ક્રાયોવિયલ્સસામાન્ય રીતે પ્રવાહી નાઇટ્રોજનથી ભરેલા દેવારોમાં કોષ રેખાઓ અને અન્ય નિર્ણાયક જૈવિક સામગ્રીના ક્રાયોજેનિક સંગ્રહ માટે વપરાય છે.

પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં કોષોના સફળ જાળવણીમાં ઘણા તબક્કાઓ સામેલ છે. જ્યારે મૂળભૂત સિદ્ધાંત ધીમા ફ્રીઝનો છે, ત્યારે ઉપયોગમાં લેવાતી ચોક્કસ તકનીક કોષના પ્રકાર અને ઉપયોગમાં લેવાતા ક્રાયોપ્રોટેક્ટન્ટ પર આધારિત છે. આવા નીચા તાપમાને કોષોને સંગ્રહિત કરતી વખતે ધ્યાનમાં લેવા માટે ઘણી સલામતી બાબતો અને શ્રેષ્ઠ પ્રયાસો છે.

આ પોસ્ટનો ઉદ્દેશ્ય પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં ક્રિઓવિયલ્સ કેવી રીતે સંગ્રહિત થાય છે તેની ઝાંખી આપવાનો છે.

Cryovials શું છે

ક્રાયોવિયલ એ નાની, કેપ કરેલી શીશીઓ છે જે અત્યંત નીચા તાપમાને પ્રવાહીના નમૂનાઓને સંગ્રહિત કરવા માટે રચાયેલ છે. તેઓ સુનિશ્ચિત કરે છે કે ક્રાયોપ્રોટેક્ટન્ટમાં સાચવેલ કોષો પ્રવાહી નાઇટ્રોજન સાથે સીધા સંપર્કમાં આવતા નથી, જે પ્રવાહી નાઇટ્રોજનની અત્યંત ઠંડકની અસરથી લાભ મેળવતા હોવા છતાં સેલ્યુલર ફ્રેક્ચરનું જોખમ ઘટાડે છે.

શીશીઓ સામાન્ય રીતે વોલ્યુમ અને ડિઝાઇનની શ્રેણીમાં ઉપલબ્ધ હોય છે - તે સપાટ અથવા ગોળાકાર બોટમ્સ સાથે આંતરિક અથવા બાહ્ય રીતે થ્રેડેડ હોઈ શકે છે. જંતુરહિત અને બિન-જંતુરહિત ફોર્મેટ પણ ઉપલબ્ધ છે.

કોણ વાપરે છેસાયરોવિયલ્સકોષોને પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં સંગ્રહિત કરવા

NHS અને ખાનગી પ્રયોગશાળાઓની શ્રેણી, તેમજ કોર્ડ બ્લડ બેંકિંગ, એપિથેલિયલ સેલ બાયોલોજી, ઇમ્યુનોલોજી અને સ્ટેમ સેલ બાયોલોજીમાં વિશેષતા ધરાવતી સંશોધન સંસ્થાઓ કોષોને ક્રાયોપ્રીઝર્વ કરવા માટે ક્રિઓવિયલનો ઉપયોગ કરે છે.

આ રીતે સાચવેલ કોષોમાં B અને T કોષો, CHO કોષો, હેમેટોપોએટીક સ્ટેમ અને પ્રોજેનિટર કોષો, હાઇબ્રિડોમાસ, આંતરડાના કોષો, મેક્રોફેજેસ, મેસેનચીમલ સ્ટેમ અને પ્રોજેનિટર કોષો, મોનોસાઇટ્સ, માયલોમા, NK કોષો અને પ્લુરીપોટેન્ટ સ્ટેમ સેલનો સમાવેશ થાય છે.

