Áirítear le caighdeánú na bpróiseas a leas iomlán a bhaint agus a mbunú agus a gcomhchuibhiú ina dhiaidh sin, rud a cheadaíonn feidhmíocht is fearr fadtéarmach-neamhspleách ar an úsáideoir. Cinntíonn caighdeánú torthaí ardchaighdeáin, chomh maith lena n-in-atáirgtheacht agus a n-inchomparáideacht.
Is é an sprioc atá ag PCR (clasaiceach) ná toradh iontaofa agus inatáirgthe a ghiniúint. Maidir le hiarratais áirithe, toradh anTáirge PCRábhartha freisin. Maidir leis na frithghníomhartha seo, ní mór a bheith cúramach chun a chinntiú nach gcuirtear isteach ar shamplaí agus go bhfanann an sreabhadh oibre PCR seasmhach. Go sonrach, is ionann é seo agus íoslaghdú a dhéanamh ar thabhairt isteach truaillithe a bhféadfadh torthaí dearfacha dearfacha nó bréagacha diúltacha a bheith mar thoradh orthu nó fiú bac a chur ar an imoibriú PCR. Ina theannta sin, ba cheart go mbeadh na coinníollacha imoibriúcháin chomh mar an gcéanna agus is féidir do gach sampla aonair laistigh de rith agus go mbeadh siad inaistrithe chuig imoibrithe ina dhiaidh sin (den mhodh céanna). Tagraíonn sé seo do chomhdhéanamh na n -imoibrithe chomh maith leis an gcineál rialaithe teochta sa rothaí. Tá earráidí úsáideora, ar ndóigh, le seachaint oiread agus is féidir.
Anseo thíos, léireoimid na dúshláin a thagann chun cinn le linn ullmhúcháin agus le linn rith PCR - agus na cuir chuige maidir le réitigh atá ann maidir le hionstraimí agus tomhaltáin a úsáidtear chun na sreafaí oibre PCR a chaighdeánú.
Ullmhúchán imoibrithe
Cuimsíonn dáileadh na gcomhpháirteanna imoibriúcháin i PCR-soithí, nó i bplátaí, faoi seach, dúshláin iomadúla nach mór a shárú:
Coinníollacha imoibriúcháin
Tá an dáileog bheacht agus bheacht de na comhpháirteanna aonair fíor -riachtanach agus tú ag díriú ar na coinníollacha imoibriúcháin is mar an gcéanna is féidir. Chomh maith le teicníc píopaí maith, tá sé ríthábhachtach an uirlis cheart a roghnú. Is minic a bhíonn substaintí i máistir-mháistir PCR a mhéadaíonn slaodacht nó a ghineann cúr. Le linn an phróisis píopaí, bíonn fliuchadh suntasach ar anLeideanna Pípéad, rud a laghdaíonn cruinneas píopaí. Is féidir le húsáid córas dáiliúcháin dírí nó leideanna pípéad malartacha nach bhfuil chomh seans maith go bhfliuchfaidh siad cruinneas agus cruinneas an phróisis píopaí.
Éilliú
Le linn an phróisis dáiliúcháin, gintear aerasóil a fhéadann, má cheadaítear dóibh teacht ar an taobh istigh den phípéad, sampla eile a thruailliú le linn na chéad chéime eile. Is féidir é seo a chosc trí úsáid a bhaint as leideanna scagtha nó trí chórais díláithrithe dhíreacha.
Tomhaltáin marleideanna, ní féidir le soithí agus plátaí a úsáidtear i sreabhadh oibre PCR substaintí a chur i gcontúirt an sampla nó a dhéanann an toradh a fhalsú. Ina measc seo tá DNA, DNASES, RNASES agus coscairí PCR, chomh maith le comhpháirteanna a d'fhéadfadh a bheith ina n -ábhar ón ábhar le linn an imoibriúcháin - substaintí ar a dtugtar láiste.
