પ્રક્રિયાઓના માનકીકરણમાં તેમના ઑપ્ટિમાઇઝેશન અને અનુગામી સ્થાપના અને સુમેળનો સમાવેશ થાય છે, જે લાંબા ગાળાની શ્રેષ્ઠ કામગીરીને મંજૂરી આપે છે - વપરાશકર્તાથી સ્વતંત્ર. માનકીકરણ ઉચ્ચ-ગુણવત્તાવાળા પરિણામો તેમજ તેમની પુનઃઉત્પાદનક્ષમતા અને તુલનાત્મકતાને સુનિશ્ચિત કરે છે.
(ક્લાસિક) પીસીઆરનું ધ્યેય વિશ્વસનીય અને પુનઃઉત્પાદન કરી શકાય તેવા પરિણામનું નિર્માણ છે. અમુક એપ્લિકેશનો માટે, ની ઉપજપીસીઆર ઉત્પાદનપણ સંબંધિત છે. આ પ્રતિક્રિયાઓ માટે, નમૂનાઓ સાથે ચેડા ન થાય અને PCR વર્કફ્લો સ્થિર રહે તેની ખાતરી કરવા માટે કાળજી લેવી આવશ્યક છે. ખાસ કરીને, આ દૂષણોની રજૂઆતને ઘટાડવામાં અનુવાદ કરે છે જે ખોટા હકારાત્મક અથવા ખોટા નકારાત્મક પરિણામો તરફ દોરી શકે છે અથવા તો PCR પ્રતિક્રિયાને અટકાવી શકે છે. વધુમાં, એક રનની અંદર પ્રત્યેક વ્યક્તિગત નમૂના માટે પ્રતિક્રિયાની સ્થિતિ શક્ય તેટલી સમાન હોવી જોઈએ અને અનુગામી પ્રતિક્રિયાઓ (સમાન પદ્ધતિની) માટે ટ્રાન્સફર કરી શકાય તેવી પણ હોવી જોઈએ. આ પ્રતિક્રિયાઓની રચના તેમજ સાયકલમાં તાપમાન નિયંત્રણના પ્રકારનો સંદર્ભ આપે છે. વપરાશકર્તાની ભૂલો, અલબત્ત, શક્ય તેટલી ટાળવી જોઈએ.
નીચે, અમે પીસીઆરની તૈયારી દરમિયાન અને સમગ્ર દોડ દરમિયાન જે પડકારોનો સામનો કરવો પડે છે તે દર્શાવીશું - અને પીસીઆર વર્કફ્લોના માનકીકરણ માટે ઉપયોગમાં લેવાતા સાધનો અને ઉપભોજ્ય વસ્તુઓના સંદર્ભમાં અસ્તિત્વમાં રહેલા ઉકેલો માટેના અભિગમો.
પ્રતિક્રિયા તૈયારી
અનુક્રમે પીસીઆર-વાહિનીઓ અથવા પ્લેટોમાં પ્રતિક્રિયા ઘટકોના વિતરણમાં બહુવિધ પડકારોનો સમાવેશ થાય છે જેને દૂર કરવા આવશ્યક છે:
પ્રતિક્રિયા શરતો
શક્ય તેટલી સમાન પ્રતિક્રિયા પરિસ્થિતિઓ માટે લક્ષ્ય રાખતી વખતે વ્યક્તિગત ઘટકોની ચોક્કસ અને ચોક્કસ માત્રા અનિવાર્ય છે. સારી પાઇપિંગ તકનીક ઉપરાંત, યોગ્ય સાધન પસંદ કરવું મહત્વપૂર્ણ છે. પીસીઆર માસ્ટર-મિક્સ્સમાં વારંવાર એવા પદાર્થો હોય છે જે સ્નિગ્ધતા વધારે છે અથવા ફીણ પેદા કરે છે. પાઇપિંગ પ્રક્રિયા દરમિયાન, તે નોંધપાત્ર રીતે ભીનાશ તરફ દોરી જાય છેપિપેટ ટીપ્સ, આમ પાઇપિંગની ચોકસાઈ ઘટાડે છે. ડાયરેક્ટ ડિસ્પેન્સિંગ સિસ્ટમ્સ અથવા વૈકલ્પિક પાઈપેટ ટિપ્સનો ઉપયોગ જે ભીનાશની ઓછી સંભાવના ધરાવે છે, તે પાઇપિંગ પ્રક્રિયાની ચોકસાઈ અને ચોકસાઈને સુધારી શકે છે.