લિક્વિડ નાઇટ્રોજનમાં ક્રાયોવિયલ્સને કેવી રીતે સ્ટોર કરવું તેની ઝાંખી

Cryopreservation એ એવી પ્રક્રિયા છે જે કોષો અને અન્ય જૈવિક રચનાઓને ખૂબ નીચા તાપમાને ઠંડુ કરીને સાચવે છે. કોષની કાર્યક્ષમતા ગુમાવ્યા વિના કોષોને વર્ષો સુધી પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં સંગ્રહિત કરી શકાય છે. આ કાર્યરત પ્રક્રિયાઓની રૂપરેખા છે.

સેલ તૈયારી

નમૂનાઓ તૈયાર કરવાની ચોક્કસ પદ્ધતિ કોષના પ્રકાર પર આધાર રાખીને બદલાઈ શકે છે, પરંતુ સામાન્ય રીતે, કોષોથી ભરપૂર પેલેટ વિકસાવવા માટે કોષોને એકત્રિત કરવામાં આવે છે અને સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવે છે. આ પેલેટને પછી ક્રાયોપ્રોટેક્ટન્ટ અથવા ક્રાયોપ્રિઝર્વેશન માધ્યમ સાથે મિશ્રિત સુપરનેટન્ટમાં ફરીથી સસ્પેન્ડ કરવામાં આવે છે.

ક્રિઓપ્રીઝર્વેશન માધ્યમ

આ માધ્યમનો ઉપયોગ નીચા-તાપમાનના વાતાવરણમાં કોષોને સાચવવા માટે કરવામાં આવે છે જેમાં તેઓ ઇન્ટ્રા અને એક્સ્ટ્રા સેલ્યુલર સ્ફટિકોના નિર્માણને અવરોધે છે અને તેથી કોષ મૃત્યુ પામે છે. તેમની ભૂમિકા ઠંડક, સંગ્રહ અને પીગળવાની પ્રક્રિયાઓ દરમિયાન કોષો અને પેશીઓ માટે સલામત, રક્ષણાત્મક વાતાવરણ પ્રદાન કરવાની છે.

તાજા ફ્રોઝન પ્લાઝ્મા (FFP), હેપરિનાઇઝ્ડ પ્લાઝમાલાઇટ સોલ્યુશન અથવા સીરમ-ફ્રી, એનિમલ કમ્પોનન્ટ-ફ્રી સોલ્યુશન્સ જેવા માધ્યમને ક્રાયોપ્રોટેક્ટન્ટ્સ જેમ કે ડાયમિથાઇલ સલ્ફોક્સાઇડ (DMSO) અથવા ગ્લિસરોલ સાથે મિશ્રિત કરવામાં આવે છે.

રિ-લિક્વિફાઇડ સેમ્પલ પેલેટને પોલીપ્રોપીલીન ક્રાયોવિયલ્સમાં અલગ કરવામાં આવે છે જેમ કેસુઝોઉ એસ બાયોમેડિકલ કંપની ક્રાયોજેનિક સ્ટોરેજ શીશીઓ.

ક્રિઓવિયલ્સને ઓવરફિલ ન કરવું મહત્વપૂર્ણ છે કારણ કે આ ક્રેકીંગનું જોખમ અને સમાવિષ્ટોના સંભવિત પ્રકાશનમાં વધારો કરશે (1).

નિયંત્રિત ફ્રીઝ રેટ

સામાન્ય રીતે, કોશિકાઓના સફળ ક્રાયોપ્રિઝર્વેશન માટે ધીમા નિયંત્રિત ફ્રીઝ રેટનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે.

નમૂનાઓને ક્રાયોજેનિક શીશીઓમાં અલગ કર્યા પછી, તેને ભીના બરફ પર અથવા 4℃ રેફ્રિજરેટરમાં મૂકવામાં આવે છે અને 5 મિનિટમાં ઠંડું કરવાની પ્રક્રિયા શરૂ કરવામાં આવે છે. સામાન્ય માર્ગદર્શિકા તરીકે, કોષોને -1 થી -3 પ્રતિ મિનિટના દરે ઠંડુ કરવામાં આવે છે (2). આ પ્રોગ્રામેબલ કૂલરનો ઉપયોગ કરીને અથવા -70°C થી -90°C નિયંત્રિત રેટ ફ્રીઝરમાં મૂકવામાં આવેલા ઇન્સ્યુલેટેડ બોક્સમાં શીશીઓ મૂકીને પ્રાપ્ત થાય છે.