Earráid Úsáideora
Dá mhéad samplaí a phróiseáiltear, is ea is airde an riosca earráide. Is féidir leis tarlú go héasca go ndéantar sampla a chur isteach sa soitheach mícheart nó leis an mícheart mícheart. Is féidir an riosca seo a laghdú go mór trí mharcáil na toibreacha a aithint go héasca. Trí uathoibriú na gcéimeanna a dháileadh, déantar an “fachtóir daonna”, ie, earráidí agus athruithe a bhaineann leis an úsáideoir a íoslaghdú, rud a mhéadaíonn in-atáirgtheacht, go háirithe i gcás méideanna imoibriúcháin beaga. Éilíonn sé seo go n -úsáidfear plátaí de chobhsaíocht thoiseach leordhóthanach i stáisiún oibre. Soláthraíonn barrachóid atá ceangailte le hinléiteacht bhreise meaisín, a shimplíonn rianú samplacha i rith an phróisis iomláin.
Clárú an Teirmeachycler
Is féidir le clárú ionstraim a bheith an-íditheach chomh maith le hearráidí. Oibríonn gnéithe éagsúla Cycler Teirmeach PCR le chéile chun an chéim próisis seo a shimpliú agus, níos tábhachtaí fós, chun é a dhéanamh sábháilte:
Tá oibriú éasca agus treoir mhaith úsáideora mar bhonn le cláir éifeachtúla. Ag tógáil ar an bhfondúireacht seo, cuirfidh riarachán úsáideora atá cosanta ag pasfhocal cosc ar a chláir féin a bheith á n-athrú ag úsáideoirí eile. Má tá ilchiochtaí (den chineál céanna) in úsáid, tá sé tairbheach más féidir clár a aistriú go díreach ó ionstraim amháin go hionstraim eile trí USB nó nascacht. Cuireann bogearraí ríomhaireachta ar chumas riarachán lárnach agus slán clár, cearta úsáideora agus doiciméid ar ríomhaire.
Rith PCR
Le linn an rith, méadaítear DNA sa soitheach imoibriúcháin, áit ar cheart gach sampla a chur faoi réir coinníollacha imoibriúcháin comhsheasmhacha comhsheasmhacha. Tá na gnéithe seo a leanas ábhartha don phróiseas:
Rialú teochta
Is iad cruinneas den scoth i rialú teochta agus aonchineálacht an bhloic cycler an bunús le haghaidh riochtú teochta na samplaí go léir. Is iad na tosca cinnteoireachta a chinnfidh an baol go dtarlóidh neamhréireachtaí teochta ar a dtugtar an “éifeacht imeall” ar ardchaighdeán na n -eilimintí téimh agus fuaraithe (eilimintí peltier), chomh maith leis an mbealach ina bhfuil siad seo ceangailte leis an mbloc
Galú
Níor chóir go n -athródh comhchruinnithe na gcomhpháirteanna imoibriúcháin aonair le linn an imoibrithe mar gheall ar ghalú. Seachas sin, is beag an rud é sinTáirge PCRis féidir é a ghiniúint, nó gan aon cheann ar chor ar bith. Dá bhrí sin tá sé ríthábhachtach galú a íoslaghdú trí shéala slán a chinntiú. Sa chás seo, lid téite an teirmeachycler agus séala an tsoithigh ag obair ar láimh. Tá roghanna éagsúla ina saothraítear rónta ar fáil le haghaidhPlátaí PCR (Nasc: Airteagal Séalaithe), trína mbaintear an séala is fearr amach trí shéalú teasa. D'fhéadfadh dúnadh eile a bheith oiriúnach freisin, chomh fada agus is féidir brú teagmhála an chiogáin a choigeartú go dtí an séala roghnaithe.
Tá caighdeánú próisis i bhfeidhm chun torthaí cruinne agus inatáirgthe a chosaint san fhadtéarma. Áirítear leis seo cothabháil rialta an trealaimh chun a chinntiú go bhfuil sé i riocht maith oibre i gcónaí. Ba chóir go mbeadh ardchaighdeán comhsheasmhach ar fud na gcrann a tháirgtear go comhsheasmhach i ngach tomhaltán, agus go gcaithfear a n -infhaighteacht iontaofa a ráthú.
Am Post: Samhain-29-2022