Como pipear pequenos volumes con pipetas manuais de man

A medida que se centra máis na redución de reactivos e custos, os volumes máis pequenos son de alta demanda, por exemplo, para a preparación de reaccións de PCR MasterMix ou enzimas. Pero canalizar pequenos volumes de 0,2 a 5 µl establece novos retos para a precisión e precisión de canalización. Son esenciais os seguintes puntos:

1. Tamaño de pipeta e punta: elixe sempre a pipeta co menor volume nominal posible e a punta máis pequena para manter o coxín de aire o máis pequeno posible. Ao canalizar 1 µl, por exemplo, elixe unha pipeta de 0,25 - 2,5 µL e unha punta de correspondencia en vez de unha pipeta de 1 - 10 µL.
2. Calibración e mantemento: é esencial que as súas pipetas sexan correctamente calibradas e mantidas. Os pequenos axustes e as pezas rotas nunha pipeta conducen a un aumento masivo dos valores de erro sistemático e aleatorio. Unha calibración segundo ISO 8655 debe realizarse unha vez ao ano.
3. Pipetas de desprazamento positivo: comproba se tes unha pipeta de desprazamento positivo cun rango de baixo volume no teu laboratorio. En xeral, o uso deste tipo de pipeta leva a un mellor resultado de canalización en termos de precisión e precisión que con pipetas clásicas de coxíns.
4. Intente usar volumes máis grandes: pode considerar a dilución da súa mostra para pipeta volumes maiores coa mesma cantidade na reacción final. Isto pode reducir os erros de canalización con volumes de mostra moi pequenos.

Ademais dunha boa ferramenta, o investigador debe ter unha moi boa técnica de canalización. Preste especial atención aos seguintes pasos:

1. Atención de punta: non atasque a pipeta na punta xa que isto pode danar o extremo fino que fai que o feixe líquido sexa redireccionado ou danar o orificio. Aplique só presión de luz ao conectar unha punta e use unha pipeta cun cono de punta cargado de resorte.
2. Sostendo a pipeta: Non manteña a pipeta na man mentres espera a centrífuga, o ciclista, etc. O interior da pipeta quentará e levará o coxín de aire para ampliar o resultado de desviacións do volume establecido ao pipetear.
3. Pre-mudado: a humidificación do aire dentro da punta e a pipeta prepara a punta para a mostra e evita a evaporación ao aspirar o volume de transferencia.
4. Aspiración vertical: Isto é moi importante cando se manexa pequenos volumes para evitar o efecto capilar que se produce cando a pipeta se mantén nun ángulo.
5. Profundidade de inmersión: mergulla a punta o menos posible para evitar que o líquido entra na punta debido ao efecto capilar. Regra do polgar: canto máis pequena sexa a punta e o volume, menor é a profundidade da inmersión. Recomendamos un máximo de 2 mm ao canalizar pequenos volumes.
6. Dispensación a 45 ° ángulo: o fluxo óptimo do líquido está garantido cando a pipeta se mantén nun ángulo de 45 °.
7. Contacto coa parede do buque ou a superficie líquida: os pequenos volumes só se poden dispensar correctamente cando se mantén a punta contra a parede do buque ou inmersa en líquido. Incluso a última caída da punta pódese dispensar con precisión.
8. Bloqueo: un golpe é obrigatorio despois de dispensar volumes baixos para prescindir da última gota de líquido presente na punta. O golpe tamén se debe realizar contra a parede do buque. Teña coidado de non introducir burbullas de aire á mostra ao realizar un golpe na superficie líquida.