લિક્વિડ નાઇટ્રોજનમાં ટ્રાન્સફર કરો

સ્થિર ક્રાયોજેનિક શીશીઓ પછી અનિશ્ચિત સમયગાળા માટે પ્રવાહી નાઇટ્રોજન ટાંકીમાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવે છે જો -135 ℃ કરતા ઓછું તાપમાન જાળવવામાં આવે.

આ અલ્ટ્રા-નીચા તાપમાન પ્રવાહી અથવા બાષ્પ તબક્કાના નાઇટ્રોજનમાં નિમજ્જન દ્વારા મેળવી શકાય છે.

પ્રવાહી કે બાષ્પ તબક્કો?

પ્રવાહી તબક્કામાં નાઇટ્રોજનનો સંગ્રહ સંપૂર્ણ સુસંગતતા સાથે ઠંડા તાપમાનને જાળવવા માટે જાણીતો છે, પરંતુ ઘણીવાર નીચેના કારણોસર તેની ભલામણ કરવામાં આવતી નથી:

• પ્રવાહી નાઇટ્રોજનના મોટા જથ્થા (ઊંડાઈ)ની જરૂરિયાત જે સંભવિત જોખમ છે. આના કારણે બર્ન્સ અથવા ગૂંગળામણ એ વાસ્તવિક જોખમ છે.
• એસ્પરગિલસ, હેપ બી જેવા ચેપી એજન્ટો દ્વારા ક્રોસ-પ્રદૂષણના દસ્તાવેજી કિસ્સાઓ અને પ્રવાહી નાઇટ્રોજન માધ્યમ દ્વારા વાયરલ ફેલાવો (2,3)
• નિમજ્જન દરમિયાન શીશીઓમાં પ્રવાહી નાઇટ્રોજન લીક થવાની સંભાવના. જ્યારે સંગ્રહમાંથી દૂર કરવામાં આવે છે અને ઓરડાના તાપમાને ગરમ કરવામાં આવે છે, ત્યારે નાઇટ્રોજન ઝડપથી વિસ્તરે છે. પરિણામે, જ્યારે પ્રવાહી નાઇટ્રોજન સંગ્રહમાંથી દૂર કરવામાં આવે ત્યારે શીશી વિખેરાઈ શકે છે, ઉડતા ભંગાર અને સમાવિષ્ટોના સંપર્કમાં બંનેથી જોખમ ઊભું કરે છે (1, 4).

આ કારણોસર, અલ્ટ્રા-નીચા તાપમાનનો સંગ્રહ સામાન્ય રીતે બાષ્પ તબક્કાના નાઇટ્રોજનમાં થાય છે. જ્યારે નમૂનાઓ પ્રવાહી તબક્કામાં સંગ્રહિત હોવા જોઈએ, ત્યારે વિશિષ્ટ ક્રાયોફ્લેક્સ ટ્યુબિંગનો ઉપયોગ કરવો જોઈએ.

વરાળના તબક્કાનું નુકસાન એ છે કે વર્ટિકલ તાપમાન ઢાળ આવી શકે છે જેના પરિણામે -135℃ અને -190℃ વચ્ચે તાપમાનની વધઘટ થાય છે. આનાથી પ્રવાહી નાઇટ્રોજનના સ્તરો અને તાપમાનની ભિન્નતાઓનું સાવચેત અને ખંતપૂર્વક નિરીક્ષણ જરૂરી છે (5).

ઘણા ઉત્પાદકો ભલામણ કરે છે કે ક્રિઓવિયલ્સ -135℃ સુધીના સંગ્રહ માટે અથવા ફક્ત વરાળના તબક્કામાં ઉપયોગ માટે યોગ્ય છે.