દૂષણો
ડિસ્પેન્સિંગ પ્રક્રિયા દરમિયાન, એરોસોલ્સ ઉત્પન્ન થાય છે, જેને જો પાઈપેટની અંદર સુધી પહોંચવાની મંજૂરી આપવામાં આવે તો, આગામી પાઈપિંગ સ્ટેપ દરમિયાન અન્ય નમૂનાને સંભવિત રીતે દૂષિત કરી શકે છે. આને ફિલ્ટર ટીપ્સ અથવા ડાયરેક્ટ ડિસ્પ્લેસમેન્ટ સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને અટકાવી શકાય છે.
ઉપભોજ્ય વસ્તુઓ જેમ કેટીપ્સ, PCR વર્કફ્લોમાં ઉપયોગમાં લેવાતા જહાજો અને પ્લેટોમાં એવા પદાર્થો ન હોવા જોઈએ જે નમૂના સાથે ચેડા કરે અથવા પરિણામને ખોટા બનાવે. આમાં DNA, DNases, RNases અને PCR અવરોધકો તેમજ ઘટકોનો સમાવેશ થાય છે જે પ્રતિક્રિયા દરમિયાન સામગ્રીમાંથી સંભવિત રીતે લીચ કરી શકે છે - લીચેબલ તરીકે ઓળખાતા પદાર્થો.
વપરાશકર્તા ભૂલ
વધુ નમૂનાઓ પર પ્રક્રિયા કરવામાં આવે છે, ભૂલનું જોખમ વધારે છે. તે સરળતાથી થઈ શકે છે કે નમૂનાને ખોટા જહાજ અથવા ખોટા કૂવામાં પાઈપેટ કરવામાં આવે છે. આ જોખમને કુવાઓના સરળતાથી સમજી શકાય તેવા માર્કિંગ દ્વારા નોંધપાત્ર રીતે ઘટાડી શકાય છે. ડિસ્પેન્સિંગ સ્ટેપ્સના ઓટોમેશન દ્વારા, "માનવ પરિબળ", એટલે કે, ભૂલો અને વપરાશકર્તા-સંબંધિત ભિન્નતાઓ ઓછી કરવામાં આવે છે, આમ પ્રજનનક્ષમતા વધે છે, ખાસ કરીને નાના પ્રતિક્રિયા વોલ્યુમોના કિસ્સામાં. આને વર્કસ્ટેશનમાં કાર્યરત કરવા માટે પૂરતી પરિમાણીય સ્થિરતાની પ્લેટની જરૂર છે. જોડાયેલ બારકોડ્સ વધારાની મશીન-વાંચવાની ક્ષમતા પ્રદાન કરે છે, જે સમગ્ર પ્રક્રિયા દરમિયાન નમૂના ટ્રેકિંગને સરળ બનાવે છે.
થર્મોસાયકલરનું પ્રોગ્રામિંગ
ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટનું પ્રોગ્રામિંગ સમય માંગી લે તેવું તેમજ ભૂલથી ભરેલું સાબિત થઈ શકે છે. વિવિધ પીસીઆર થર્મલ સાયકલ સુવિધાઓ આ પ્રક્રિયાના પગલાને સરળ બનાવવા અને સૌથી અગત્યનું, તેને સુરક્ષિત બનાવવા માટે એકસાથે કામ કરે છે:
સરળ કામગીરી અને સારા વપરાશકર્તા માર્ગદર્શન એ કાર્યક્ષમ પ્રોગ્રામિંગનો આધાર છે. આ પાયા પર નિર્માણ કરીને, પાસવર્ડ-સંરક્ષિત યુઝર એડમિનિસ્ટ્રેશન વ્યક્તિના પોતાના પ્રોગ્રામ્સને અન્ય વપરાશકર્તાઓ દ્વારા બદલવાથી અટકાવશે. જો બહુવિધ સાયકલર્સ (સમાન પ્રકારના) ઉપયોગમાં હોય, તો તે ફાયદાકારક છે જો એક પ્રોગ્રામને યુએસબી અથવા કનેક્ટિવિટી દ્વારા સીધા એક સાધનમાંથી બીજામાં ટ્રાન્સફર કરી શકાય. કમ્પ્યુટર સૉફ્ટવેર કમ્પ્યુટર પરના પ્રોગ્રામ્સ, વપરાશકર્તા અધિકારો અને દસ્તાવેજોના કેન્દ્રિય અને સુરક્ષિત વહીવટને સક્ષમ કરે છે.
