Cad is cóir a chur san áireamh agus meascáin PCR á bpíbeáil?

Le haghaidh imoibrithe aimpliúcháin rathúla, is gá go mbeadh na comhpháirteanna imoibrithe aonair i láthair sa tiúchan ceart i ngach ullmhúchán. Ina theannta sin, tá sé tábhachtach nach dtarlóidh aon éilliú.

Go háirithe nuair is gá go leor frithghníomhartha a shocrú, tá sé bunaithe chun máistir-mheascán mar a thugtar air a ullmhú in ionad gach imoibrí a phíobáil ar leithligh isteach i ngach soitheach. Tá meascáin réamhchumraithe ar fáil ar bhonn tráchtála, agus ní chuirtear ach comhpháirteanna a bhaineann go sonrach le samplaí (primer) agus uisce leis. De rogha air sin, is féidir an máistir-mheascán a ullmhú leat féin. Sa dá leagan, déantar an meascán a dháileadh ar gach soitheach PCR gan teimpléad agus cuirtear an sampla DNA aonair leis féin ag an deireadh.

Tá roinnt buntáistí ag baint le húsáid máistir-mheascán: Ar dtús, laghdaítear líon na gcéimeanna píbéireachta aonair. Ar an mbealach seo, íoslaghdaítear an baol earráidí úsáideora le linn píobaireachta agus an baol éillithe agus, ar ndóigh, sábhálfar am. I bprionsabal, tá an cruinneas píobaireachta níos airde freisin, ós rud é go bhfuil méideanna níos mó dáileog. Is furasta é seo a thuiscint agus sonraí teicniúla na bpípéad á seiceáil: Dá lú an méid dáileog, is airde is féidir na diallais a bheith . Tá tionchar dearfach ag an bhfíric go dtagann na hullmhúcháin go léir ón soitheach céanna ar aonchineálacht (má tá sé measctha go maith). Feabhsaíonn sé seo in-atáirgtheacht na dturgnamh freisin.

Agus an máistir-mheascán á ullmhú, ba cheart ar a laghad 10 % de thoirt breise a chur leis (eg má tá 10 n-ullmhú ag teastáil, ríomh ar bhonn 11), ionas go líontar fiú an soitheach deiridh i gceart. Ar an mbealach seo, is féidir míchruinneas píbéireachta (beag), agus éifeacht an chaillteanais sampla nuair a dhéantar réitigh ina bhfuil glantach a dháileadh a chúiteamh. Tá glantaigh i dtuaslagáin einsíme mar pholaiméiráis agus máistir-mheascáin, rud is cúis le foirmiú cúr agus iarmhair ar an dromchla istigh de ghnáth.leideanna pípéad.

Ag brath ar an iarratas agus ar an gcineál leachta a bheidh le dáileadh, ba cheart an teicníc cheart píopaithe (1) a roghnú agus an trealamh cuí a roghnú. Maidir le réitigh ina bhfuil glantaigh, moltar córas díláithrithe díreach nó leideanna pípéad “coimeád íseal” mar mhalairt ar phípéid aer-mhaolú. Éifeacht naLeid ACE PIPETTEbunaithe ar dhromchla go háirithe hidreafóbach. Ní fhágann leachtanna ina bhfuil glantaigh scannán iarmhar ar an taobh istigh agus lasmuigh, ionas gur féidir an caillteanas réitigh a íoslaghdú.

Seachas dáileog cruinn na gcomhpháirteanna go léir, tá sé tábhachtach freisin nach dtarlóidh aon éilliú ar na hullmhúcháin. Ní leor earraí inchaite ardíonachta a úsáid, mar is féidir leis an bpróiseas pípéadaithe i bpípéad mhaolú aer aerasóil a fhanann sa phípéad a tháirgeadh. Is féidir an DNA a d’fhéadfadh a bheith san aerasól a aistriú ó shampla amháin go dtí an chéad sampla eile sa chéim phíopála seo a leanas agus mar sin éilliú a bheith mar thoradh air. Féadfaidh na córais díláithrithe díreacha thuasluaite an riosca seo a íoslaghdú freisin. Maidir le pípéid aer-mhaolúine is ciall leideanna scagaire a úsáid chun an cón pípéad a chosaint trí splancscáileán, aerasóil agus bithmhóilíní a choinneáil.


Am postála: Dec-06-2022