તમારા ક્રિઓપ્રીઝર્વ્ડ કોષોને પીગળવું

પીગળવાની પ્રક્રિયા સ્થિર સંસ્કૃતિ માટે તણાવપૂર્ણ છે, અને કોષોની શ્રેષ્ઠ કાર્યક્ષમતા, પુનઃપ્રાપ્તિ અને કાર્યક્ષમતાને સુનિશ્ચિત કરવા માટે યોગ્ય હેન્ડલિંગ અને તકનીકની જરૂર છે. ચોક્કસ પીગળવાના પ્રોટોકોલ ચોક્કસ કોષના પ્રકારો પર આધાર રાખે છે. જો કે, ઝડપી પીગળવાનું પ્રમાણભૂત માનવામાં આવે છે:

• સેલ્યુલર પુનઃપ્રાપ્તિ પર કોઈપણ અસર ઘટાડો
• ફ્રીઝિંગ મીડિયામાં હાજર દ્રાવ્યોના સંપર્કમાં સમય ઘટાડવામાં મદદ કરો
• બરફના પુનઃસ્થાપન દ્વારા કોઈપણ નુકસાનને ઓછું કરો

પાણીના સ્નાન, મણકાના સ્નાન અથવા વિશિષ્ટ સ્વયંસંચાલિત સાધનોનો ઉપયોગ સામાન્ય રીતે નમૂનાઓ ઓગળવા માટે થાય છે.

મોટેભાગે 1 સેલ લાઇનને 1-2 મિનિટ માટે એક સમયે પીગળવામાં આવે છે, 37 ℃ પાણીના સ્નાનમાં હળવેથી ઘૂમરાતો હોય છે જ્યાં સુધી શીશીમાં થોડો બરફ બચે તે પહેલા તેને પહેલાથી ગરમ વૃદ્ધિ માધ્યમમાં ધોવાઇ જાય તે પહેલાં.

કેટલાક કોષો જેમ કે સ્તન્ય પ્રાણીઓમાં ગર્ભમાં રહેલા બચ્ચાની રક્ષા માટેનું આચ્છાદન, તેમના અસ્તિત્વ માટે ધીમી ગરમી જરૂરી છે.

કોષો હવે સેલ કલ્ચર, સેલ આઇસોલેશન અથવા હિમેટોપોએટીક સ્ટેમ સેલ્સના કિસ્સામાં તૈયાર છે - માયલોએબ્લેટિવ થેરાપી પહેલાં દાતા સ્ટેમ કોશિકાઓની અખંડિતતાની ખાતરી આપવા માટે સદ્ધરતા અભ્યાસ.

કલ્ચરમાં પ્લેટિંગ માટે કોષની સાંદ્રતા નક્કી કરવા માટે કોષની ગણતરી કરવા માટે ઉપયોગમાં લેવાતા પહેલાથી ધોવાઇ ગયેલા નમૂનાના નાના અલિકોટ્સ લેવાનું સામાન્ય પ્રથા છે. પછી તમે સેલ આઇસોલેશન પ્રક્રિયાઓના પરિણામોનું મૂલ્યાંકન કરી શકો છો અને સેલ સદ્ધરતા નક્કી કરી શકો છો.

ક્રાયોવિયલ્સના સંગ્રહ માટે શ્રેષ્ઠ પ્રયાસો

ક્રિઓવિયલ્સમાં સંગ્રહિત નમૂનાઓનું સફળ ક્રિઓપ્રીઝર્વેશન પ્રોટોકોલમાં યોગ્ય સંગ્રહ અને રેકોર્ડ રાખવા સહિત ઘણા ઘટકો પર આધારિત છે.

