CrioóimialÚsáidtear iad go coitianta le haghaidh stóráil chrióigineach línte cille agus ábhair bhitheolaíocha chriticiúla eile, i ndícheall atá líonta le nítrigin leachtach.

Tá roinnt céimeanna i gceist le caomhnú rathúil na gceall i nítrigin leachtach. Cé go bhfuil an bunphrionsabal ina reo mall, braitheann an teicníc bheacht a úsáidtear ar an gcineál cille agus ar an gcrioprotectant a úsáidtear. Tá roinnt cúinsí sábháilteachta agus dea -chleachtais le cur san áireamh agus cealla á stóráil ag teochtaí ísle den sórt sin.

Tá sé mar aidhm ag an bpost seo forbhreathnú a thabhairt ar an gcaoi a stóráiltear crioóim i nítrigin leachtach.

Cad iad Cryovials

Is vials beaga, uasteorannaithe iad na crioóimíní atá deartha chun samplaí leachtacha a stóráil ag teochtaí an -íseal. Cinntíonn siad nach dtagann cealla a chaomhnaítear i gcriópotectant i dteagmháil dhíreach leis an nítrigin leachtach, ag íoslaghdú an riosca bristeacha ceallacha agus go mbaineann siad tairbhe as an éifeacht fhuaraithe a bhaineann le nítrigin leachtach.

Is iondúil go mbíonn na vials ar fáil i raon méideanna agus dearaí - is féidir iad a shnáithiú go hinmheánach nó go seachtrach le íochtair árasán nó chothromaithe. Tá formáidí steiriúla agus neamh-steiriúla ar fáil freisin.

Cé a úsáideannCyrovialschun cealla a stóráil i nítrigin leachtach

Baineann raon de NHS agus de shaotharlanna príobháideacha, chomh maith le hinstitiúidí taighde a dhíríonn ar bhaincéireacht fola corda, ar bhitheolaíocht chill epithelial, ar imdhíoneolaíocht agus ar bhitheolaíocht gascheall crioróga chun cealla cryopreserve.

I measc na gceall a chaomhnaítear ar an mbealach seo tá cealla B agus T, cealla CHO, gas agus cealla progenitor hematopoietic, hibridomas, cealla stéigeach, macrophages, gas agus cealla progenitor mesenchymal, monocytes, myeloma, cealla NK agus gaschealla pluripotent.

Forbhreathnú ar conas crioóim a stóráil i nítrigin leachtach

Próiseas is ea cryopreservation a chaomhnaíonn cealla agus tógálacha bitheolaíocha eile trí iad a fhuarú go teochtaí an -íseal. Is féidir cealla a stóráil i nítrigin leachtach ar feadh na mblianta gan inmharthanacht cille a chailleadh. Is imlíne é seo ar na nósanna imeachta a úsáidtear.

Ullmhúchán cealla

Athróidh an modh beacht chun samplaí a ullmhú ag brath ar an gcineál cille, ach go ginearálta, bailítear agus lártheifnítear na cealla chun millíní cille-saibhir a fhorbairt. Athchóirítear an millín seo ansin sa supernatant measctha le cryoprotectant nó le meán caomhnaithe.

Meán caomhnaithe

Úsáidtear an meán seo chun cealla a chaomhnú sna timpeallachtaí ísealteochta a chuirfear faoi réir iad trí chosc a chur ar fhoirmiú criostail intracellular agus extracellular agus mar sin bás cille. Is é an ról atá acu ná timpeallacht shábháilte, chosanta a sholáthar do chealla agus d'fhíocháin le linn na bpróiseas reo, stórála agus leá.

Déantar meán amhail plasma reoite úr (FFP), tuaslagán plasmalyte heparinised nó tuaslagáin saor ó shearm, saor ó chomhpháirt ainmhithe a mheascadh le cryoprotectants amhail sulphoxide dimethyl (DMSO) nó gliocról.

Déantar an millín samplach ath-liquied a aliquated i gcréamaití polapróipiléine amhailCuideachta Bithleighis Suzhou Ace Vials Stórála Cryogenic.

Tá sé tábhachtach gan ró -líonadh a dhéanamh ar na crioróga mar go méadóidh sé seo an baol go dtarlóidh scoilteadh agus go scaoilfear an t -ábhar (1).

Ráta Reo Rialaithe

Go ginearálta, baintear úsáid as ráta reo mall rialaithe chun cealla a chaomhnú go rathúil.

Tar éis samplaí a aliquoted i vials crióigineacha, cuirtear iad ar oighear fliuch nó i gcuisneoir 4 ℃ agus tosaítear ar an nós imeachta reo laistigh de 5 nóiméad. Mar threoir ghinearálta, déantar cealla a fhuarú ag ráta -1 go -3 in aghaidh an nóiméid (2). Baintear é seo amach ag baint úsáide as with ríomhchláraithe nó trí vials a chur i mbosca inslithe a chuirtear i reoiteoir ráta rialaithe –70 ° C go –90 ° C.

