Como selar unha placa PCR

Introdución

Placas de PCR, un elemento básico do laboratorio durante moitos anos, están a ser aínda máis frecuentes no ámbito moderno a medida que os laboratorios aumentan o seu rendemento e empregan cada vez máis a automatización nos seus fluxos de traballo. Conseguir estes obxectivos preservando a precisión e integridade dos experimentos pode ser difícil. Unha das áreas comúns onde se poden introducir erros é co seladoPlacas de PCR, cunha técnica deficiente que permite a evaporación das mostras, alterando o pH e, polo tanto, alterando as funcións enzimáticas, e invitando á contaminación. Aprendendo a selar aPlaca PCRelimina correctamente estes riscos e garante resultados reproducibles.

Atopar o selo correcto para a súa placa PCR

Tapas de placas vs. Selos de película vs. Tapas
Gorrasson unha boa forma de selar o prato cun selado axustado, ao tempo que che ofrecen a flexibilidade de selar e volver selar a placa con moita facilidade sen desperdicio. Non obstante, as tapas teñen un par de inconvenientes fundamentais.

En primeiro lugar, terás que mercar a tapa específica compatible, o que fai que non sexan versátiles. Terás que asegurarte de que o tapón que elixas se axuste á placa, que depende do seu fabricante, e escoller entre cúpula ou plana en función do termociclador que utilices.

En segundo lugar, aplicar os tapóns ao prato pode ser moi repetitivo e tedioso, co risco de contaminación cruzada se se coloca o tapón incorrecto no pozo equivocado.

Aínda que os selos de película son menos flexibles en canto a eliminación e substitución, son moi versátiles xa que se adaptan a calquera tipo de placa de PCR, sen ter en conta quen é o fabricante. Simplemente pódense cortar a medida, o que os fai moi efectivos.

Outra opción é unha tapa de prato. Estes ofrecen menos protección que as tapas e os selos, e só se utilizan principalmente para cubrir a curto prazo para evitar a contaminación.

Selos de película óptica vs

Se necesitas un selo óptico, transparente ou unpelícula de papel de aluminioselar a túa placa decídese polo teu formato experimental.Películas de selado ópticoson transparentes para permitirlle observar as mostras, ao tempo que as protexen e evitan a evaporación. Tamén son especialmente útiles en experimentos de qPCR que implican facer medicións de fluorescencia moi precisas directamente desde a placa, nese caso necesitarás unha película de selado que filtre a menor fluorescencia posible. É importante asegurarse de que o selo ou tapa que está a usar teña un nivel suficientemente alto de claridade óptica para garantir que as lecturas sexan precisas.

As películas láminas son adecuadas para todas as mostras que sexan sensibles á luz ou que deban almacenarse a unha temperatura inferior a 80 °C. Por este motivo, a maioría das mostras destinadas ao almacenamento a longo prazo requirirán unha película de aluminio. As películas de folla tamén son perforables, o que é útil para examinar pozos individuais ou para transferir mostras mediante agullas. Isto pode ocorrer manualmente ou como parte dunha plataforma robótica.

Considere tamén que as substancias agresivas que inclúen ácidos, bases ou disolventes requirirán un selo que as resista, caso en que un selo de folla é probablemente máis apropiado.

Película adhesiva contra termosellado
Selos de película adhesivason moi sinxelos e de fácil aplicación. Todo o que precisa é que un usuario aplique o selo á placa e use unha ferramenta de aplicación sinxela para presionar e formar un selo axustado.

Os selados térmicos son máis avanzados, proporcionando un selado máis duradeiro que reduciu as taxas de evaporación en comparación cun selo adhesivo convencional. Esta opción é apropiada se buscas almacenar mostras a longo prazo, aínda que isto inclúe un requisito adicional para o equipo de selado de placas.

Como selar unha placa PCR

Método de selado de placas

Autoadhesivo

1. Asegúrate de traballar nunha superficie de traballo plana e estable

2. Retire a película da súa embalaxe e retire o soporte

3. Coloque coidadosamente o selo na placa, mentres se asegura de que todos os pozos estean cubertos.

4. Use unha ferramenta aplicadora para aplicar presión sobre a placa. Comeza por un extremo e vai cara ao outro, presionando uniformemente

5. Repita isto varias veces

6. Pase o seu aplicador polos pozos exteriores, para asegurarse de que estes tamén estean correctamente selados.

Selados térmicos

Os termosellados funcionan fundindo a película ata o bordo de cada pozo, coa axuda dun selado de placas. Para utilizar unha termoselladora, consulte as instrucións proporcionadas polo fabricante do equipo. Asegúrate de que o fabricante do que obteñas o teu equipo sexa respectable, xa que é moi importante que o selo sexa adecuado, eficaz e estanco.

Consellos de selado de placas

a. Ao aplicar presión ao selo, vaia en dirección horizontal e vertical para garantir un selado adecuado

b. Sempre é unha boa práctica realizar unha proba de todo o que estea facendo, e isto non é diferente co selado de placas. Proba cun prato baleiro antes de usar un con mostras.

c. Durante a proba, quita o selo e mira para ver que o adhesivo pega correctamente, sen ocos. Hai unha representación visual disto no primeiro documento de referencia. Se non selou a placa correctamente, cando quite o selo haberá ocos nos que o adhesivo non se adheriu completamente á placa.

d. Para o envío e transporte de mostras, pode considerar útil aplicar un selo de plástico na parte superior do selo de folla para unha protección adicional (especialmente contra perforacións).

e. Asegúrese sempre de que non haxa protuberancias nin engurras ao aplicar a película, xa que provocarán fugas e evaporación.