• સ્ટોરેજ સ્થાનો વચ્ચે કોષોને વિભાજિત કરો- જો વોલ્યુમ પરવાનગી આપે છે, તો શીશીઓ વચ્ચે કોષોને વિભાજિત કરો અને સાધનોની નિષ્ફળતાને કારણે નમૂના ગુમાવવાનું જોખમ ઘટાડવા માટે તેમને અલગ જગ્યાએ સંગ્રહિત કરો.
• ક્રોસ-પ્રદૂષણ અટકાવો- અનુગામી ઉપયોગ પહેલાં સિંગલ-યુઝ જંતુરહિત ક્રાયોજેનિક શીશીઓ અથવા ઑટોક્લેવ પસંદ કરો
• તમારા કોષો માટે યોગ્ય કદની શીશીઓનો ઉપયોગ કરો- શીશીઓ 1 અને 5mls વચ્ચેની શ્રેણીમાં આવે છે. ક્રેકીંગના જોખમને ઘટાડવા માટે શીશીઓને ઓવરફિલિંગ કરવાનું ટાળો.
• આંતરિક અથવા બાહ્ય રીતે થ્રેડેડ ક્રાયોજેનિક શીશીઓ પસંદ કરો- કેટલીક યુનિવર્સિટીઓ દ્વારા સલામતીનાં પગલાં માટે આંતરિક રીતે થ્રેડેડ શીશીઓની ભલામણ કરવામાં આવે છે - તે ભરતી વખતે અથવા જ્યારે પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં સંગ્રહિત કરવામાં આવે ત્યારે તે દૂષણને પણ અટકાવી શકે છે.
• લિકેજ અટકાવો- લીક અને દૂષણને રોકવા માટે સ્ક્રુ-કેપ અથવા ઓ-રિંગ્સમાં મોલ્ડેડ બાય-ઇન્જેક્ટેડ સીલનો ઉપયોગ કરો.
• 2D બારકોડ અને લેબલ શીશીઓનો ઉપયોગ કરો- ટ્રેસેબિલિટી સુનિશ્ચિત કરવા માટે, મોટા લેખન ક્ષેત્રોવાળી શીશીઓ દરેક શીશીને પર્યાપ્ત લેબલ કરવામાં સક્ષમ કરે છે. 2D બારકોડ સ્ટોરેજ મેનેજમેન્ટ અને રેકોર્ડ રાખવામાં મદદ કરી શકે છે. સરળ ઓળખ માટે કલર કોડેડ કેપ્સ ઉપયોગી છે.
• પર્યાપ્ત સંગ્રહ જાળવણી- કોષો નષ્ટ ન થાય તેની ખાતરી કરવા માટે, સંગ્રહ જહાજોએ સતત તાપમાન અને પ્રવાહી નાઇટ્રોજન સ્તરનું નિરીક્ષણ કરવું જોઈએ. વપરાશકર્તાઓને ભૂલો વિશે ચેતવણી આપવા માટે એલાર્મ ફીટ કરવા જોઈએ.

સલામતી સાવચેતીઓ

આધુનિક સંશોધનમાં પ્રવાહી નાઇટ્રોજન સામાન્ય બાબત બની ગઈ છે પરંતુ જો તેનો ખોટી રીતે ઉપયોગ કરવામાં આવે તો ગંભીર ઈજા થવાનું જોખમ રહેલું છે.

પ્રવાહી નાઇટ્રોજનનું સંચાલન કરતી વખતે હિમ લાગવાથી બચવા, દાઝવા અને અન્ય પ્રતિકૂળ ઘટનાઓના જોખમને ઘટાડવા માટે યોગ્ય વ્યક્તિગત રક્ષણાત્મક સાધનો (PPE) પહેરવા જોઈએ. પહેરો

• ક્રાયોજેનિક મોજા
• લેબોરેટરી કોટ
• અસર પ્રતિરોધક સંપૂર્ણ ચહેરો ઢાલ જે ગરદનને પણ આવરી લે છે
• બંધ પગના પગરખાં
• સ્પ્લેશપ્રૂફ પ્લાસ્ટિક એપ્રોન

