Daidaitawar matakai sun haɗa da haɓakawa da haɓakawa na gaba da daidaitawa, ba da damar aiki mafi kyau na dogon lokaci - mai zaman kansa daga mai amfani. Daidaitawa yana tabbatar da sakamako mai inganci, da sake haifuwa da kwatankwacinsu.
Makasudin (classic) PCR shine samar da ingantaccen abin dogaro da sakamako mai iya sakewa. Ga wasu aikace-aikace, yawan amfanin ƙasaFarashin PCRya dace kuma. Don waɗannan halayen, dole ne a kula don tabbatar da cewa samfurori ba su daidaita ba kuma cewa aikin PCR ya kasance karko. Musamman, wannan yana fassara zuwa rage ƙaddamar da gurɓataccen abu wanda zai iya haifar da sakamako mara kyau na ƙarya ko na ƙarya ko ma ya hana amsawar PCR. Bugu da ƙari kuma, yanayin halayen ya kamata ya zama iri ɗaya kamar yadda zai yiwu ga kowane samfurin mutum a cikin gudu kuma a iya canjawa wuri zuwa halayen da suka biyo baya (na hanya ɗaya). Wannan yana nufin abubuwan da ke tattare da halayen da kuma nau'in sarrafa zafin jiki a cikin mai hawan keke. Kuskuren mai amfani, ba shakka, ya kamata a kauce masa gwargwadon yiwuwa.
A ƙasa, za mu nuna ƙalubalen da ake fuskanta yayin shirye-shiryen da kuma duk lokacin tafiyar da PCR - da kuma hanyoyin magance matsalolin da ke wanzu dangane da kayan aiki da abubuwan da ake amfani da su don daidaita ayyukan PCR.
Shirye-shiryen amsawa
Rarraba abubuwan da suka shafi amsawa cikin PCR-vesels, ko faranti, bi da bi, sun ƙunshi ƙalubale da yawa waɗanda dole ne a shawo kansu:
Yanayin amsawa
Matsakaicin daidaitaccen sashi na daidaitattun abubuwan da aka gyara yana da mahimmanci yayin da ake neman mafi yawan yanayin halayen da zai yiwu. Bugu da ƙari, fasaha mai kyau na pipetting, zabar kayan aiki mai kyau yana da mahimmanci. PCR master-mixes akai-akai yana ƙunshe da abubuwa waɗanda ke ƙara danko ko haifar da kumfa. A lokacin aikin bututun, waɗannan suna haifar da jikewa mai yawa napipette tukwici, don haka rage daidaiton bututu. Yin amfani da tsarin rarraba kai tsaye ko madadin shawarwarin pipette waɗanda ba su da sauƙi ga jika na iya inganta daidaito da daidaito na tsarin pipetting.
gurɓatawa
A lokacin aikin rarraba, ana samar da iska mai iska wanda, idan an ba da izinin isa cikin pipette, na iya cutar da wani samfurin yayin matakin bututun na gaba. Ana iya hana wannan ta amfani da tukwici na tacewa ko tsarin ƙaura kai tsaye.
Abubuwan amfani kamartukwici, Tasoshin da faranti waɗanda ake amfani da su a cikin aikin PCR ba dole ba ne su ƙunshi abubuwa waɗanda ke lalata samfurin ko lalata sakamakon. Waɗannan sun haɗa da DNA, DNases, RNases da PCR masu hanawa, da kuma abubuwan da za su iya yuwuwa daga kayan yayin amsawar - abubuwan da aka sani da leachables.
Kuskuren mai amfani
Yawancin samfuran ana sarrafa su, mafi girman haɗarin kuskure. Yana iya faruwa cikin sauƙi cewa ana bututun samfurin a cikin jirgin da bai dace ba ko rijiya mara kyau. Ana iya rage wannan haɗari da yawa ta hanyar sanya alama a cikin rijiyoyin cikin sauƙi. Ta hanyar aiki da kai na matakan rarrabawa, “abincin ɗan adam”, watau, kurakurai da bambance-bambancen masu amfani, an rage su, don haka haɓaka haɓakawa, musamman a yanayin ƙaramar ƙaramar amsawa. Wannan yana buƙatar faranti isassun kwanciyar hankali da za a yi aiki a wurin aiki. Haɗe-haɗen barcode suna ba da ƙarin damar karanta na'ura, wanda ke sauƙaƙe samfurin bin diddigin gabaɗayan tsari.
Shirye-shirye na thermocycler
Shirya kayan aiki zai iya tabbatar da cewa yana cin lokaci da kuma kuskure. Daban-daban na PCR thermal cycler fasali suna aiki tare don sauƙaƙe wannan matakin kuma, mafi mahimmanci, don tabbatar da shi lafiya:
Sauƙaƙan aiki da kyakkyawan jagorar mai amfani sune tushen ingantaccen shirye-shirye. Gina kan wannan tushe, sarrafa mai amfani da kalmar sirri zai hana wasu masu amfani su canza nasu shirye-shiryen. Idan ana amfani da masu hawan keke da yawa (na iri ɗaya), yana da fa'ida idan ana iya canja wurin shirin kai tsaye daga wannan kayan aiki zuwa wani ta USB ko haɗin kai. Software na kwamfuta yana ba da damar gudanarwa na tsakiya da amintattu na shirye-shirye, haƙƙin mai amfani da takardu akan kwamfuta.
Farashin PCR
A lokacin gudu, DNA yana ƙaruwa a cikin jirgin ruwa mai amsawa, inda kowane samfurin ya kamata a sanya shi cikin yanayi iri ɗaya. Abubuwan da ke biyowa sun dace da tsarin:
Kula da yanayin zafi
Kyakkyawan daidaito a cikin kula da zafin jiki da kamanni na toshe cycler sune tushen ko da yanayin yanayin zafi na duk samfuran. Babban ingancin dumama da sanyaya abubuwa (peltier element), da kuma hanyar da aka haɗa waɗannan zuwa toshe, sune abubuwan yanke hukunci waɗanda zasu ƙayyade haɗarin bambance-bambancen yanayin zafi da aka sani da "tasirin gefen"
Evaporation
Matsakaicin abubuwan da ke tattare da halayen mutum bai kamata ya canza ba a tsawon lokacin da abin ya faru saboda ƙazantar. In ba haka ba, yana yiwuwa kadanFarashin PCRana iya haifarwa, ko babu komai. Don haka yana da mahimmanci don rage ƙanƙara ta hanyar tabbatar da hatimi mai tsaro. A wannan yanayin, murfi mai zafi na thermocycler da hatimin jirgin suna aiki hannu da hannu. Akwai zaɓuɓɓukan rufewa daban-daban donPCR faranti (haɗi: Rubutun Rubutun), ta inda mafi kyawun hatimi ke samuwa ta hanyar rufewar zafi. Sauran rufewa na iya zama masu dacewa, muddin za'a iya daidaita matsa lamba na murfin mai hawan keke zuwa hatimin da aka zaɓa.
Daidaitaccen tsari yana cikin wurin don kiyaye ingantattun sakamakon da ake iya sakewa a cikin dogon lokaci. Wannan ya haɗa da kiyaye kayan aiki na yau da kullun don tabbatar da cewa koyaushe yana cikin yanayin aiki mai kyau. Duk abubuwan da ake amfani da su yakamata su kasance masu inganci akai-akai a cikin duk kuri'a da aka samar, kuma dole ne a tabbatar da amincin kasancewarsu.
Lokacin aikawa: Nuwamba-29-2022