પીસીઆર મિશ્રણને પાઇપિંગ કરતી વખતે શું ધ્યાનમાં લેવું જોઈએ?

સફળ એમ્પ્લીફિકેશન પ્રતિક્રિયાઓ માટે, દરેક તૈયારીમાં વ્યક્તિગત પ્રતિક્રિયા ઘટકો યોગ્ય સાંદ્રતામાં હાજર હોય તે જરૂરી છે. વધુમાં, તે મહત્વનું છે કે કોઈ દૂષણ થતું નથી.

ખાસ કરીને જ્યારે ઘણી પ્રતિક્રિયાઓ સેટ-અપ કરવાની હોય, ત્યારે દરેક જહાજમાં દરેક રીએજન્ટને અલગથી પાઈપ કરવાને બદલે કહેવાતા માસ્ટર મિક્સ તૈયાર કરવા માટે તે સ્થાપિત કરવામાં આવ્યું છે. પૂર્વ-રૂપરેખાંકિત મિશ્રણો વ્યવસાયિક રીતે ઉપલબ્ધ છે, જેમાં માત્ર નમૂના-વિશિષ્ટ ઘટકો (પ્રાઈમર) અને પાણી ઉમેરવામાં આવે છે. વૈકલ્પિક રીતે, માસ્ટર મિશ્રણ જાતે તૈયાર કરી શકાય છે. બંને પ્રકારોમાં, મિશ્રણને નમૂના વિના દરેક પીસીઆર જહાજમાં વિતરિત કરવામાં આવે છે અને વ્યક્તિગત ડીએનએ નમૂનાને અંતે અલગથી ઉમેરવામાં આવે છે.

માસ્ટર મિક્સનો ઉપયોગ કરવાના ઘણા ફાયદા છે: પ્રથમ, સિંગલ પાઇપિંગ સ્ટેપ્સની સંખ્યામાં ઘટાડો થાય છે. આ રીતે, પાઇપિંગ દરમિયાન વપરાશકર્તાની ભૂલોનું જોખમ અને દૂષિત થવાનું જોખમ બંને ઘટાડવામાં આવે છે અને, અલબત્ત, સમય બચે છે. સૈદ્ધાંતિક રીતે, પાઇપિંગની ચોકસાઈ પણ વધારે છે, કારણ કે મોટી માત્રામાં ડોઝ કરવામાં આવે છે. પાઇપેટ્સના તકનીકી ડેટાને તપાસતી વખતે આ સમજવું સરળ છે: ડોઝનું પ્રમાણ જેટલું નાનું છે, વિચલનો વધુ હોઈ શકે છે. હકીકત એ છે કે બધી તૈયારીઓ એક જ વાસણમાંથી આવે છે તે એકરૂપતા પર હકારાત્મક અસર કરે છે (જો સારી રીતે મિશ્રિત હોય તો). આ પ્રયોગોની પ્રજનનક્ષમતામાં પણ સુધારો કરે છે.

મુખ્ય મિશ્રણ તૈયાર કરતી વખતે, ઓછામાં ઓછું 10% વધારાનું વોલ્યુમ ઉમેરવું જોઈએ (દા.ત. જો 10 તૈયારીઓ જરૂરી હોય તો, 11ના આધારે ગણતરી કરો), જેથી છેલ્લું પાત્ર પણ યોગ્ય રીતે ભરાઈ જાય. આ રીતે, (થોડી) પાઇપિંગની અચોક્કસતા, અને ડીટરજન્ટ-સમાવતી ઉકેલો ડોઝ કરતી વખતે નમૂનાના નુકસાનની અસરને વળતર આપી શકાય છે. ડિટર્જન્ટ્સ એન્ઝાઇમ સોલ્યુશનમાં સમાયેલ છે જેમ કે પોલિમરેસીસ અને માસ્ટર મિક્સ, જે સામાન્યની અંદરની સપાટી પર ફીણ અને અવશેષોનું નિર્માણ કરે છે.પિપેટ ટીપ્સ.

એપ્લિકેશન અને વિતરિત કરવાના પ્રવાહીના પ્રકાર પર આધાર રાખીને, યોગ્ય પાઇપિંગ તકનીક (1) પસંદ કરવી જોઈએ અને યોગ્ય સાધનો પસંદ કરવા જોઈએ. ડીટરજન્ટ ધરાવતા સોલ્યુશન્સ માટે, એર-કુશન પાઈપેટના વિકલ્પ તરીકે ડાયરેક્ટ ડિસ્પ્લેસમેન્ટ સિસ્ટમ અથવા કહેવાતા "લો રીટેન્શન" પાઈપેટ ટીપ્સની ભલામણ કરવામાં આવે છે. ની અસરACE PIPETTE ટિપખાસ કરીને હાઇડ્રોફોબિક સપાટી પર આધારિત છે. ડિટર્જન્ટ ધરાવતા પ્રવાહી અંદર અને બહાર અવશેષો છોડતા નથી, જેથી ઉકેલની ખોટ ઘટાડી શકાય.

બધા ઘટકોની ચોક્કસ માત્રા ઉપરાંત, તે પણ મહત્વપૂર્ણ છે કે તૈયારીઓનું કોઈ દૂષણ થતું નથી. ઉચ્ચ શુદ્ધતાની ઉપભોક્તા વસ્તુઓનો ઉપયોગ કરવો પૂરતો નથી, કારણ કે એર કુશન પિપેટમાં પાઇપિંગ પ્રક્રિયા એરોસોલ્સ ઉત્પન્ન કરી શકે છે જે પીપેટમાં રહે છે. એરોસોલમાં સમાવિષ્ટ ડીએનએ નીચેના પાઇપિંગ સ્ટેપમાં એક નમૂનામાંથી બીજા નમૂનામાં સ્થાનાંતરિત થઈ શકે છે અને આમ દૂષણ તરફ દોરી જાય છે. ઉપર દર્શાવેલ ડાયરેક્ટ ડિસ્પ્લેસમેન્ટ સિસ્ટમ્સ પણ આ જોખમને ઘટાડી શકે છે. એર-કુશન પિપેટ્સ માટે સ્પ્લેશ, એરોસોલ્સ અને બાયોમોલેક્યુલ્સ જાળવી રાખીને પિપેટ શંકુને સુરક્ષિત કરવા માટે ફિલ્ટર ટિપ્સનો ઉપયોગ કરવો અર્થપૂર્ણ છે.