ગૂંગળામણના જોખમને ઘટાડવા માટે પ્રવાહી નાઇટ્રોજન રેફ્રિજરેટર્સ સારી રીતે વેન્ટિલેટેડ વિસ્તારોમાં મૂકવું જોઈએ - બહાર નીકળેલું નાઇટ્રોજન વરાળ બને છે અને વાતાવરણીય ઓક્સિજનને વિસ્થાપિત કરે છે. મોટા વોલ્યુમ સ્ટોર્સમાં ઓછી ઓક્સિજન એલાર્મ સિસ્ટમ હોવી જોઈએ.

પ્રવાહી નાઇટ્રોજનનું સંચાલન કરતી વખતે જોડીમાં કામ કરવું આદર્શ છે અને સામાન્ય કામના કલાકોની બહાર તેનો ઉપયોગ પ્રતિબંધિત હોવો જોઈએ.

તમારા વર્કફ્લોને ટેકો આપવા માટે ક્રિઓવિયલ્સ

Suzhou Ace બાયોમેડિકલ કંપની ઉત્પાદનોની વિશાળ પસંદગી પ્રદાન કરે છે જે વિવિધ પ્રકારના કોષો માટે તમારી ક્રાયોપ્રિઝર્વેશન જરૂરિયાતોને પૂર્ણ કરે છે. પોર્ટફોલિયોમાં ટ્યુબની શ્રેણી તેમજ જંતુરહિત ક્રાયોવિયલ્સની શ્રેણીનો સમાવેશ થાય છે.

અમારા ક્રિઓવિયલ્સ છે:

• લેબ સ્ક્રુ કેપ 0.5mL 1.5mL 2.0mL ક્રાયોવિયલ ક્રાયોજેનિક શીશીઓ કોનિકલ બોટમ ક્રાયોટ્યુબ ગાસ્કેટ સાથે

  ● 0.5ml,1.5ml,2.0ml સ્પષ્ટીકરણ, સ્કર્ટ સાથે અથવા સ્કર્ટ વગર
  ● શંકુ આકારની અથવા સ્વ-સ્થાયી ડિઝાઇન, જંતુરહિત અથવા બિન-જંતુરહિત બંને ઉપલબ્ધ છે
  ● સ્ક્રુ કેપ ટ્યુબ મેડિકલ ગ્રેડ પોલીપ્રોપીલીનથી બનેલી હોય છે
  ● PP ક્રાયોટ્યુબ શીશીઓ વારંવાર સ્થિર અને પીગળી શકાય છે
  ● બાહ્ય કેપ ડિઝાઇન નમૂનાની સારવાર દરમિયાન દૂષણની સંભાવનાને ઘટાડી શકે છે.
  ● સ્ક્રુ કેપ ક્રાયોજેનિક ટ્યુબ યુનિવર્સલ સ્ક્રુ થ્રેડો ઉપયોગ માટે
  ● ટ્યુબ સૌથી સામાન્ય રોટર્સને ફિટ કરે છે
  ● ક્રાયોજેનિક ટ્યુબ ઓ-રિંગ ટ્યુબ પ્રમાણભૂત 1-ઇંચ અને 2-ઇંચ, 48વેલ, 81વેલ，96વેલ અને 100વેલ ફ્રીઝર બોક્સમાં ફિટ છે
  ● 121°C સુધી ઑટોક્લેવેબલ અને -86°C સુધી ફ્રીઝેબલ

  ભાગ નં	સામગ્રી	વોલ્યુમ	CAPરંગ	PCS/બેગ	બેગ્સ/કેસ
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	કાળો, પીળો, વાદળી, લાલ, જાંબલી, સફેદ	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	કાળો, પીળો, વાદળી, લાલ, જાંબલી, સફેદ	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	કાળો, પીળો, વાદળી, લાલ, જાંબલી, સફેદ	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	કાળો, પીળો, વાદળી, લાલ, જાંબલી, સફેદ	500	10