પીસીઆર ચલાવો
દોડ દરમિયાન, ડીએનએ પ્રતિક્રિયા વાસણમાં વિસ્તૃત થાય છે, જ્યાં દરેક નમૂના સમાન, સુસંગત પ્રતિક્રિયા પરિસ્થિતિઓને આધિન હોવા જોઈએ. પ્રક્રિયા માટે નીચેના પાસાઓ સુસંગત છે:
તાપમાન નિયંત્રણ
તાપમાન નિયંત્રણમાં ઉત્તમ સચોટતા અને સાયકલ બ્લોકની એકરૂપતા એ તમામ નમૂનાઓના સમાન તાપમાન કન્ડીશનીંગ માટેનો આધાર છે. હીટિંગ અને કૂલિંગ તત્વો (પેલ્ટિયર એલિમેન્ટ્સ) ની ઉચ્ચ ગુણવત્તા, તેમજ જે રીતે આ બ્લોક સાથે જોડાયેલા છે, તે નિર્ણાયક પરિબળો છે જે "એજ ઇફેક્ટ" તરીકે ઓળખાતા તાપમાનની વિસંગતતાઓનું જોખમ નક્કી કરશે.
બાષ્પીભવન
બાષ્પીભવનને કારણે પ્રતિક્રિયા દરમિયાન વ્યક્તિગત પ્રતિક્રિયા ઘટકોની સાંદ્રતા બદલવી જોઈએ નહીં. નહિંતર, તે ખૂબ જ ઓછું શક્ય છેપીસીઆર ઉત્પાદનજનરેટ થઈ શકે છે, અથવા બિલકુલ નહીં. તેથી સુરક્ષિત સીલ સુનિશ્ચિત કરીને બાષ્પીભવન ઓછું કરવું મહત્વપૂર્ણ છે. આ કિસ્સામાં, થર્મોસાયકલનું ગરમ કરેલું ઢાંકણું અને જહાજની સીલ હાથમાં કામ કરે છે. માટે વિવિધ સીલિંગ વિકલ્પો ઉપલબ્ધ છેપીસીઆર પ્લેટ્સ (લિંક: સીલિંગ લેખ), જેમાં હીટ સીલિંગ દ્વારા શ્રેષ્ઠ સીલ પ્રાપ્ત થાય છે. અન્ય બંધ પણ યોગ્ય હોઈ શકે છે, જ્યાં સુધી સાયકલ ઢાંકણના સંપર્ક દબાણને પસંદ કરેલ સીલ સાથે સમાયોજિત કરી શકાય છે.
લાંબા ગાળે સચોટ અને પુનઃઉત્પાદન કરી શકાય તેવા પરિણામોને સુરક્ષિત રાખવા માટે પ્રક્રિયાનું માનકીકરણ કરવામાં આવ્યું છે. આમાં સાધનસામગ્રીની નિયમિત જાળવણી શામેલ છે તેની ખાતરી કરવા માટે કે તે હંમેશા સારી કાર્યકારી સ્થિતિમાં છે. તમામ ઉપભોજ્ય વસ્તુઓ ઉત્પાદિત તમામ લોટમાં સતત ઉચ્ચ ગુણવત્તાની હોવી જોઈએ અને તેમની વિશ્વસનીય ઉપલબ્ધતાની ખાતરી હોવી જોઈએ.
પોસ્ટ સમય: નવેમ્બર-29-2022