Eadhon ged a bhiodh aon mhoolecule den teamplaid gu leòr, mar as trice suimean gu mòr de DNA a chleachdadh airson DNA Classic, mar eisimpleir, suas ri 1 μg de DNA gnè DNA agus cho beag ri 1 pg de phlasmid DNA. Tha an sùim as fheàrr an urra gu ìre mhòr air an àireamh de leth-bhreacan den t-sreath targaid, a bharrachd air a thaobh iom-fhillteachd.
Mura h-eil mòran teamplaid air a chleachdadh, thèid àrdachadh co-ionann anns an àireamh de chearcaill leudaichte gus an tomhas gu leòr de bhathar fhaighinn. Chan eil taq Polymererase a tha air a chleachdadh airson a 'mhòr-chuid de dheuchainnean pcr a tha a' nochdadh gnìomh ceartachaidh (3'-5 'Exonuclease); Mar sin, chan urrainnear mearachdan a bhuineasachadh anns na leudachadh a cheartachadh. Is e an àireamh as àirde a bhios ann, mar as cumanta a bhios a 'mheudaich de thoradh lochan-làidir. Ma tha, air an làimh eile, tha na tha de theamplaid ro àrd, coltachd prìomhachasan a bha a 'suirghe, chan eil iad a bharrachd air cruthachadh drùchran primer, a bhios a' meudachadh, a bheir a-mach am meud fo-thoraidhean. Ann an iomadh cùis, tha DNA iomallach bho chultaran cealla no bho meanbh-bheairt agus an uairsin air a chleachdadh mar teamplaid PCR. Às deidh glanadh, feumar dùmhlachd an DNA a dhearbhadh gus an tomhas a dhèanamh air an tomhas-lìonaidh a tha a dhìth air suidheachadh PCR. Fhad 's a dh' fhaodadh a bhith a 'toirt buaidh air Anagarophoromoresis a bhith a' toirt seachad tuairmse, tha an dòigh seo fada bho ceart. Chaidh UV-VIST VECTrophophepetry a stèidheachadh mar an ìre òir airson a bhith a 'tomhas Acids Nuccigeach; Tha na modhan dìreach agus sgiobalta seo a 'ceannach a-steach don shampall aig 260 nm, agus tha fòcas air a thomhas le cuideachadh bho fheart tionndaidh.
Ma tha dùmhlachd DNA gu math ìosal, ge-tà (<1 μg / ml DSDNA), no ma tha e air a thruailleadh ann an raon 260 NM (Talainn, Talainn), ruigidh an dòigh seo a chuingealachaidhean. A thaobh dùmhlachd glè ìosal, is ann a bhios na leughaidhean a 'fàs ro mhearachdach gu bhith feumail, agus bidh truaillidhean a' leantainn gu cus cus luach. Anns a 'chùis seo, dh' fhaodadh tomhas a bhith a 'cleachdadh fluorecence a thoirt seachad. Tha an dòigh seo stèidhichte air cleachdadh dath fluorescent a tha a 'ceangal gu sònraichte ri DS faire agus dathan niuclasach air a thomhas, agus bidh e a' leigeil a-mach solas tonn-tonn math nas àirde. An seo, tha dian an t-chomharra fluorescent co-rèireach ri na tha de DNA, agus airson a bhith a 'dearbhadh an dùmhlachd tha e air a mheasadh a dhearbhadh a thaobh lùb àbhaisteach. Tha buannachdan an dòigh seo a 'gabhail fois air sònrachadh a' cheangail, a thig a-mach a 'bhuaidh a-muigh a chaidh a thoirt a-steach le truailleadh, a bharrachd air a bhith air an comas a thàinig a-mach glè ìosal de DNA a lorg. Tha freagarrachd aon chuid an aon dòigh gu ìre mhòr aig a 'mhòr-chuid air dùmhlachd sampall agus purrachd; Ann an iomadh cùis is dòcha gum bi e comasach a bhith air a dhèanamh a-steach an dà dhòigh ann an co-shìnte a chur an sàs.
Ùine a 'phuist: nov-30-2022