Ko da yake a ka'idar, kwayoyin halitta ɗaya na samfurin zai isa, yawancin adadin DNA ana amfani da su don PCR na yau da kullum, misali, har zuwa 1 μg na DNA na dabbobi masu shayarwa kuma kadan kamar 1 pg na DNA na plasmid. Mafi kyawun adadin ya dogara da yawa akan adadin kwafin jerin abubuwan da aka yi niyya, da kuma akan sarkar sa.
Idan aka yi amfani da ɗan ƙaramin samfuri, za a buƙaci madaidaicin haɓakar adadin ƙarawa don samun isassun adadin samfur. A Taq polymerase wanda ake amfani da shi don yawancin gwaje-gwaje na PCR ba ya ƙunshi aikin gyarawa (3'-5' aikin exonuclease); don haka, kurakurai da ke faruwa yayin haɓakawa ba za a iya gyara su ba. Mafi girman adadin hawan keke, mafi girman haɓakar samfurin da ba daidai ba zai kasance. Idan, a gefe guda, adadin samfuri ya yi yawa, yuwuwar ƙaddamar da abubuwan da aka gyara zuwa wasu (ba ɗari bisa ɗari na kyauta ba) za su ƙaru, da kuma samar da dimers na share fage, wanda zai haifar da haɓakawa. by-samfurori. A yawancin lokuta, DNA ta keɓe daga al'adun tantanin halitta ko daga ƙananan ƙwayoyin cuta kuma daga baya ana amfani da su azaman samfuri na PCR. Bayan tsarkakewa, ya zama dole don ƙayyade ƙaddamarwar DNA don samun damar ayyana ƙarar da ake buƙata don saitin PCR. Duk da yake agarose gel electrophoresis na iya yin aiki don samar da kimantawa, wannan hanyar ba ta dace ba. UV-Vis spectrophotometry an kafa shi azaman ma'aunin zinare don ƙididdige adadin acid nucleic; wannan kai tsaye kuma sabili da haka sauƙi da sauri hanya matakan ɗaukar samfurin a 260 nm, kuma ana ƙididdige ƙaddamarwa tare da taimakon wani abu mai juyawa.
Idan maida hankali na DNA yayi ƙasa sosai, duk da haka (<1 µg/mL dsDNA), ko kuma idan ya gurɓata da abubuwan da suma suna sha a cikin kewayon 260 nm (misali RNA, protein, salts), wannan hanyar za ta kai ga iyakoki. A cikin yanayin ƙarancin ƙima, karatun ba da daɗewa ba za su zama kuskure da za a iya amfani da su, kuma gurɓatawa za su haifar da (wani lokaci mai girma) ƙima na ainihin ƙimar. A wannan yanayin, ƙididdigewa ta amfani da fluorescence na iya gabatar da madadin. Wannan dabarar ta dogara ne akan amfani da rini mai kyalli wanda ke ɗaure musamman da dsDNA hadaddun da ke tattare da acid nucleic da rini ne kaɗai hasken ke jin daɗi, kuma daga baya za ta fitar da haske na ɗan tsayin tsayin tsayi. Anan, ƙarfin siginar kyalli ya yi daidai da adadin DNA, kuma don ƙayyade ƙaddamarwa ana ƙididdige shi dangane da daidaitaccen lanƙwasa. Amfanin wannan hanyar yana dogara ne akan ƙayyadaddun haɗin gwiwa, wanda ke keɓance tasirin waje da aka gabatar ta hanyar gurɓatawa, da kuma sakamakon da zai iya gano ƙananan adadin DNA. Dacewar kowane hanya ya dogara ne akan samfurin tattarawa da tsabta; a lokuta da yawa yana iya ma yana da kyau a yi amfani da hanyoyin biyu a layi daya.
Lokacin aikawa: Nuwamba-30-2022