Hana Hana Hou (NGS)
- SNP Genotyping ma muli o ka ho'onui
- Genotyping ma muli o ka lālani
- Kaohi ʻana i ka Enzyme Digestion
- Nānā i ka hoʻohana ʻana i nā Enzymes Hoʻololi (e laʻa me Ligation a me Cloning)
Aia kekahi mau ʻāina ʻē aʻe ma waho o ka mālama olakino kahi e hoʻohana ʻia ai ka ʻokiʻoki nucleic acid, me ka ʻaʻole i kaupalena ʻia i ka hoʻāʻo paternity, forensics a me genomics.
He Moʻolelo Pōkole no ka Unuhi ʻAka Nucleic
Ka unuhi ʻana o DNAʻO ia ka mea i hoʻokaʻawale mua ʻia e kekahi kauka Swiss i kapa ʻia ʻo Friedrich Miescher i ka makahiki 1869. Ua manaʻo ʻo Miescher e hoʻoponopono i nā kumu kumu o ke ola ma ka hoʻoholo ʻana i ke ʻano kemika o nā cell. Ma hope o ka loaʻa ʻana o nā lymphocytes, ua hiki iā ia ke loaʻa i kahi ʻano o ka DNA mai nā leukocytes i loaʻa i loko o ka pus ma nā kaula i hoʻolei ʻia. Ua hana ʻo ia i kēia ma ka hoʻohui ʻana i ka waikawa a me ka alkali i ka cell e haʻalele i ka cytoplasm o ka cell, a laila kūkulu i kahi protocol e hoʻokaʻawale i ka DNA mai nā protein ʻē aʻe.
Ma hope o ka noiʻi ʻana o Miescher, ua nui nā ʻepekema ʻē aʻe i holomua a hoʻomohala i nā ʻenehana e hoʻokaʻawale a hoʻomaʻemaʻe i ka DNA. Ua hoʻomohala ʻo Edwin Joseph Cohn, he kanaka ʻepekema protein i nā ʻenehana he nui no ka hoʻomaʻemaʻe protein i ka wā WW2. ʻO ia ke kuleana no ka hoʻokaʻawale ʻana i ka hapa albumin serum o ka plasma koko, kahi mea nui i ka mālama ʻana i ke kaomi osmotic i loko o nā kīʻaha koko. He mea koʻikoʻi kēia no ka mālama ʻana i nā koa.
I ka makahiki 1953, ua hoʻoholo ʻo Francis Crick, me Rosalind Franklin lāua ʻo James Watson, i ke ʻano o ka DNA, e hōʻike ana he ʻelua kaulahao lōʻihi o nā nucleotides acid nucleic. ʻO kēia ʻike holomua i hoʻokaʻawale i ke ala no Meselson lāua ʻo Stahl, ka mea i hiki ke hoʻomohala i kahi protocol gradient centrifugation e hoʻokaʻawale i ka DNA mai ka bacteria E. Coli i ko lāua hōʻike ʻana i ka replication semi-conservative o DNA i kā lākou hoʻokolohua 1958.
Nā ʻenehana o ka Nucleic Acid Extraction
He aha nā ʻanuʻu 4 o ka ʻili DNA?
Hoʻopili nā ʻano hana unuhi a pau i nā pae kumu like.
Hoʻopiʻi Pūnaewele. ʻO kēia kaʻina, ʻike ʻia hoʻi ʻo ka cell lysis, pili i ka wāwahi ʻana i ka paia cell a/a i ka membrane cell, i mea e hoʻokuʻu ai i nā wai intra-cellular i loaʻa nā nucleic acids o ka hoihoi.
Wehe i nā ʻōpala i makemake ʻole ʻia. Hoʻopili kēia i nā lipid membrane, nā protein a me nā ʻakika nucleic makemake ʻole e hiki ke hoʻopilikia i nā noi o lalo.
Kaʻawale. Nui nā ala like ʻole e hoʻokaʻawale ai i nā ʻakika nucleic o ka hoihoi mai ka lysate i hoʻomaʻemaʻe ʻia āu i hana ai, e hāʻule ana ma waena o ʻelua mau ʻano nui: solution based a solid state (e ʻike i ka ʻāpana aʻe).