Aistriú chuig nítrigin leachtach

Aistrítear na vials crióigineacha reoite ansin chuig umar nítrigine leachtach ar feadh tréimhsí éiginnte a choinnítear teocht níos lú ná -135 ℃.

Is féidir na teochtaí ultra-íseal seo a fháil trí thumoideachas sa nítrigin chéim leacht nó gaile.

Céim leachtach nó gaile?

Is eol go gcoinníonn stóráil i nítrigin chéim leachtach an teocht fhuar le comhsheasmhacht iomlán, ach is minic nach moltar é ar na cúiseanna seo a leanas:

• An gá le méideanna móra (doimhneacht) nítrigine leachtach, is guais fhéideartha í. Is fíor -riosca é dónna nó asphyxiation mar gheall air seo.
• Cásanna doiciméadaithe tras-éillithe ag gníomhairí tógálacha amhail Aspergillus, Hep B agus leathadh víreasach tríd an meán nítrigine leachtach (2,3)
• An poitéinseal a bhaineann le nítrigin leachtach sceitheadh ​​isteach sna vials le linn tumoideachais. Nuair a bhaintear é ó stóráil agus é a théamh go teocht an tseomra, leathnaíonn an nítrigin go tapa. Dá bhrí sin, d'fhéadfadh an vial a bheith ag briseadh nuair a bhaintear é as stóráil nítrigine leachtach, rud a chruthaíonn guais ó smionagar eitilte agus nochtadh don ábhar (1, 4).

Ar na cúiseanna seo, is iondúil go mbíonn stóráil teochta ultra-íseal i nítrigin chéim gaile. Nuair a chaithfear samplaí a stóráil sa chéim leachtach, ba chóir feadánra speisialaithe Cryoflex a úsáid.

Is é an míbhuntáiste atá leis an gcéim gaile ná gur féidir le grádán teochta ingearach tarlú as a dtagann luaineachtaí teochta idir -135 ℃ agus -190 ℃. Éilíonn sé seo monatóireacht chúramach agus díograiseach ar na leibhéil nítrigine leachtach agus ar na héagsúlachtaí teochta (5).

Molann go leor monaróirí go bhfuil crioóimí oiriúnach le haghaidh stórála síos go -135 ℃ nó le húsáid sa chéim gaile amháin.

Le leá do chealla cryopreserved

Tá an nós imeachta leáite strusmhar do chultúr reoite, agus tá gá le láimhseáil agus teicníc chuí chun inmharthanacht, aisghabháil agus feidhmiúlacht na gceall a chinntiú. Braithfidh na prótacail leá cruinn ar chineálacha sonracha cille. Mar sin féin, meastar go bhfuil leá tapa caighdeánach do:

• Aon tionchar ar aisghabháil cheallach a laghdú
• Cuidigh leis an am nochta a laghdú do na tuaslagáin atá i láthair sna meáin reo
• Íoslaghdaigh aon damáiste trí athchriostalú oighir

Is iondúil go n -úsáidtear folcadáin uisce, folcadáin bead, nó ionstraimí uathoibrithe speisialaithe chun samplaí a leá.

Is minic a dhéantar 1 líne chill a leá ag an am ar feadh 1-2 nóiméad, trí shuaitheadh ​​go réidh i ndabhach uisce 37 ℃ go dtí nach bhfuil ach beagán oighir fágtha sa vial sula nitítear iad i meán fáis réamh-mheasta.

I gcás roinnt cealla ar nós suthanna mamacha, tá téamh mall riachtanach chun iad a mharthanas.

Tá na cealla réidh anois le haghaidh cultúr na gceall, aonrú cille, nó i gcás gaschealla haematopoietic - staidéir inmharthanachta chun sláine na ngaschealla deontóra a ráthú roimh theiripe myeloablative.

Is gnáthchleachtas é a bheith ag glacadh le hailtí beaga den sampla réamhshocraithe a úsáidtear chun comhaireamh cille a dhéanamh chun tiúchan cille a chinneadh le haghaidh plating sa chultúr. Ansin is féidir leat torthaí na nósanna imeachta aonraithe cille a mheas agus inmharthanacht na gceall a chinneadh.

Cleachtais is Fearr chun Cryovials a stóráil

Braitheann caomhnú rathúil samplaí a stóráiltear i gcriosóga ar go leor eilimintí sa phrótacal lena n -áirítear stóráil chuí agus coimeád taifead.

