ʻO Polymerase chain reactions (PCR) kekahi o nā ʻano hana i ʻike nui ʻia i nā keʻena ʻepekema ola.
Hana ʻia nā papa PCR mai nā plastik papa mua no ka hana maikaʻi ʻana a me ka nānā ʻana i nā laʻana a i ʻole nā hopena i hōʻiliʻili ʻia.
Loaʻa iā lākou nā paia lahilahi a homogenous e hāʻawi i ka hoʻoili wela kūpono.
I ka hoʻomākaukau ʻana no nā noi manawa maoli, ua hūnā ʻia ka ʻāpana minuke o DNA a i ʻole RNA a mālama ʻia i loko o nā pā PCR.
He maikaʻi loa nā papa PCR i ka hoʻopaʻa ʻana i ka wela a hoʻopaʻa pū i ke kahe o ka wela.
Eia nō naʻe, ʻoiai ʻoi aku ka maikaʻi a me ka hilinaʻi o nā papa PCR, ʻoi aku ka maʻalahi o ka hewa a me ka pololei ʻole i ka wā e hana ana i nā laʻana.
No laila, inā makemake ʻoe e kiʻi i kahi ʻano maikaʻi a kiʻekiʻeNā papa PCR.He kūpono ia e hoʻopili i kahi mea hana pā PCR hilinaʻi. Me kēia e hōʻoiaʻiʻo ʻoe i ka loaʻa ʻana o ka makana maikaʻi loa.
Eia kekahi mau mea e mālama ai i mea e pale aku ai i ka hoʻohaumia ʻana o nā reagents a i ʻole nā laʻana a pale i nā hemahema mai ke kolo ʻana i nā hopena.
Hoomaemae ana i na puni
Loaʻa nā hopena maikaʻi ʻole a maikaʻi ʻole paha ma muli o ka loaʻa ʻana o nā haumia, kahi e kānalua ai ʻoe i nā hopena.
Loaʻa nā mea haumia a me nā mea haumia i nā ʻano like ʻole e like me ka DNA pili ʻole a i ʻole nā mea hoʻohui kemika e hoʻemi i ka pono a me ka pono o ka pane.
Nui nā ala e hoʻemi nui ai i ka nui o ka hoʻopōʻino ʻana o ka pā PCR.
ʻO ka hoʻohana ʻana i nā ʻōlelo aʻoaʻo kānana sterilized kekahi ala maikaʻi e pale ai i nā haumia mai ke kolo ʻana i kāu mau laʻana ma o nā pipettes.
E hoʻolaʻa i kahi hoʻonohonoho maʻemaʻe loa o nā mea hana, i loko o nā pipettes a me nā pahu, no ka hoʻohana wale ʻana i ka PCR. E hōʻoiaʻiʻo kēia i ka hoʻoneʻe ʻole ʻia o nā haumia a i ʻole nā mea haumia a puni ka hale hana.
E hoʻohana i nā bleaches, ethanol ma nā paipu, nā pā a me nā noho e holoi i nā mea haumia.
E hoʻokaʻawale i kahi i hoʻopaʻa ʻia no kāu mau hopena PCR a pau e hōʻemi hou i ka palaka.
E hoʻohana i nā mīkina lima maʻemaʻe i kēlā me kēia ʻanuʻu a hoʻololi pinepine iā lākou.
Nā papa PCR
E nānā i ka manaʻo a me ka maʻemaʻe o ka template.
Pono e mālama ʻia ka maʻemaʻe o ka noho a me nā lako i hoʻohana ʻia i ka nānā ʻana i nā laʻana me ka PCR. Pono e hōʻoia i ke ʻano o ka maʻemaʻe o nā laʻana ma mua o ka nānā ʻana a me ka hana ʻana.
ʻO ka maʻamau, noʻonoʻo nā mea loiloi i ka ʻike a me ka pae maʻemaʻe o nā laʻana DNA.
E hoʻoikaika i ka ratio o ka absorbance no 260nm/280nm ʻaʻole pono e emi iho ma mua o 1.8. ʻOiai e hoʻohana ʻia ka lōʻihi nalu ma waena o 230nm a me 320nm e ʻike i nā haumia.
Ma kahi laʻana, ʻike ʻia nā paʻakai chaotropic a me nā mea hoʻohui ʻē aʻe ma 230nm absorbance rate. ʻOiai ʻike ʻia ka turbidity i nā laʻana DNA a hōʻoia ʻia ma ka helu absorbance o 320nm.
Hōʻalo i ka hoʻouka ʻana i nā pā PCR me ka huahana
E like me ka makemake o ka holo ʻana i nā huahana he nui i ka manawa hoʻokahi, ʻo ia ka hopena i ka hoʻohaumia ʻana o nā papa PCR.
ʻO ka hoʻouka nui ʻana i nā papa PCR me nā huahana like ʻole e pau a paʻakikī loa ka ʻike ʻana i nā laʻana.
E mālama i nā moʻolelo o Aliquot PCR Reagents
Hiki ke hoʻopōʻino i ka PCR reagents, enzymes a me ka DNTP ma o ka recrystallization ka hoʻomau ʻana a me ka hoʻohana pinepine ʻana i ka aliquot.
E ho'āʻo mau e nānā i ka helu o nā aliquot i hoʻohana ʻia i ka wā e hoʻomākaukau ana i nā laʻana e nānā ʻia.
ʻOi aku ka maikaʻi o ka LIMS maikaʻi no ka mālama ʻana i ka waihona a me ka nui o nā reagents a me nā laʻana i hoʻoheheʻe ʻia a hoʻoheheʻe ʻia.
E koho i ka Mahanahana Annealing Loa.
ʻO ke koho ʻana a me ka hoʻohana ʻana i ka wela annealing hewa kekahi ala ʻē aʻe i loaʻa i nā hopena PCR he hewa.
I kekahi manawa, ʻaʻole hele ka pane e like me ka mea i hoʻolālā ʻia. Makemake ʻia e hoʻemi i ka mahana annealing i mea e maʻalahi ai ka hopena kūleʻa.
Eia nō naʻe, ʻo ka hoʻohaʻahaʻa ʻana i ka mahana e hoʻonui i ka manawa o nā hopena maikaʻi ʻole a me nā hiʻohiʻona dimer primer.
He mea koʻikoʻi ka hōʻoia ʻana i ka nānā ʻana o ke kaʻe heheʻe i ka wā e hoʻohana ai i nā pā PCR no ka mea he hōʻailona maikaʻi ia o ke koho ʻana i ka mahana annealing kūpono.
ʻO nā lako polokalamu hoʻolālā kumu mua me ka hoʻolālā ʻana, ka hāʻawi ʻana i ka mahana annealing kūpono me ka hōʻemi pololei ʻana i ka hewa i nā papa PCR.
Pono ʻoe i kahi pā PCR kiʻekiʻe?
Inā ʻoe e noʻonoʻo nei i kahi e loaʻa ai kahi mea hana hilinaʻi oNā papa PCR. Mai huli hou no ka mea aia ʻoe ma kahi kūpono.
E ʻoluʻolukaomi maanei e hoʻokaʻaʻike mai iā mākouno nā huahana kiʻekiʻe a me ka lawelawe ma ke kumukūʻai ʻaʻole e uhaʻi i ka panakō.
Ka manawa hoʻouna: ʻOkakopa-30-2021