Hoʻopaʻa ʻana. Ma hope o ka hoʻokaʻawale ʻia ʻana o nā ʻakika nucleic mai nā mea haumia ʻē aʻe a me nā mea hoʻoheheʻe ʻē aʻe, hōʻike ʻia lākou i loko o kahi eluate koʻikoʻi.
ʻElua ʻano o ka unuhi ʻana
ʻElua ʻano o ka hoʻoheheʻe ʻana i ka waikawa nucleic - nā ʻano hoʻonā a me nā ʻano paʻa. Ua ʻike ʻia ke ʻano hoʻonā hoʻonā ʻia ʻo ke ʻano hoʻoheheʻe kemika, no ka mea e pili ana i ka hoʻohana ʻana i nā kemika e wāwahi i ke kelepona a komo i ka mea nucleic. Hiki i kēia ke hoʻohana i nā pūhui mea ola e like me ka phenol a me ka chloroform, a i ʻole ka mea ʻino a no laila ʻoi aku ka maikaʻi o nā pūhui inorganic e like me Proteinase K a i ʻole silica gel.
ʻO nā laʻana o nā ʻano hana hoʻoheheʻe kemika ʻokoʻa no ka wāwahi ʻana i ke kelepona:
- Osmotic rupture o ka membrane
- Enzymatic digestion o ka paia cell
- Ka hoʻoheheʻe ʻana o ka membrane
- Me nā mea holoi
- Me ka mālama ʻana i ka alkali
ʻO nā ʻenehana mokuʻāina paʻa, ʻike ʻia hoʻi he ʻano mechanical, pili i ka hoʻohana ʻana i ka pilina o DNA me kahi substrate paʻa. Ma ke koho ʻana i kahi pahu a i ʻole mole e hoʻopaʻa ʻia e ka DNA akā ʻaʻole e hoʻopili ka analyte, hiki ke hoʻokaʻawale i nā mea ʻelua. Nā laʻana o nā ʻenehana hoʻoheheʻe paʻa paʻa me ka hoʻohana ʻana i ka silica a me nā lei magnetic.
Wehewehe ʻia ka hoʻoheheʻe ʻia ʻana o ka Magnetic Bead
ʻO ke ʻano o ka hoʻoheheʻe ʻana i ka makeke
Ua ʻike mua ʻia ka hiki ke hoʻoneʻe ʻia me ka hoʻohana ʻana i nā peʻa magnetic ma kahi patent US i waiho ʻia e Trevor Hawkins, no ke keʻena noiʻi ʻo Whitehead Institute. Ua ʻae kēia patent e hiki ke unuhi i nā mea genetic ma o ka hoʻopaʻa ʻana iā lākou i kahi mea kākoʻo paʻa paʻa, ʻo ia paha ka pahu magnetic. ʻO ke kumu, ʻo ʻoe e hoʻohana i kahi pahu magnetic i hoʻohana nui ʻia ma luna o kahi e hoʻopaʻa ʻia ai ka mea genetic, a laila hiki ke hoʻokaʻawale ʻia mai ka supernatant ma ke kau ʻana i ka mana ma waho o ka moku e paʻa ana i ka hāpana.
No ke aha e hoʻohana ai i ka ʻoki ʻana i ka Magnetic Bead?
Ke piʻi nui nei ka ʻenehana hoʻoheheʻe ʻana i ka mākēneki, ma muli o ka hiki ke paʻa i nā kaʻina hana unuhi wikiwiki a maikaʻi. I kēia mau manawa i hala iho nei, ua hoʻomohala ʻia nā peʻa magnetic i hoʻohana nui ʻia me nā ʻōnaehana buffer kūpono, i hiki ai i ka automation o ka hoʻoneʻe ʻana i ka nucleic acid a me kahi kaila hana i māmā loa a me ke kumu kūʻai. Eia nō hoʻi, ʻaʻole pili nā ʻano hana hoʻoheheʻe magnetic i nā ʻanuʻu centrifugation i hiki ke hoʻoulu i nā pūʻali koa e wāwahi i nā ʻāpana DNA lōʻihi. ʻO ia ke ʻano o nā kaula lōʻihi o ka DNA e paʻa mau, he mea nui ia i ka hoʻāʻo ʻana i ka genomics.
Ka manawa hoʻouna: Nov-25-2022