• Cealla scoilte idir suíomhanna stórála- Má cheadaíonn méideanna, cealla scoilte idir vials agus iad a stóráil in áiteanna ar leith chun an baol go gcaillfí sampla a laghdú mar gheall ar theipeanna trealaimh.
• Cosc a chur ar thras-éilliú-Roghnaigh vials crióigineacha steiriúla aon-úsáide nó autoclave roimh úsáid ina dhiaidh sin
• Úsáid vials meánmhéide do do chealla- Tagann vials i raon méideanna idir 1 agus 5mls. Seachain vials ró -líonadh chun an baol scoilteadh a laghdú.
• Roghnaigh vials crióigineacha inmheánacha nó seachtracha snáithithe go seachtrach.
• Cosc a chur ar sceitheadh-Bain úsáid as rónta dé-insteallta múnlaithe isteach sa chaipín scriú nó i bhfáinní O chun cosc ​​a chur ar sceitheadh ​​agus ar éilliú.
• Úsáid barrachóid 2D agus vials lipéid- Chun inrianaitheacht a chinntiú, cuireann vials le limistéir mhóra scríbhneoireachta ar chumas gach vial a bheith lipéadaithe go leor. Is féidir le barrachóid 2D cabhrú le bainistíocht stórála agus le coimeád taifead. Tá caipíní códaithe datha úsáideach le haghaidh sainaithint níos éasca.
• Cothabháil stórála leordhóthanach- Chun a chinntiú nach gcailltear cealla, ba cheart do shoithí stórála monatóireacht leanúnach a dhéanamh ar na leibhéil nítrigine teochta agus leachtach. Ba chóir aláraim a fheistiú chun úsáideoirí a chur ar an eolas faoi earráidí.

Réamhchúraimí Sábháilteachta

Is gnáthchleachtas é nítrigin leachtach i dtaighde nua -aimseartha ach tá an baol ann go dtarlódh gortú tromchúiseach má úsáidtear é go mícheart.

Ba cheart trealamh cosanta pearsanta cuí (PPE) a chaitheamh chun an baol frostbite, dónna agus eachtraí díobhálacha eile a íoslaghdú agus nítrigin leachtach á láimhseáil. Cuir ort

• Lámhainní crióigineacha
• Cóta saotharlainne
• Tionchar Sciath Aghaidh Iomlán Resistant a chlúdaíonn an muineál freisin
• Bróga toe dúnta
• Naprún plaisteach splancscáileán

Ba chóir cuisneoirí nítrigine leachtacha a chur i gceantair atá aeráilte go maith chun an baol asphyxiation a íoslaghdú-éalú ó nítrigine agus ocsaigin atmaisféarach a dhí-áitiú. Ba chóir go mbeadh córais aláraim ocsaigine íseal ag siopaí móra toirte.

Tá obair i mbeirteanna nuair a bhíonn nítrigin leachtach á láimhseáil idéalach agus ba cheart cosc ​​a chur ar a úsáid lasmuigh de ghnáthuaireanta oibre.

Cryovials chun tacú le do shreabhadh oibre

Tairgeann Suzhou Ace Biomedical Company rogha leathan táirgí a fhreastalaíonn ar do riachtanais caomhnaithe do chineálacha éagsúla cealla. Cuimsíonn an phunann raon feadán go maith mar raon de chriofóga steiriúla.

Is iad ár gcriosóga:

• Caipín scriú saotharlainne 0.5ml 1.5ml 2.0ml vials crióigineacha crióigineacha criótair chónúil bun le gasket

  ● 0.5ml, 1.5ml, sonraíocht 2.0ml, le sciorta nó gan sciorta
  ● Tá dearadh cónúil nó féinsheasmhach, steiriúil nó neamh-steirile ar fáil araon
  ● Déantar feadáin caipín scriú as polapróipiléin grád leighis
  ● Is féidir vials pp cryotube a reo agus a leá arís agus arís eile
  ● Is féidir leis an dearadh caipín seachtrach an dóchúlacht éillithe a laghdú le linn cóireála samplacha.
  ● Caipín scriú feadáin chrióigineach snáitheanna scriú uilíoch le húsáid
  ● Feadáin oiriúnach do na rótair is coitianta
  ● Feadáin O-fáinne feadán crióigineach oiriúnach do chaighdeánach 1-orlach agus 2-orlach, 48well, 81well, 96well agus boscaí reoiteora 100well
  ● Autoclavable go 121 ° C agus saor in aisce go -86 ° C.

  Cuid Uimh	Ábhar	Toirt	CaipDath	Ríomhairí pearsanta/Mála láimhe	Málaí/cás
  ACT05-BL-N	PP	0.5ml	Dubh, buí, gorm, dearg, corcra, bán	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ml	Dubh, buí, gorm, dearg, corcra, bán	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ml	Dubh, buí, gorm, dearg, corcra, bán	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ml	Dubh, buí, gorm, dearg, corcra, bán	500	10